• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    青錢柳三萜酸對高糖所致的胰島α細(xì)胞胰島素抵抗的影響

    2018-05-05 06:29:34王依婷趙夢鴿盛雪萍蔣翠花殷志琦
    中國藥科大學(xué)學(xué)報 2018年2期
    關(guān)鍵詞:高血糖素青錢柳三萜

    王依婷,趙夢鴿,盛雪萍,張 健,蔣翠花*,殷志琦

    (1中國藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室&天然藥物活性組分與藥效國家重點實驗室,南京210009;2南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,南京210028;3江蘇省中醫(yī)藥研究院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實驗室,南京210028)

    2型糖尿?。╰ype 2 diabetes,T2DM)是一種以高血糖為特征的慢性代謝性疾病,可引發(fā)腎功能衰竭、心臟病發(fā)作、失明、下肢壞疽等并發(fā)癥[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織最新報告統(tǒng)計,2014年全球約有4.22億糖尿病患者,其中T2DM患者超過90%[2]。“雙激素異常假說”認(rèn)為糖尿病的主要病因不僅是胰島素不足,也與胰高血糖素的相對或絕對過多有關(guān)[3-4]。而胰高血糖素分泌過多的原因之一是α細(xì)胞的胰島素抵抗。在高糖、炎癥等持續(xù)刺激下,胰島α細(xì)胞可能會產(chǎn)生原發(fā)性的胰島素抵抗,胰島素受體-1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)及其胰島素信號通路中下游蛋白激酶B(Akt)的表達(dá)明顯降低,與此同時外源性胰島素對胰高血糖素分泌的抑制作用明顯減弱,胰高血糖素分泌異常增加,引起血糖急劇上升[5-7]。因此通過干預(yù)IRS-1/PI3K/Akt信號通路改善α細(xì)胞胰島素抵抗可能是治療T2DM的有效途徑之一。

    青錢柳(Cyclocarya paliurus)為胡桃科青錢柳屬植物,是我國特有物種[8]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,青錢柳具有降血糖、降血脂等功效[9-12]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),青錢柳葉富含三萜酸部位可通過影響小鼠脂肪組織中IRS-1/PI3K/Akt信號通路傳導(dǎo)而改善胰島素抵抗,其對胰島α細(xì)胞胰島素抵抗是否具有調(diào)節(jié)作用有待研究[13]。本文擬采用高糖誘導(dǎo)小鼠胰高糖素瘤細(xì)胞株(αTC1-6)建立胰島素抵抗細(xì)胞模型,探究青錢柳三萜酸對胰島α細(xì)胞胰高血糖素分泌的影響及其可能的干預(yù)機(jī)制[14]。

    1 材 料

    1.1 試 劑

    DMEM培養(yǎng)基(低糖)、HEPES[4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸]、雙抗(青霉素和鏈霉素)、MEM非必需氨基酸(美國Gibco公司);胎牛血清(美國ScienCell公司);胰蛋白酶-EDTA消化液、噻唑蘭MTT、PBS溶液(江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司);二甲基亞砜DMSO、RIPA裂解液、PMSF、渥曼青霉素、Anti-Glucagon antibody(美國Cell Signaling Technology公司);KRBH緩沖液(廣州沛瑜生物制品有限公司);胰島素(美國 Sigma公司);Trizol Reagent(美國Life Technologies公司);葡萄糖檢測試劑盒(上海榮盛生物藥業(yè)有限公司);胰高血糖素ELISA試劑盒(美國R&D公司);引物、DEPC水(上海捷瑞生物工程有限公司);SYBR Green Realtime PCR Master Mix、ReverTra Ace qPCR RTMaster Mix with gDNA Remover[東洋紡(上海)生物科技有限公司];其他試劑均為市售分析純。

    1.2 儀 器

    倒置熒光顯微鏡(德國 Carl Zeiss公司);Microfuge 22R臺式微量冷凍離心機(jī)(美國Beckman Coulter公司);恒溫干燥箱Synergy H1多功能酶標(biāo)儀(美國 Biotek公司);QuantStudio?Dx Real-Time PCR循環(huán)儀;S1000 PCR熱循環(huán)儀(美國Bio-Rad公司)。

    1.3 藥 物

    青錢柳采自南京林業(yè)大學(xué)(GPS坐標(biāo):N32°04′46.95″,E118°48′47.40″),由中國藥科大學(xué)中藥資源與開發(fā)教研室秦民堅教授鑒定為Cyclocarya paliurus(Batal)Iljinskaja。樣本保存于中國藥科大學(xué)天然藥化教研室(No.L20100033)。取青錢柳干燥粉末2.5 kg用80%乙醇回流提?。?0 L×3,每次2 h)。合并提取物,減壓濃縮無醇味后加適量水混懸,用石油醚脫脂并用氯仿分離,得到氯仿部位提取物171.9 g。取部分氯仿提取物用3%NaOH水溶液提取后,水相部分用5%HCl溶液反復(fù)萃取3次,得到三萜酸富集部位84.7 g(得率為3.39%)。

    1.4 細(xì)胞株

    小鼠胰高糖素瘤細(xì)胞株αTC1-6,購買自美國ATCC細(xì)胞庫。

    2 方 法

    2.1 細(xì)胞胰島素抵抗模型建立

    2.1.1 高糖對αTC1-6細(xì)胞毒性的影響 將對數(shù)生長期αTC1-6細(xì)胞消化后,以每孔7.5×103個細(xì)胞的密度接種于96孔板中,細(xì)胞貼壁后將含有11 mmol/L葡萄糖的培養(yǎng)基換成含有 5.5、25、30和33 mmol/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基,分別培養(yǎng)1、3、5和7 d后,每孔加入5 mg/mLMTT 20μL,孵育4 h,吸去上清液,每孔加入DMSO溶液150μL,振蕩10 min,570 nm處測定吸收度(A)。

    2.2.2 高糖對αTC1-6細(xì)胞胰高血糖素分泌的影響 取對數(shù)生長期αTC1-6細(xì)胞,以每毫升2.5×105個細(xì)胞的密度接種于12孔板中,細(xì)胞貼壁后分別給予含有5.5、25、30和33 mmol/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基,分別培養(yǎng)1、3、5和 7 d,用 ELISA試劑盒測定上清液中的胰高血糖素含量。

    2.3 TAE對αTC1-6細(xì)胞活力的影響

    待αTC1-6細(xì)胞生長密度達(dá)到85%~90%時,按照每孔7.5×103個細(xì)胞的密度接種于96孔板中,細(xì)胞貼壁后吸去培養(yǎng)基,加入不完全DMEM培養(yǎng)基(11 mmol/L)和待測藥物,藥物的質(zhì)量濃度分別為1、2、5、10、15、20、25和 30μg/mL。加藥孵育 24 h后,方法同“2.1.1”,測定MTT,計算細(xì)胞活力。

    2.4 TAE對αTC1-6細(xì)胞胰高血糖素分泌的影響

    αTC1-6細(xì)胞以每孔5×105個細(xì)胞的密度接種于6孔板,分別給予含5.5,25 mmol/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)5 d后,共分為兩大組:加胰島素組(100 nmol/L)和不加胰島素組。每組再分為6組,分別為正常對照組(5.5 mmol/L葡萄糖)、模型組(25 mmol/L葡萄糖)、青錢柳氯仿部位三萜酸組(TAE,1、5、10μg/mL)和 10μg/mL TAE+PI3K抑制劑渥曼青霉素(10 nmol/L)組。各組用對應(yīng)葡萄糖的濃度DMEM培養(yǎng)5 d后,將培養(yǎng)基換為不含血清的DMEM培養(yǎng)基,同時加入藥物孵育20 h后,加入胰島素孵育4 h。孵育完成后,吸去上清液,KRBH溶液清洗兩遍,然后用KRBH溶液孵育30 min,吸去上清液,再用含1 mmol/L葡萄糖的KRBH緩沖液(0.5%BSA)孵育1.5 h,留取上清液,于-20℃保存,ELISA試劑盒檢測胰高血糖素含量。同時抽提各孔細(xì)胞總蛋白,采用BCA定量試劑盒測定蛋白濃度,以校正胰高血糖素濃度。

    2.5 Real-time PCR實驗

    αTC1-6細(xì)胞按照“2.4”項下方法處理后,PBS液清洗細(xì)胞兩次,用Trizol試劑提取細(xì)胞RNA,酶標(biāo)儀測定A260/280及其濃度。RNA在65℃條件下預(yù)變性5 min后,立即置于冰上,按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明配制體系,將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,反映參數(shù)為:37℃,15 min;50℃,5 min;98℃,5 min。按照PCR試劑盒配置反應(yīng)體系后進(jìn)行PCR反應(yīng),反應(yīng)參數(shù)為:95℃,15 s;60℃,15 s;72℃,45 s。其中,95℃預(yù)變性60 s;共循環(huán)40次。測得各基因引物序列見表1。

    Table 1 Primer sequence for real-time PCR assay

    2.6 Western blot分析

    細(xì)胞按照“2.4”項處理后,PBS液清洗細(xì)胞兩次,每孔加蛋白裂解液150μL在冰上裂解5 min,吹打細(xì)胞數(shù)次,收集細(xì)胞,0℃超聲波破碎3次,冰上放置30 min后在-20℃和37℃之間反復(fù)凍融3次,12 000 r/min離心 10 min,收集上清液,用BCA試劑盒測定蛋白濃度。將蛋白質(zhì)樣品稀釋至相同且合適的濃度進(jìn)行SDS-PAGE電泳(電泳條件:85 V,20 min;120 V,80 min),然后轉(zhuǎn)移至 PVDF膜上在5%脫脂奶粉封閉液中室溫封閉1 h,加入一抗(1∶800)4℃過夜,之后加入二抗(1∶2 000)37℃孵育2 h,采用電化學(xué)發(fā)光檢測法(ECL檢測法)顯色,并對感光膠片條帶進(jìn)行灰度值分析。

    2.7 數(shù)據(jù)分析

    3 結(jié) 果

    3.1 αTC1-6細(xì)胞胰島素抵抗模型的建立

    高濃度葡萄糖培養(yǎng)基分別培養(yǎng)αTC1-6細(xì)胞1、3、5和7 d后,測定不同糖濃度培養(yǎng)下αTC1-6細(xì)胞培養(yǎng)液中胰高血糖素含量。結(jié)果顯示葡萄糖濃度超過25 mmol/L,培養(yǎng)時間超過5 d時,胰高血糖素分泌明顯升高(圖1)。其中葡萄糖濃度為25 mmol/L,培養(yǎng)時間為5 d時,不僅可以顯著增加胰高血糖素分泌(P<0.05),且數(shù)據(jù)穩(wěn)定性較好,故采用葡萄糖含量為25 mmol/L的培養(yǎng)基培養(yǎng)5 d建立αTC1-6細(xì)胞胰島素抵抗模型。

    Figure 1 Time-and dose-dependency of glucose-induced glucagon secretion inαTC1-6 cells)*P<0.05,**P<0.01 vs5.5 mmol/L for 1 day

    3.2 TAE對αTC1-6細(xì)胞活力的影響

    如圖 2所示,MTT法檢測 1、2、5、10、15、20、25和30μg/mL青錢柳三萜酸的細(xì)胞毒性實驗結(jié)果顯示,與正常對照組相比,質(zhì)量濃度為1、2、5、10和15μg/mL的青錢柳三萜酸細(xì)胞活力明顯大于90%,無細(xì)胞毒性,故選擇 1、5、10μg/mL 3個質(zhì)量濃度進(jìn)行相關(guān)實驗內(nèi)容。

    Figure 2 Effect of triterpenic acid-enriched fraction from Cyclocarya paliurus(TAE)on cell viability ofαTC1-6 cells.αTC1-6 cells were treated with different concentration of TAE for24 h,and then cell viability wasmeasured by MTT assay(ˉx±s,n=6)*P<0.05,**P<0.01 vs control group

    3.3 TAE對αTC1-6細(xì)胞胰高血糖素分泌的影響

    如圖3所示,與正常對照組相比,高糖模型組胰高血糖分泌量顯著增加(P<0.05)。與模型組相比,青錢柳三萜酸 1、5和 10μg/mL作用于αTC1-6細(xì)胞模型24 h后,給藥組細(xì)胞的胰高血糖素分泌量明顯降低,并存在濃度依賴性。胰島素條件下,正常對照組和模型組的胰高血糖素分泌量均下降,說明胰島素可以抑制胰高血糖素的分泌。而青錢柳三萜酸各給藥組胰高血糖素顯著下降,說明其可降低胰高血糖分泌且具有一定的胰島素依賴性。

    Figure 3 Effect of TAE on glucagon secretion inαTC1-6 cells.αTC1-6 cellswere incubated for5 days in DMEM media containing5.5mmol/L glucose or 25 mmol/L glucose in the presence or absence of different concentration of TAE for24 h with orwithout insulin(100 nmol/L)for 4 h.Wortmannin(10 nmol/L)was added 30 minutes before insulin at the last group#P<0.05,##P<0.01 vs contol group;*P<0.05,**P<0.01 vs model group

    3.4 TAE對αTC1-6細(xì)胞中IRS-1、PI3K和Akt磷酸化水平的影響

    與正常對照組相比,高糖刺激下模型組的IRS-1、PI3K、Akt含量均降低,符合糖尿病癥狀(圖4)。TAE干預(yù)后,IRS-1、PI3K和 Akt的磷酸化水平較模型組顯著上升,并具有濃度依賴性(P<0.05)。加入PI3K抑制劑渥曼青霉素后,PI3K和Akt的蛋白水平有所降低(圖4)。

    3.5 TAE對αTC1-6細(xì)胞胰高血糖素、IRS-1、PI3K和Akt的mRNA表達(dá)的影響

    如圖5顯示,不加胰島素時,與正常對照組相比,模型組的胰高血糖素mRNA水平明顯提高,并具有顯著性差異(P<0.05),IRS-1、PI3K和Akt水平均顯著性降低。與模型組相比,TAE(10μg/mL)能夠輕微降低胰高血糖素的基因表達(dá)并增加IRS-1、PI3K和Akt的表達(dá)。加入胰島素后,與正常對照組相比,模型組胰高血糖素的表達(dá)輕微增加,IRS-1、PI3K和Akt水平都顯著性降低;與模型組相比,TAE能夠顯著性降低胰高血糖素的表達(dá)并顯著性增加IRS-1、PI3K和Akt的表達(dá),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而PI3K抑制劑渥曼青霉素的加入能夠逆轉(zhuǎn)TAE對PI3K和Akt的作用。

    Figure 4 Effects of TAE on protein levels of IRS-1,PI3K and Akt inαTC1-6 cells.αTC1-6 cellswere incubated for5 days in DMEM media containing5.5 mmol/L glucose or25 mmol/L glucose in the presence or absence of different concerntration of TAE for24 h with insulin(100 nmol/L)for 4 h.P-IRS-1(A),p-PI3K(B)and p-Akt(C)wasmeasured by Western blot(ˉx±s,n=3)#P<0.05,##P<0.01 vs control group;*P<0.05,**P<0.01 vs model group

    Figure5 Effectsof TAE on geneexpression inαTC1-6 cells.αTC1-6 cellswere incubated for5 days in DMEMmedia containing5.5mmol/L glucose or 25 mmol/L glucose in the presence or absence of10μg/mL TAE for24 h with orwithout insulin(100 nmol/L)for4 h,gene expression levels in αTC1-6 cellswere determined and normalized to GAPDH.Data isexpressed as relative level to5.5 mmol/L glucose group without insulin.A:Glucagon levels;B:IRS-1 levels;C:PI3K levels;D:Akt levels(ˉx±s,n=3).#P<0.05,##P<0.01 vs 5.5 mmol/L glucose(control group)with or without insulin*P<0.05,**P<0.01 vs25 mmol/L glucose(model group)in the absence of wortmannin and TAE with or without insulin

    4 討 論

    胰島素抵抗是2型糖尿病產(chǎn)生的主要病因[15]。研究表明,長期高糖環(huán)境能誘導(dǎo)胰島α細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗,導(dǎo)致胰高血糖素異常分泌,產(chǎn)生高血糖[16]。本實驗采用25 mmol/L高糖連續(xù)培養(yǎng)αTC1-6細(xì)胞5 d,成功建立胰島α細(xì)胞胰島素抵抗模型,并考察了TAE的干預(yù)效果。實驗結(jié)果顯示:TAE能夠顯著降低高糖誘導(dǎo)的αTC1-6胰高血糖素分泌,升高IRS-1、PI3K、Akt的mRNA和蛋白水平,提示青錢柳三萜酸對胰島α細(xì)胞胰島素抵抗的改善作用可能與激活I(lǐng)RS-1/PI3K/Akt胰島素信號通路有關(guān)。

    αTC1-6是小鼠胰高糖素瘤細(xì)胞株,因其細(xì)胞群體均勻單一并易于培養(yǎng)而優(yōu)選于原代胰島細(xì)胞,是研究胰島α細(xì)胞功能的常用細(xì)胞株之一[16-17]。此外,研究表明αTC1-6細(xì)胞在長期高糖環(huán)境下胰高血糖素分泌和基因表達(dá)的變化與原代細(xì)胞相比,沒有顯著性差異,表明αTC1-6細(xì)胞系具有代表性[18-19]。本實驗用含 25 mmol/L葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)αTC1-6細(xì)胞5 d后,細(xì)胞胰高血糖素分泌明顯增加,胰島素對胰高血糖素分泌的抑制作用減弱,表明長期高糖環(huán)境成功誘導(dǎo)αTC1-6細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗,導(dǎo)致細(xì)胞胰高血糖素分泌異常,與文獻(xiàn)[14,20]報道結(jié)果一致,表明 αTC1-6細(xì)胞胰島素抵抗模型建立成功。

    “雙激素異?!奔僬f認(rèn)為胰高血糖素分泌過多和胰島素分泌不足是高血糖的主要原因[2,21]。正常生理狀態(tài)下,進(jìn)食后血糖濃度上升,胰島素分泌增多,胰高血糖素分泌受到抑制而減少[22]。而病理狀態(tài)下,持續(xù)的高血糖會導(dǎo)致胰島α細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗,胰高血糖素分泌增多,加劇高血糖[23]。本實驗發(fā)現(xiàn) TAE可顯著降低高糖誘導(dǎo)αTC1-6細(xì)胞的胰高血糖素分泌水平,提示其具有改善胰島α細(xì)胞胰島素抵抗功能。

    IRS/PI3K/Akt通路是胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要途徑[24]。長期高糖刺激時,胰島α細(xì)胞對外源性胰島素?zé)o法產(chǎn)生正常應(yīng)答,IRS/PI3K/Akt胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受阻,導(dǎo)致胰高血糖素分泌上升[25]。本研究發(fā)現(xiàn)TAE能顯著降低高糖誘導(dǎo)的αTC1-6細(xì)胞的胰高血糖素水平,增加其胞內(nèi)IRS-1、PI3K和Akt的mRNA和蛋白水平。給予PI3K的抑制劑渥曼青霉素干預(yù)后,PI3K和Akt的表達(dá)明顯降低,胰高血糖素水平顯著上升。上述實驗結(jié)果表明,TAE可以改善胰島素抵抗,可能是通過上調(diào)IRS-1和PI3K的酪氨酸磷酸化及其下游Akt的磷酸化來恢復(fù)胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)起作用。

    綜上所述,青錢柳三萜酸部位可通過干預(yù)IRS-1/PI3K/Akt信號通路改善胰島α細(xì)胞胰島素抵抗,抑制胰高血糖素的分泌,達(dá)到治療糖尿病的效果。但青錢柳三萜酸在動物體內(nèi)如何調(diào)控胰高血糖素分泌及哪種類型三萜發(fā)揮藥效,仍需進(jìn)一步深入研究。

    [1] Heller A,F(xiàn)eldman B.Electrochemistry in diabetesmanagement[J].Account Chem Res,2010,43(7):963-973.

    [2] Organization WH.Global report on diabetes[J].Working Papers,2016.

    [3] Unger R,Orci L.The essential role of glucagon in the pathogenesis of diabetesmellitus[J].Lancet,1975,1(7897):14-16.

    [4] Gosmain Y,Masson MH,Philippe J.Glucagon:the renewal of an old hormone in the pathophysiology of diabetes[J].J Diabetes,2013,5(2):102-109.

    [5] Unger RH,Cherrington AD.Glucagonocentric restructuring of diabetes:a pathophysiologic and therapeuticmakeover[J].JClin Invest,2012,122(1):4-12.

    [6] Tsuchiyama N,Takamura T,Ando H,etal.Possible role of alphacell insulin resistance in exaggerated glucagon responses to arginine in type 2 diabetes[J].Diabetes Care,2007,30(30):2583-2587.

    [7] Hong J,Jeppesen PB,Hermansen K.Effects of elevated fatty acid and glucose concentrations on pancreatic islet functionin vitro[J].Diabetes ObesMetab,2010,11(4):397-404.

    [8] Wang QQ,Jiang CH,F(xiàn)ang SZ,et al.Antihyperglycemic,antihyperlipidemic and antioxidant effects of ethanol and aqueous extracts ofCyclocarya paliurusleaves in type 2 diabetic rats[J].JEthnopharmacol,2013,150(3):1119-1127.

    [9] Fan BD,Wei Y,Li CH,et al.Research progress in chemical constituents and hpyerglycemic activity ofCyclocarya paliurus[J].Chin JExp TraditMed Form(中國實驗方劑學(xué)雜志),2014,20(13):239-242.

    [10]Kurihara H,F(xiàn)ukami H,Kusumoto A,et al.Hypoglycemic action ofCyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja in normal and diabetic mice[J].JAgric Chem Soc Japan,2003,67(4):877-880.

    [11]Li TT,Wu CY,F(xiàn)ang SZ,etal.Content stability and hypoglycemic effect ofCyclocarya paliuruscapsule[J].Sci Technol Food Ind(食品工業(yè)科技),2013,34(19):337-340.

    [12]Xu G,Yoshitomi H,Wen S,et al.Cyclocarya paliurus(Batal.)Ijinskaja aqueous extract(CPAE)ameliorates obesity by improving insulin signaling in the hypothalamus of a metabolic syndrome rat model[J].Evid-Based Compl Alt,2017,2017(2):4602153.

    [13]Zhu KN,Jiang CH,Tian YS,et al.Two triterpeniods fromCyclocarya paliurus(Batal)Iljinsk(Juglandaceae)promote glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes:the relationship to AMPK activation[J].Phytomedicine,2015,22(9):837-846.

    [14]Shen XX,LiHL,Pan L,etal.Glucotoxicity and cell dysfunction:involvement of the PI3K/Akt pathway in glucose-induced insulin resistance in rat islets and clonal TC1-6 cells[J].Endocr Res,2012,37(1):12-24.

    [15]Godsland IF,Walton C,Wynn V.Role of glucose and insulin resistance in development of type 2 diabetes mellitus[J].Lancet,1992,340(8831):1347-1348.

    [16]Kisanuki K,Kishikawa H,Araki E,et al.Expression of insulin receptor on clonal pancreatic alpha cells and its possible role for insulin-stimulated negative regulation of glucagon secretion[J].Diabetologia,1995,38(4):422-429.

    [17]Mizusawa N,Hasegawa T,Ohigashi I,etal.Differentiation phenotypes of pancreatic islet beta-and alpha-cells are closely related with homeotic genesand a group of differentially expressed genes[J].Gene,2004,331(1):53-63.

    [18]Piro S,Maniscalchi ET,Monello A,et al.Palmitate affects insulin receptor phosphorylation and intracellular insulin signal in a pancreatic alpha-cell line[J].Endocrinology,2010,151(9):4197-4206.

    [19] Chen X,Hermansen K,Xiao J,et al.Isosteviol has beneficial effects on palmitate-inducedα-cell dysfunction and gene expression[J].PLoSOne,2012,7(3):e34361.

    [20]Mcgirr R,Ejbick CE,Carter DE,etal.Glucose dependence of the regulated secretory pathway in alphaTC1-6 cells[J].Endocrinology,2005,146(10):4514-4523.

    [21]Unger RH.The bantingmemorial lecture 1975.Diabetes and the alpha cell[J].Diabetes,1976,25(2):136-151.

    [22]Umpaichitra V,Bastian W,Taha D,et al.C-peptide and glucagon profiles in minority children with type 2 diabetesmellitus[J].J Clin Endocr Metab,2001,86(4):1605-1609.

    [23]Ferrannini E,Muscelli E,Natali A,et al.Association of fasting glucagon and proinsulin concentrations with insulin resistance[J].Diabetologia,2007,50(11):2342-2347.

    [24]Diao JY,Asghar Z,Chan CB.Glucose-regulated glucagon secretion requires insulin receptor expression in pancreaticα-cells[J].JBiol Chem,2005,280(39):487-496.

    [25]Kaneko K,Shirotani T,Araki E,et al.Insulin inhibits glucagon secretion by the activation of PI3-kinase in In-R1-G9 cells[J].Diabetes Res Clin Pr,1999,44(2):83-92.

    猜你喜歡
    高血糖素青錢柳三萜
    澤瀉原三萜、降三萜和倍半萜的分離及其抗炎活性研究
    青錢柳餅干加工工藝參數(shù)優(yōu)化研究
    胰高血糖素樣肽1及其受體激動劑在支氣管哮喘治療中的研究進(jìn)展
    青錢柳葉對糖尿病大鼠的治療作用
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    青錢柳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:31
    佩氏靈芝中三個新三萜
    茯苓皮總?cè)频瓮柚苽涔に嚨膬?yōu)化
    中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:08:05
    2型糖尿病應(yīng)用胰高血糖素樣肽-1受體激動劑治療的效果探討
    空腹及糖負(fù)荷后胰高血糖素水平與代謝綜合征的相關(guān)性研究
    蓮都區(qū)首次發(fā)現(xiàn)國家二級保護(hù)樹種——青錢柳
    在线av久久热| 18禁观看日本| 欧美+亚洲+日韩+国产| 十八禁高潮呻吟视频| 精品一区二区三卡| 丝袜喷水一区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品国产av在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 夫妻性生交免费视频一级片| cao死你这个sao货| 精品久久久久久电影网| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 丁香六月天网| 国产成人精品无人区| 各种免费的搞黄视频| 99九九在线精品视频| 午夜精品国产一区二区电影| 国产av精品麻豆| 亚洲国产av影院在线观看| 91精品国产国语对白视频| 午夜两性在线视频| 亚洲国产日韩一区二区| 国产成人精品久久二区二区91| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 国产成人免费观看mmmm| 99久久精品国产亚洲精品| 午夜激情久久久久久久| 日韩av免费高清视频| 国产视频首页在线观看| 国产视频首页在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲国产精品一区二区三区在线| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品免费大片| 麻豆乱淫一区二区| 深夜精品福利| 国产国语露脸激情在线看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 黄色视频不卡| 国产一区二区在线观看av| 99久久综合免费| www.自偷自拍.com| 久久人妻熟女aⅴ| 日韩中文字幕视频在线看片| 成年人午夜在线观看视频| 久久精品久久久久久久性| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 中文字幕人妻熟女乱码| 男女高潮啪啪啪动态图| 女性被躁到高潮视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产野战对白在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久久国产一级毛片高清牌| 黄色a级毛片大全视频| 欧美日韩精品网址| av天堂在线播放| 青春草视频在线免费观看| 蜜桃在线观看..| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费观看人在逋| 亚洲成国产人片在线观看| 国产精品久久久久成人av| 国产xxxxx性猛交| 欧美在线一区亚洲| 国产成人av激情在线播放| 婷婷成人精品国产| 国产熟女欧美一区二区| 激情五月婷婷亚洲| 老司机在亚洲福利影院| www.999成人在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲av片天天在线观看| avwww免费| 亚洲精品自拍成人| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久精品久久久久久久性| 黄片小视频在线播放| 青草久久国产| 亚洲av片天天在线观看| 国产主播在线观看一区二区 | 欧美性长视频在线观看| 国产淫语在线视频| 日韩大码丰满熟妇| 精品少妇内射三级| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 伦理电影免费视频| 亚洲 国产 在线| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产一区二区在线观看av| 黄片播放在线免费| 蜜桃国产av成人99| 免费观看人在逋| 久久久国产一区二区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲欧美一区二区三区黑人| www.熟女人妻精品国产| 欧美+亚洲+日韩+国产| 99精国产麻豆久久婷婷| 免费av中文字幕在线| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 久久精品国产综合久久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美日韩成人在线一区二区| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲少妇的诱惑av| 日韩大码丰满熟妇| 日日爽夜夜爽网站| 男人添女人高潮全过程视频| 免费高清在线观看日韩| 丝袜人妻中文字幕| 天天添夜夜摸| 国产一区有黄有色的免费视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 午夜福利,免费看| 在线观看免费午夜福利视频| 曰老女人黄片| 国产在线免费精品| 国产男女内射视频| 999久久久国产精品视频| 丝袜美腿诱惑在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品亚洲成a人片在线观看| 男女免费视频国产| 国产片内射在线| 黄色 视频免费看| 国产男女超爽视频在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 国产在线免费精品| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产精品久久久久久精品古装| 捣出白浆h1v1| 日韩av免费高清视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 高清视频免费观看一区二区| 精品久久蜜臀av无| 国产高清视频在线播放一区 | 丝袜美腿诱惑在线| 人人澡人人妻人| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 香蕉丝袜av| 欧美另类一区| 国产爽快片一区二区三区| 黄频高清免费视频| 久久青草综合色| av在线老鸭窝| 婷婷色综合大香蕉| 黄色视频在线播放观看不卡| 大香蕉久久网| 久久久国产一区二区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲久久久国产精品| 极品人妻少妇av视频| 下体分泌物呈黄色| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲免费av在线视频| 国产片特级美女逼逼视频| 两个人免费观看高清视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 热99国产精品久久久久久7| 18禁国产床啪视频网站| 狂野欧美激情性xxxx| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 国产片特级美女逼逼视频| 蜜桃在线观看..| 一区二区av电影网| 一级黄色大片毛片| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 女性被躁到高潮视频| 人妻一区二区av| 午夜老司机福利片| 久久久精品区二区三区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品一区二区三卡| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产一区二区 视频在线| av在线app专区| 18在线观看网站| 精品国产国语对白av| 国产av一区二区精品久久| 女警被强在线播放| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产成人啪精品午夜网站| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久亚洲国产成人精品v| 黄色片一级片一级黄色片| 手机成人av网站| 黄色一级大片看看| 久久国产精品人妻蜜桃| 在线观看免费视频网站a站| 操出白浆在线播放| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 水蜜桃什么品种好| 免费高清在线观看日韩| 亚洲精品久久午夜乱码| 日韩精品免费视频一区二区三区| 视频区图区小说| 亚洲欧美一区二区三区国产| 免费高清在线观看日韩| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 无遮挡黄片免费观看| 青草久久国产| 久热爱精品视频在线9| 亚洲av电影在线进入| 中文字幕最新亚洲高清| 一区福利在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 丝袜在线中文字幕| 十八禁人妻一区二区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一边亲一边摸免费视频| 国产在线一区二区三区精| 国产精品 国内视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产又色又爽无遮挡免| 七月丁香在线播放| 免费在线观看影片大全网站 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 国产一区二区 视频在线| 亚洲欧美色中文字幕在线| 观看av在线不卡| 国产黄色视频一区二区在线观看| 女人久久www免费人成看片| 一边亲一边摸免费视频| 一级片免费观看大全| av在线播放精品| 美女中出高潮动态图| 亚洲欧洲国产日韩| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 热re99久久国产66热| a级片在线免费高清观看视频| 99久久精品国产亚洲精品| 另类精品久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久精品国产综合久久久| 男女床上黄色一级片免费看| 久久ye,这里只有精品| 少妇精品久久久久久久| 操美女的视频在线观看| www.自偷自拍.com| 免费在线观看黄色视频的| 秋霞在线观看毛片| 大型av网站在线播放| 丝袜美足系列| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美av亚洲av综合av国产av| av福利片在线| 飞空精品影院首页| 在线看a的网站| 国产高清国产精品国产三级| 欧美日韩黄片免| 亚洲男人天堂网一区| www.999成人在线观看| 久久精品成人免费网站| 国产精品一区二区免费欧美 | 国产不卡av网站在线观看| 日韩大片免费观看网站| 婷婷色av中文字幕| 国产黄色免费在线视频| www日本在线高清视频| 色94色欧美一区二区| 天堂8中文在线网| 国产精品久久久av美女十八| 久久精品成人免费网站| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜福利影视在线免费观看| 国产又色又爽无遮挡免| 国产成人av教育| 不卡av一区二区三区| 亚洲精品一二三| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产成人免费观看mmmm| 97人妻天天添夜夜摸| 在线天堂中文资源库| 少妇的丰满在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产欧美亚洲国产| av又黄又爽大尺度在线免费看| 少妇 在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 人人妻人人澡人人看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品久久久人人做人人爽| 婷婷色麻豆天堂久久| 青春草亚洲视频在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产在线视频一区二区| 狂野欧美激情性xxxx| 天堂俺去俺来也www色官网| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| svipshipincom国产片| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日本av免费视频播放| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲av片天天在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产高清不卡午夜福利| 国产一区二区在线观看av| 国产精品久久久久成人av| 热99久久久久精品小说推荐| 免费看十八禁软件| 我的亚洲天堂| www.自偷自拍.com| 亚洲七黄色美女视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产片特级美女逼逼视频| 久久亚洲精品不卡| 亚洲美女黄色视频免费看| netflix在线观看网站| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 好男人视频免费观看在线| 91成人精品电影| 中国美女看黄片| 男男h啪啪无遮挡| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲av男天堂| 精品人妻1区二区| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 亚洲精品国产区一区二| 国产精品成人在线| 悠悠久久av| 麻豆国产av国片精品| 热re99久久精品国产66热6| 欧美日韩成人在线一区二区| 久久精品久久久久久久性| 一级片免费观看大全| a 毛片基地| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 精品一区二区三区四区五区乱码 | 最新的欧美精品一区二区| 少妇 在线观看| 麻豆av在线久日| 一级a爱视频在线免费观看| a级毛片在线看网站| 九色亚洲精品在线播放| 超色免费av| 国产精品免费视频内射| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 老司机影院成人| 免费观看人在逋| 一本大道久久a久久精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 热re99久久国产66热| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产成人精品久久久久久| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久中文字幕一级| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 丝袜美腿诱惑在线| 在线 av 中文字幕| 人成视频在线观看免费观看| 九色亚洲精品在线播放| 国产黄频视频在线观看| 另类精品久久| bbb黄色大片| 久久精品国产a三级三级三级| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日本五十路高清| 国产97色在线日韩免费| 男女无遮挡免费网站观看| 欧美中文综合在线视频| 亚洲精品一二三| 久久ye,这里只有精品| 黄片小视频在线播放| 精品国产一区二区久久| 亚洲国产精品国产精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲国产av影院在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 成人国产av品久久久| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 色综合欧美亚洲国产小说| 男女无遮挡免费网站观看| www.精华液| 久久久欧美国产精品| 激情五月婷婷亚洲| 宅男免费午夜| 一区二区三区四区激情视频| 看十八女毛片水多多多| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产免费福利视频在线观看| a 毛片基地| 丝袜人妻中文字幕| 欧美 日韩 精品 国产| 久9热在线精品视频| 男人舔女人的私密视频| 各种免费的搞黄视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 亚洲男人天堂网一区| 两个人看的免费小视频| 成人免费观看视频高清| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲人成网站在线观看播放| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久亚洲国产成人精品v| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 一二三四在线观看免费中文在| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 黄色怎么调成土黄色| 另类亚洲欧美激情| 亚洲综合色网址| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品国产三级专区第一集| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 啦啦啦 在线观看视频| 制服人妻中文乱码| h视频一区二区三区| 日韩中文字幕视频在线看片| 欧美av亚洲av综合av国产av| av一本久久久久| 久久亚洲国产成人精品v| 青青草视频在线视频观看| 久久久久精品人妻al黑| 一区二区三区乱码不卡18| 国产亚洲精品久久久久5区| 水蜜桃什么品种好| 亚洲五月婷婷丁香| av线在线观看网站| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日韩伦理黄色片| 亚洲国产成人一精品久久久| 操美女的视频在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 成人免费观看视频高清| 在线 av 中文字幕| 又大又爽又粗| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产一区亚洲一区在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 青青草视频在线视频观看| 看免费成人av毛片| 2021少妇久久久久久久久久久| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲av综合色区一区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久狼人影院| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 99久久综合免费| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 狂野欧美激情性bbbbbb| 99热国产这里只有精品6| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 下体分泌物呈黄色| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日韩制服丝袜自拍偷拍| www.精华液| 日本黄色日本黄色录像| av不卡在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 97在线人人人人妻| 久久久久精品国产欧美久久久 | 男女之事视频高清在线观看 | 国产成人精品久久久久久| 亚洲专区国产一区二区| 人人妻人人澡人人看| 青春草视频在线免费观看| 国产高清国产精品国产三级| 久久女婷五月综合色啪小说| 欧美精品亚洲一区二区| 又大又黄又爽视频免费| 日本欧美视频一区| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 久久av网站| 午夜91福利影院| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 日韩制服骚丝袜av| 男女无遮挡免费网站观看| 黄色怎么调成土黄色| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产深夜福利视频在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 国产三级黄色录像| 曰老女人黄片| 亚洲人成电影免费在线| 一区福利在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | av有码第一页| 9热在线视频观看99| av福利片在线| avwww免费| 高清不卡的av网站| 美女大奶头黄色视频| 久久久久久久国产电影| 婷婷丁香在线五月| 久久久久精品人妻al黑| 久久久久网色| 欧美日韩视频精品一区| 国产xxxxx性猛交| 一级毛片女人18水好多 | 欧美精品亚洲一区二区| 黄色片一级片一级黄色片| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲中文日韩欧美视频| 免费看十八禁软件| 亚洲少妇的诱惑av| 国产一区二区 视频在线| 香蕉丝袜av| 亚洲精品在线美女| 久久久久国产一级毛片高清牌| 18禁国产床啪视频网站| 国产在视频线精品| 国产精品国产三级专区第一集| 91字幕亚洲| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲av电影在线进入| 久久人人爽人人片av| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 欧美激情高清一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 后天国语完整版免费观看| 国产真人三级小视频在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久久久久人人人人人| 欧美另类一区| 成人亚洲精品一区在线观看| 一级黄片播放器| 成人国产av品久久久| 成人国产一区最新在线观看 | 19禁男女啪啪无遮挡网站| 老司机在亚洲福利影院| 国产一区二区在线观看av| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 麻豆av在线久日| av在线app专区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产av精品麻豆| 免费看av在线观看网站| 久久久国产一区二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费日韩欧美在线观看| bbb黄色大片| 蜜桃在线观看..| 国产精品久久久久成人av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | √禁漫天堂资源中文www| 国产男女超爽视频在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| e午夜精品久久久久久久| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲精品日本国产第一区| 美女主播在线视频| avwww免费| 99九九在线精品视频| 日本av免费视频播放| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲精品av麻豆狂野| 视频在线观看一区二区三区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日日爽夜夜爽网站| 18在线观看网站| 在线观看一区二区三区激情| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲人成电影观看| 亚洲图色成人| 我的亚洲天堂| a级毛片在线看网站| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 免费看十八禁软件| 亚洲欧美色中文字幕在线| 91精品国产国语对白视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 丝袜在线中文字幕| 各种免费的搞黄视频| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲欧洲国产日韩| 好男人视频免费观看在线| 成人亚洲精品一区在线观看| 精品福利观看|