藻酸雙酯鈉納米劑型對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病心肌病大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的影響

[摘要] 目的 研究藻酸雙酯鈉納米劑型（PSS-NP）對(duì)糖尿病心肌病（DCM）大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的影響。方法 將SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照（Control）組和糖尿?。―M）組，DM組采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）的方法建立1型DM大鼠模型。誘導(dǎo)8周后將DCM模型制備成功的大鼠隨機(jī)分為DCM組、DCM+前列地爾（PGE1）組、DCM+低分子肝素（LMWH）組、DCM+PSS組及DCM+PSS-NP組，各給藥組分別給予PGE1 5 μg·kg-1·d-1、LMWH 150 U·kg-1·d-1、PSS 20 mg·kg-1·d-1及PSS-NP 20 mg·kg-1·d-1腹腔注射，Control組及DCM組給予等量生理鹽水腹腔注射。給藥4周后，采用蘇木精-伊紅（HE）染色觀察胸主動(dòng)脈病理改變，ELISA法檢測(cè)胸主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體（PROCR）濃度，Western Blot法檢測(cè)胸主動(dòng)脈磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）-p85、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）蛋白的表達(dá)及內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）、蛋白激酶B（Akt）磷酸化水平。結(jié)果 HE染色顯示，DCM組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)膜不規(guī)則，內(nèi)皮細(xì)胞破壞，細(xì)胞核大小不一，PSS-NP可顯著改善DCM大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮形態(tài)。ELISA檢測(cè)顯示，DCM組PROCR濃度較Control組顯著降低，各給藥組PROCR濃度較DCM組均顯著增高，以DCM+PSS-NP組增高最明顯（F=16.03，P<0.01）。Western Blot檢測(cè)顯示，DCM組PI3K-p85、VEGFA蛋白表達(dá)及Akt、eNOS磷酸化水平均較Control組顯著降低，各給藥組PI3K-p85、VEGFA蛋白表達(dá)及Akt、eNOS磷酸化水平均較DCM組顯著增高，以DCM+PSS-NP組增高最明顯（F=10.06～14.13，P<0.01）。結(jié)論 PSS-NP可能通過(guò)上調(diào)PI3K/Akt/eNOS/VEGFA信號(hào)通路改善STZ誘導(dǎo)的DCM大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷。

[關(guān)鍵詞] 藻酸鹽；納米粒子；劑型；糖尿病心肌病；內(nèi)皮，血管；大鼠

[中圖分類號(hào)] R5871.2；R916.3

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A

[文章編號(hào)] 2096-5532（2018）03-0277-05

糖尿?。―M）發(fā)病率逐年上升，心臟大血管并發(fā)癥是DM病人死亡的主要原因之一[1]。目前認(rèn)為氧化應(yīng)激、炎癥、血流動(dòng)力學(xué)改變、血栓形成和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)下調(diào)是導(dǎo)致DM血管內(nèi)皮損傷的重要病理生理機(jī)制，血管內(nèi)皮損傷是主動(dòng)脈病變的早期病理改變，可發(fā)展為心力衰竭導(dǎo)致死亡[2]。血管內(nèi)皮損傷是諸多疾病發(fā)生發(fā)展的病理基礎(chǔ)，因此，探索血管內(nèi)皮損傷的治療方法已成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。研究表明，藻酸雙酯鈉（PSS）是類似肝素的海洋藥物，具有抗氧化應(yīng)激、抗炎、改善血流動(dòng)力學(xué)和抗凝血等生物學(xué)活性，PSS納米劑型（PSS-NP）是由普通PSS制成的納米制劑，具有生物利用度更高、穩(wěn)定性和靶向性更強(qiáng)、毒副作用更小等突出的優(yōu)點(diǎn)[3-6]。近年來(lái)，大量研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體（PROCR）是一種具有抗凝作用的細(xì)胞表面蛋白，并參與許多其他的病理機(jī)制，如抗炎、抗凋亡等，可作為血管內(nèi)皮損傷的標(biāo)志[7]。研究已證實(shí)，磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）/血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）信號(hào)通路在血管內(nèi)皮損傷的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，它可以影響細(xì)胞存活、增殖、氧化應(yīng)激和凋亡等生物學(xué)過(guò)程[8-12]。本研究旨在探討PSS-NP是否可以通過(guò)調(diào)控胸主動(dòng)脈PI3K-p85、VEGFA蛋白的表達(dá)及Akt、eNOS磷酸化水平，改善鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的糖尿病心肌?。―CM）大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康雄性SD大鼠52只，8周齡，體質(zhì)量150～200 g，購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，許可證號(hào)SCXK（魯）20140007。飼養(yǎng)條件：室溫（25±2）℃，相對(duì)濕度（55±10）%，自由攝食飲水，12 h明暗交替照明。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作程序均符合NIH實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用指南。

1.1.2 主要藥品及試劑 STZ（美國(guó)Sigma公司）；前列地爾（PGE1，北京泰得制藥股份有限公司）；低分子肝素（LMWH，意大利阿爾法韋士曼制藥公司）；PSS（青島海爾制藥有限公司）；PSS-NP（中國(guó)海洋大學(xué)提供）；PROCR ELISA檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Cloud-Clone公司）；PI3K-p85抗體、eNOS抗體、Akt抗體、pS473-Akt抗體、p-eNOS抗體（美國(guó)Cell Signaling Technology公司）；抗VEGFA抗體（英國(guó)Abcam公司）；α-Actin抗體（德國(guó)Merck Millipore公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組及給藥 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為Control組（n=7）和DM組（n=45）。大鼠于實(shí)驗(yàn)前過(guò)夜禁食12 h，可自由飲水。次日對(duì)DM組大鼠一次性腹腔注射10 g/L STZ（STZ臨用前配制，溶于0.1 mol/L、pH值4.34的無(wú)菌檸檬酸鈉緩沖液）65 mg/kg建立1型DM模型（Control組腹腔注射等量檸檬酸鈉緩沖液），3 d后過(guò)夜禁食不禁水12 h，次日于大鼠后眼眶靜脈叢導(dǎo)管采血測(cè)血糖，將血糖>16.7 mmol/L、多飲、多食、多尿和消瘦者確定為1型DM大鼠，穩(wěn)定1周后納入研究[13]。參考文獻(xiàn)的方法[14]，繼續(xù)飼養(yǎng)8周，經(jīng)超聲心動(dòng)圖證實(shí)為心功能不全者，診斷為DCM，除去死亡、造模失敗和因狀態(tài)不佳而剔除的大鼠，共成功造模35只。將35只DCM大鼠隨機(jī)分為DCM組、DCM+PGE1組、DCM+LMWH組、DCM+PSS組以及DCM+PSS-NP組，每組7只。每日清晨測(cè)大鼠體質(zhì)量，腹腔注射給藥，DCM+PGE1組給予PGE1 5 μg·kg-1·d-1，DCM+LMWH組給予LMWH 150 U·kg-1·d-1，DCM+PSS組給予PSS 20 mg·kg-1·d-1，DCM+PSS-NP組給予PSS-NP 20 mg·kg-1·d-1，Control組及DCM組腹腔注射等量生理鹽水，連續(xù)給藥4周[15-17]。

1.2.2 一般狀況及生存狀態(tài)觀察 每日觀察記錄大鼠一般狀況及生存狀態(tài)[18-19]。

1.2.3 蘇木精-伊紅（HE）染色觀察胸主動(dòng)脈病理形態(tài) 給藥4周后，采用水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，迅速開胸，分離胸主動(dòng)脈，剪取0.5 cm升主動(dòng)脈浸于40 g/L中性甲醛溶液中固定24 h以上，制作石蠟切片，行HE染色，于光學(xué)顯微鏡下觀察胸主動(dòng)脈病理改變，400倍鏡下拍照[20]。

1.2.4 ELISA法檢測(cè)胸主動(dòng)脈PROCR濃度 采用PROCR ELISA試劑盒測(cè)定胸主動(dòng)脈組織上清液中的PROCR濃度，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書步驟進(jìn)行操作。

1.2.5 Western Blot法檢測(cè)PI3K-p85、VEGFA蛋白表達(dá)及Akt、eNOS磷酸化水平 提取胸主動(dòng)脈總蛋白，采用BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度[21-22]；用SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白，在Bio-Rad系統(tǒng)中將分離到的蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上；以50 g/L脫脂奶粉溶液室溫封閉1.5 h，封閉過(guò)的膜加入一抗（1∶500）4 ℃孵育過(guò)夜，洗膜后再加入HRP標(biāo)記的二抗（1∶5 000）室溫孵育1 h，洗膜后曝光顯影。應(yīng)用Quantity One 4.6.2分析軟件進(jìn)行灰度分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以[AKx-D]±s表示，組間比較采用單因素方差分析。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般狀況及生存狀態(tài)比較

藥物治療4周后，與Control組相比，DCM組大鼠對(duì)外界反應(yīng)遲鈍，皮毛枯黃、雜亂、稀疏、易臟，口唇發(fā)紺，皮膚易發(fā)生潰瘍且不易愈合，小便多且腥臊味重；與DCM組相比，DCM+PGE1組、DCM+LMWH組、DCM+PSS組及DCM+PSS-NP組大鼠一般狀況均有所改善，以DCM+PSS-NP組改善效果最顯著。STZ誘導(dǎo)8周后，DCM組死亡8只大鼠，Control組無(wú)大鼠死亡；藥物治療期間，DCM+PSS組于給藥的第1周死亡1只大鼠，DCM+PGE1組于給藥的第3周死亡1只大鼠，Control組、DCM+LMWH組及DCM+PSS-NP組無(wú)大鼠死亡。

2.2 各組大鼠胸主動(dòng)脈病理形態(tài)比較

Control組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮細(xì)胞完整，細(xì)胞核大小均一；DCM組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)膜不規(guī)則，內(nèi)皮細(xì)胞破壞，細(xì)胞核大小不一；DCM+PGE1組、DCM+LMWH組、DCM+PSS組以及DCM+PSS-NP組大鼠胸主動(dòng)脈病理表現(xiàn)較DCM組均有不同程度改善，其中以DCM+PSS-NP組改善最明顯。

2.3 各組大鼠胸主動(dòng)脈PROCR濃度比較

DCM組PROCR濃度較Control組顯著降低，各給藥組大鼠的PROCR濃度較DCM組均顯著增高，以DCM+PSS-NP組增高最明顯（F=16.03，P<0.01）。見圖1。

2.4 各組大鼠胸主動(dòng)脈PI3K-p85、VEGFA蛋白表達(dá)及Akt、eNOS磷酸化水平比較

DCM組大鼠PI3K-p85、VEGFA蛋白表達(dá)及Akt、eNOS磷酸化水平較Control組顯著降低，各給藥組大鼠PI3K-p85、VEGFA蛋白表達(dá)及Akt、eNOS磷酸化水平均較DCM組顯著增高，以DCM+PSS-NP組增高最為明顯（F=10.06～14.13，P<0.01）。見圖2。

3 討論

PSS是以褐藻酸為原料化學(xué)合成的類似肝素的海洋藥物，具有抗氧化應(yīng)激、抗炎、改善血流動(dòng)力學(xué)及抗凝血等生物學(xué)活性，由于其資源豐富，生物學(xué)活性多樣及毒副作用少等優(yōu)點(diǎn)越來(lái)越多地被開發(fā)和應(yīng)用。隨著生物制藥技術(shù)的不斷進(jìn)步，以聚乳酸-羥基乙酸共聚物為藥物載體，采用改進(jìn)的雙乳化溶劑蒸發(fā)法制得的PSS-NP顯示出了更為卓越的特點(diǎn)，如可穿透機(jī)體屏障和細(xì)胞膜、生物利用度增加、靶向性增強(qiáng)、緩釋作用明顯和藥物穩(wěn)定性提高，在保證藥效的前提下，可減少用藥量，減輕或消除毒副作用[5-6]。其臨床類似藥物有PGE1、LMWH等。PGE1是以脂微球?yàn)樗幬镙d體的靜脈注射用制劑，脂微球的包裹使其不易失活，且能使藥物靶向分布到受損的血管部位，從而發(fā)揮其擴(kuò)張血管、抑制血小板聚集的作用，因而被廣泛應(yīng)用于臨床。LMWH是由普通肝素解聚而制備成的相對(duì)分子質(zhì)量較低的肝素，相較于普通肝素，其對(duì)血小板功能影響小，副作用少，生物利用度高且體內(nèi)半衰期長(zhǎng)，能更好地發(fā)揮抗凝作用，增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞抗血栓作用而不干擾血管內(nèi)皮細(xì)胞其他功能，在臨床上有很高的應(yīng)用價(jià)值[15-16]。因此，本研究?jī)?yōu)選這兩種藥物作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

相關(guān)研究結(jié)果表明，PROCR是一種具有抗凝作用的細(xì)胞表面蛋白，并參與導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷的其他重要機(jī)制，如炎癥、凋亡等，在炎癥因子和過(guò)度分泌蛋白酶的作用下，內(nèi)皮細(xì)胞表面的PROCR脫落增加，故PROCR可以作為血管內(nèi)皮受損的標(biāo)志[7]。PI3K/Akt/eNOS/VEGFA信號(hào)通路在血管內(nèi)皮損傷機(jī)制中起著非常重要的作用，PI3K具有絲氨酸（Ser）/蘇氨酸（Thr）激酶活性，也有磷脂酰肌醇激酶活性，由調(diào)節(jié)亞基p85和催化亞基p110構(gòu)成，可參與調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖和凋亡等功能，在生長(zhǎng)因子和受體酪氨酸激酶（RTK）的作用下，PI3K的p85調(diào)節(jié)亞單位招募p110催化亞單位到細(xì)胞膜，后者使磷脂酰肌醇肌醇環(huán)上的D-3位羥基磷酸化，PI3K被激活，在質(zhì)膜上產(chǎn)生第二信使磷脂酰肌醇3磷酸（PIP3），PIP3與細(xì)胞內(nèi)含有PH結(jié)構(gòu)域的信號(hào)蛋白Akt和3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1結(jié)合，磷酸化Akt蛋白的Thr308，釋放假底物肽，活化的Akt（完全激活需要雷帕霉素復(fù)合物2靶磷酸化Akt蛋白的Ser473）通過(guò)磷酸化多種酶、激酶和轉(zhuǎn)錄因子等控制重要的細(xì)胞功能，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、存活和氧化應(yīng)激等[8-9，23-24]。研究結(jié)果表明，Akt通過(guò)磷酸化激活下游內(nèi)源性eNOS/一氧化氮（NO）系統(tǒng)，導(dǎo)致eNOS合成和釋放NO，而NO具有舒張血管、減輕自由基造成的血管內(nèi)皮功能障礙等生物活性[10-11]。已有研究結(jié)果表明，VEGFA可通過(guò)自身和反饋性活化PI3K/Akt信號(hào)通路啟動(dòng)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖和遷移，誘導(dǎo)血管生成，而新生血管有利于病變血管內(nèi)膜的修復(fù)，維持內(nèi)膜完整性[8，12]。

采用小劑量STZ注射聯(lián)合高脂高糖飲食可誘導(dǎo)出2型DM模型，但由于STZ注射量少，僅破壞部分胰島α細(xì)胞，使外周組織對(duì)胰島素不敏感，而高脂高糖飲食會(huì)引起高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化及胰島素抵抗等其他可致血管病變因素，干擾因素多且造模周期長(zhǎng)、費(fèi)用高[25，13]。而應(yīng)用大劑量STZ注射，破壞了大部分胰島α細(xì)胞，可誘導(dǎo)出1型DM大鼠模型，也可誘導(dǎo)出DCM模型，能滿足實(shí)驗(yàn)要求。因此，本研究在采用大劑量STZ制備1型DM大鼠基礎(chǔ)上誘導(dǎo)DCM大鼠模型，觀察PSS-NP對(duì)DCM大鼠一般狀況、胸主動(dòng)脈組織學(xué)及分子生物學(xué)指標(biāo)的影響，探究PSS-NP對(duì)胸主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的作用。結(jié)果顯示，PSS-NP可顯著改善DCM大鼠一般生存狀態(tài)，提高其生活質(zhì)量，顯著改善胸主動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷。分子生物學(xué)結(jié)果表明，PSS-NP可能通過(guò)上調(diào)PI3K/Akt/eNOS/VEGFA信號(hào)通路抑制DCM大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的發(fā)展。本研究為PSS-NP改善血管內(nèi)皮損傷的臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)，并為進(jìn)一步研究PSS-NP對(duì)STZ誘導(dǎo)的DCM大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]MCALPINE C S， BOWES A J， WERSTUCK G D. Hyperglycemia and accelerated atherosclerosis：evidence supporting a role for endoplasmic reticulum （ER） stress signaling[J]. Cardiovascular Hematological Disorders Drug Targets， 2010，10（2）：151-157.

[2]FORBES J M， COOPER M E. Mechanisms of diabetic complications[J]. Physiological Reviews， 2013，93（1）：137-188.

[3]ZHAO M M， LI Z， TENG Z， et al. Repeated oral treatment with polysaccharide sulfate reduces insulin resistance and dyslipidemia in diabetic dyslipidemic rat model[J]. Yao Xue Xue Bao， 2007，42（5）：488-491.

[4]ZENG Y Y， YANG D S， QIU P J， et al. Efficacy of heparinoid PSS in treating cardiovascular diseases and Beyond A review of 27 years clinical experiences in China[J]. Clinical and Applied Thrombosis-Hemostasis， 2016，22（3）：222-229.

[5]LI P L， LI C X， XUE Y T， et al. An HPLC method for microanalysis and pharmacokinetics of Marine sulfated polysaccharide PSS-loaded poly lactic-co-glycolic acid （PLGA） nano-

particles in rat plasma[J]. Marine Drugs， 2013，11（4）：1113-1125.

[6]MIZRAHY S， PEER D. Polysaccharides as building blocks for nanotherapeutics[J]. Chemical Society Reviews， 2012，41（7）：2623-2640.

[7]MA Y， ZHAO Y， ZHANG R， et al. Astragaloside Ⅳ inhibits PMA-induced EPCR shedding through MAPKs and PKC pathway[J]. Immunopharmacology and Immunotoxicology， 2017，39（3）：148-156.

[8]SIMONS M， GORDON E， CLAESSON-WELSH L. Mechanisms and regulation of endothelial VEGF receptor signalling[J]. Nature Reviews Molecular Cell Biology， 2016，17（10）：611-625.

[9]MAILLET M， VAN BERLO J H， MOLKENTIN J D. Mole-

cular basis of physiological heart growth： fundamental concepts and new players[J]. Nature Reviews. Molecular Cell Biology， 2013，14（1）：38-48.

[10]CHEN J， SOMANATH P R， RAZORENOVA O， et al. Akt1 regulates pathological angiogenesis， vascular maturation and permeability in vivo[J]. Nature Medicine， 2005，11（11）：1188-1196.

[11]ALP N J， MUSSA S， KHOO J， et al. Tetrahydrobiopterin-dependent preservation of nitric oxide-mediated endothelial function in diabetes by targeted transgenic GTP-cyclohydrolase Ⅰ overexpression[J]. Journal of Clinical Investigation， 2003，112（5）：725-735.

[12]LEE S， CHEN T T， BARBER C L， et al. Autocrine VEGF signaling is required for vascular homeostasis[J]. Cell， 2007，130（4）：691-703.

[13]LITWIN S E， RAYA T E， ANDERSON P G， et al. Abnormal cardiac function in the streptozotocin-diabetic rat. Changes in active and passive properties of the left ventricle[J]. Journal of Clinical Investigation， 1990，86（2）：481-488.

[14]WANG D J， LUO P， WANG Y B， et al. Glucagon-like peptide-1 protects against cardiac microvascular injury in diabetes via a cAMP/PKA/Rho-dependent mechanism[J]. Diabetes， 2013，62（5）：1697-1708.

[15]HASEGAWA H， ICHIOKA S. Effects of lipo-prostaglandin E1 on wound bed microcirculation[J]. Journal of Wound Care， 2015，24（7）：293-294，296，298-299.

[16]GREEN D， HIRSH J， HEIT J， et al. Low molecular weight heparin：a critical analysis of clinical trials[J]. Pharmacological Reviews， 1994，46（1）：89-109.

[17]XIN M， REN L， SUN Y， et al. Anticoagulant and antithrombotic activities of low-molecular-weight propylene glycol alginate sodium sulfate（PSS）[J]. European Journal of Medicinal Chemistry， 2016，114：33-40.

[18]ZHANG C H， ZANG W J， XU J， et al. A method to produce the animal model of diabetic cardiomyopathy[J]. Wei Sheng Yan Jiu， 2006，35（6）：707-711.

[19]IGHODARO O M， AKINLOYE O A. Anti-diabetic potential of Sapium ellipticum （Hochst） Pax leaf extract in Streptozotocin （STZ）-induced diabetic Wistar rats[J]. BMC Complementary and Alternative Medicine， 2017，17（1）：525.

[20]YIN Y H， QI F H， SONG Z H， et al. Ferulic acid combined with astragaloside Ⅳ protects against vascular endothelial dysfunction in diabetic rats[J]. Bioscience Trends， 2014，8（4）：217-226.

[21]WANG Y B， CHEN J W， YANG B， et al. In vivo MR and fluorescence dual-modality imaging of atherosclerosis characteristics in mice using profilin-1 targeted magnetic nanoparticles[J]. Theranostics， 2016，6（2）：272-286.

[22]HOEHN K L， HOHNEN-BEHRENS C， CEDERBERG A， et al. IRS1-independent defects define major nodes of insulin resistance[J]. Cell Metabolism， 2008，7（5）：421-433.

[23]EKUNI D， TOMOFUJI T， IRIE K， et al. Effects of pe-

riodontitis on aortic insulin resistance in an obese rat model[J]. Laboratory Investigation， 2010，90（3）：348-359.

[24]PAN Y F， DONG L W， WANG M， et al. Signal regulatory protein alpha negatively regulates mast-cell activation follo-

wing FcepsilonRI aggregation[J]. European Journal of Immunology， 2013，43（6）：1598-1607.

[25]EIKI J I， NAGATA Y， FUTAMURA M A， et al. Pharmacokinetic and pharmacodynamic properties of the glucokinase activator MK-0941 in rodent models of type 2 diabetes and healthy dogs[J]. Molecular Pharmacology， 2011，80（6）：1156-1165.