miR—155介導(dǎo)PI3K/Akt/mTOR自噬通路對(duì)ApoE^—/—小鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響

[摘要] 目的 探究miR-155對(duì)頸部動(dòng)脈粥樣硬化（AS）斑塊的影響及其與內(nèi)磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）自噬通路的關(guān)系。方法 40只8周齡雄性ApoE-/-小鼠隨機(jī)均分為對(duì)照組（普通飲食）、模型組（頸動(dòng)脈套管術(shù)+高脂飲食+生理鹽水）、miR-155上調(diào)組（頸動(dòng)脈套管術(shù)+高脂飲食+miR-155-LV）和miR-155下調(diào)組（頸動(dòng)脈套管術(shù)+高脂飲食+miR-155-RNAi-LV）。8周后股動(dòng)脈取血檢測(cè)血漿中總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL）水平；取右頸動(dòng)脈以蘇木精-伊紅（HE）染色方法觀察頸動(dòng)脈斑塊生長(zhǎng)情況；Western blot方法檢測(cè)頸動(dòng)脈中自噬相關(guān)蛋白（LC3-Ⅱ）及PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路蛋白的表達(dá)。結(jié)果高脂飲食組小鼠的TC、TG、LDL水平均明顯高于對(duì)照組（F=7.02～48.81，P均<0.05），但高脂飲食的各組小鼠血脂水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05）。與對(duì)照組比較，模型組頸動(dòng)脈管壁增厚、管腔狹窄；與模型組比較，miR-155上調(diào)組頸動(dòng)脈中可見(jiàn)粥樣硬化斑塊進(jìn)一步增大，管腔狹窄加重，而miR-155下調(diào)組頸動(dòng)脈中局部斑塊形成減小，管腔狹窄減輕。與對(duì)照組比較，模型組LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)減少（t=16.31，P<0.05）；與模型組比較，miR-155上調(diào)組中LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)量明顯減少（t=4.41，P<0.05），miR-155下調(diào)組中LC3-Ⅱ蛋白增加（t=4.52，P<0.05）。與對(duì)照組比較，模型組PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路中各蛋白表達(dá)量明顯升高（t=3.30～9.05，P均<0.05），而上調(diào)miR-155后，該通路蛋白表達(dá)量進(jìn)一步升高（t=3.12～3.31，P均<0.05）；下調(diào)miR-155導(dǎo)致該通路蛋白表達(dá)明顯下降（t=3.31～4.88，P均<0.05）。結(jié)論 在ApoE-/-小鼠體內(nèi)，靶向下調(diào)miR-155表達(dá)可抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路促進(jìn)自噬，減少頸部AS斑塊的形成。

[關(guān)鍵詞] 斑塊，動(dòng)脈粥樣硬化；微RNAs；自噬；PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路

[中圖分類號(hào)] R543.5；R342.2

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A

[文章編號(hào)] 2096-5532（2018）03-0253-05

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是一種動(dòng)脈壁的慢性炎性疾病，主要累及大中型動(dòng)脈，尤其是血管分支和管腔迂曲明顯的部位，最重要的并發(fā)癥是動(dòng)脈急性閉塞所致的心肌梗死和腦卒中[1-3]。自噬是細(xì)胞內(nèi)錯(cuò)誤折疊或未折疊蛋白及受損細(xì)胞器被吞噬后在溶酶體內(nèi)降解的過(guò)程[4]。研究表明，自噬水平增高可降低泡沫細(xì)胞內(nèi)脂滴的積累，減少泡沫細(xì)胞積聚，進(jìn)而減少斑塊的形成，并通過(guò)調(diào)控細(xì)胞凋亡從而起到穩(wěn)定斑塊的作用[5-8]。而內(nèi)磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）通路激活后可明顯抑制自噬的發(fā)生并促進(jìn)AS的發(fā)展[9-11]。研究結(jié)果表明，microRNAs（miRNAs）可影響AS形成，并有可能成為AS的治療靶點(diǎn)[12-14]。而miRNAs是一類由內(nèi)源基因編碼的非編碼單鏈RNA 分子[15]，可調(diào)控機(jī)體多種病理生理過(guò)程[16]。miR-155是人類和小鼠的同源基因[17-18]，除了具有維持免疫平衡及抑制腫瘤發(fā)生的作用[19]，還可影響AS的形成。在對(duì)ApoE-/-小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)，AS早期miR-155明顯升高，且miR-155可促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成[20]，但其具體作用機(jī)制尚不明確。為明確miR-155在AS中的作用以及可能的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)雙向干預(yù)小鼠體內(nèi)miR-155的表達(dá)以明確miR-155對(duì)頸部AS斑塊的影響，并進(jìn)一步探討miR-155是否可通過(guò)調(diào)控PI3K/Akt/mTOR自噬通路影響頸動(dòng)脈斑塊的形成。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和高脂飼料 40只6周齡雄性ApoE-/-基因敲除小鼠購(gòu)自北京華阜康生物科技有限股份公司，許可證號(hào)為SCXX（京）2014-0004，經(jīng)中國(guó)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所質(zhì)檢合格。高脂飼料（含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.025的膽固醇和0.150脂肪）購(gòu)自北京華阜康生物科技有限股份公司。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 miR-155-LV與miR-155-RNAi-LV購(gòu)自上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司。PI3K、Akt、p-Akt、mTOR以及自噬相關(guān)蛋白（LC3-Ⅱ）抗體購(gòu)自Abcom公司；GAPDH抗體、山羊抗兔二抗購(gòu)自康為世紀(jì)公司；BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒購(gòu)自TIANGEN公司；300 g/L丙烯酰胺購(gòu)自Solabio公司；Tween 20購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，PVDF膜購(gòu)自Takara公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 低溫高速離心機(jī)（Heal Force公司）；蛋白電泳儀、電轉(zhuǎn)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 AS模型的建立 將40只小鼠隨機(jī)分成4組，每組10只，即對(duì)照組（A組）、模型組（B組）、miR-155上調(diào)組（C組）和miR-155下調(diào)組（D組）。對(duì)照組不做處理，余3組小鼠在2周的適應(yīng)性喂養(yǎng)后逐步過(guò)渡到高脂飲食后，行右頸動(dòng)脈套管術(shù)，具體步驟如下。腹腔注射100 g/L水合氯醛（3 mL/kg）將ApoE-/-小鼠麻醉，沿頸部正中線剪開(kāi)，暴露出氣管和頸總動(dòng)脈鞘，用玻璃分針?lè)蛛x出右頸總動(dòng)脈，動(dòng)脈下穿3根0號(hào)絲線備用，將備好的硅膠管套在右側(cè)頸總動(dòng)脈上，結(jié)扎硅膠管，導(dǎo)致管腔局部狹窄，術(shù)畢縫合皮膚。對(duì)照組小鼠普通飲食，另3組小鼠均予以高脂飲食連續(xù)喂養(yǎng)8周，并根據(jù)頸動(dòng)脈套管處是否有斑塊形成判斷造模成功與否。

1.2.2 慢病毒體內(nèi)轉(zhuǎn)染 miR-155上調(diào)組與miR-155下調(diào)組小鼠于頸動(dòng)脈套管術(shù)后2 d經(jīng)尾靜脈注射相應(yīng)慢病毒200 μL（2×1011TU/L），模型組給予等量生理鹽水，對(duì)照組不做處理。

1.2.3 血脂測(cè)定 4組小鼠喂養(yǎng)8周后，腹腔注射100 g/L的水合氯醛（3 mL/kg）將小鼠麻醉，股動(dòng)脈取血后，3 000 r/min離心取上清，測(cè)定總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL）水平。

1.2.4 組織切片的制作 每組隨機(jī)選5只小鼠取右側(cè)頸動(dòng)脈套管附近血管（對(duì)照組取靠近主動(dòng)脈弓處血管）約3 mm，生理鹽水沖洗后浸泡在40 g/L甲醛溶液中，梯度乙醇脫水、浸蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡下觀察血管AS形成情況。

1.2.5 Western blot實(shí)驗(yàn) 每組隨機(jī)選10只小鼠取其右側(cè)頸總動(dòng)脈用于提取蛋白，并用100 g/L的SDS-聚丙烯酰胺凝膠恒壓電泳分離蛋白，隨后轉(zhuǎn)移蛋白至PVDF膜上，用含50 g/L脫脂奶粉的TBST室溫封閉1 h。加入PI3K抗體（1∶1 000）、Akt抗體（1∶1 000）、p-Akt抗體（1∶1 000）、p-mTOR抗體（1∶1 000）、mTOR抗體（1∶1 000）、LC3抗體（1∶1 000）和GAPDH抗體（1∶100）4 ℃孵育過(guò)夜。12 h后TBST漂洗3次，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗（1∶5 000）室溫孵育1 h。TBST漂洗3次后行ECL法顯色，凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行拍照分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Prism 7統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)用[AKx-D]±s表示，多組間均數(shù)差異性比較采用單因素方差分析，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-155對(duì)高脂飲食小鼠血脂水平的影響

各組小鼠血漿中TG、TC、LDL水平檢查結(jié)果顯示，高脂飲食小鼠各組TG、TC、LDL水平均高于對(duì)照組（F=7.02～48.81，P<0.05），但這3組間血脂水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 miR-155對(duì)小鼠頸動(dòng)脈粥樣斑塊的影響

對(duì)照組未見(jiàn)斑塊形成，管壁結(jié)構(gòu)完整且未見(jiàn)內(nèi)膜增厚。而模型組予以頸動(dòng)脈套管處理后，斑塊形成明顯，管壁內(nèi)膜明顯增厚，周圍均有斑塊形成，管腔狹窄，內(nèi)膜下可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞、泡沫細(xì)胞及膽固醇結(jié)晶。與模型組比較，miR-155上調(diào)組斑塊進(jìn)一步增大，管壁增厚，管腔嚴(yán)重狹窄，內(nèi)膜下可見(jiàn)大量泡沫細(xì)胞與膽固醇結(jié)晶，并可見(jiàn)大量壞死組織和崩解細(xì)胞形成的脂質(zhì)池；而miR-155下調(diào)組僅在局部形成斑塊，管腔狹窄程度也較輕，斑塊形成處內(nèi)膜下可見(jiàn)炎性細(xì)胞、泡沫細(xì)胞及膽固醇結(jié)晶浸潤(rùn)。

2.3 miR-155對(duì)小鼠頸部動(dòng)脈粥樣斑塊中自噬蛋白LC3-Ⅱ的影響

A、B、C、D組自噬蛋白LC3-Ⅱ的表達(dá)量分別為0.608 4±0.012 7、0.278 2±0.0161 1、0.195 3±0.097 3、0.387 7±0.018 1。與對(duì)照組比較，模型組LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)量明顯下降 （t=16.31，P<0.05），與模型組比較，miR-155上調(diào)組LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)量降低（t=4.41，P<0.05），而下調(diào)miR-155后LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)增加（t=4.52，P<0.05）。見(jiàn)圖1。

2.4 miR-155對(duì)小鼠頸部AS斑塊中PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的影響

與對(duì)照組比較，模型組中PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路被激活（t=3.30～9.05，P均<0.05）。而與模型組比較，上調(diào)miR-155表達(dá)可激活A(yù)poE-/-小鼠頸部AS斑塊中的PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路（t=3.12～3.31，P均<0.05），而下調(diào)miR-155則抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的活性（t=3.31～4.88，P均<0.05）。見(jiàn)表2、圖1。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)調(diào)控ApoE-/-小鼠AS模型組中miR-155的表達(dá)量，從而明確miR-155對(duì)AS斑塊的影響，并進(jìn)一步探究與該過(guò)程相關(guān)的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：①miR-155對(duì)高脂飲食ApoE-/-小鼠血脂水平未見(jiàn)明顯影響；②頸動(dòng)脈套管術(shù)造模成功，上調(diào)miR-155可促進(jìn)頸部AS斑塊生長(zhǎng)，而下調(diào)miR-155則可抑制頸部AS斑塊生長(zhǎng)；③上調(diào)miR-155后ApoE-/-小鼠頸部AS斑塊中自噬受到抑制，而下調(diào)miR-155后自噬水平明顯升高。

研究表明，miRNAs可通過(guò)控制內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的代謝，并參與內(nèi)皮損傷及膽固醇逆流等過(guò)程，從而在AS斑塊形成過(guò)程及斑塊穩(wěn)定性中發(fā)揮作用[21]。miR-155作為一種多功能的miRNA，可參與體內(nèi)炎癥、免疫、自噬等過(guò)程的發(fā)生[19，22]。近年來(lái)，miR-155在AS中的作用也引起了越來(lái)越多的關(guān)注。ZHENG等[23]研究結(jié)果顯示，ApoE-/-小鼠內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)miR-155增加后可破壞內(nèi)皮穩(wěn)定性，使內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加，加快脂質(zhì)積聚，從而促進(jìn)斑塊生長(zhǎng)。相關(guān)研究結(jié)果也表明，ApoE-/-/miR-155-/-雙基因敲除鼠較ApoE-/-單基因敲除鼠AS斑塊減少，且觀察到在AS早期，動(dòng)脈中miR-155表達(dá)量明顯增加，從而作者推斷出miR-155促進(jìn)AS的形成[20，24]。上述結(jié)果均提示miR-155具有促AS的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，上調(diào)ApoE-/-小鼠體內(nèi)miR-155后斑塊明顯增大，而在下調(diào)miR-155表達(dá)后斑塊生長(zhǎng)明顯受抑制。因此，我們推測(cè)下調(diào)miR-155可抑制斑塊生長(zhǎng)，靶向下調(diào)miR-155可抑制AS的發(fā)展從而對(duì)動(dòng)脈產(chǎn)生保護(hù)作用，但具體機(jī)制尚不明確。

自噬是維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的重要機(jī)制，受多種miRNAs的調(diào)控并在腫瘤、免疫、炎癥等相關(guān)疾病中產(chǎn)生影響[25]。由于miR-155在不同細(xì)胞或同一細(xì)胞不同分裂時(shí)期的多個(gè)生物過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[19]。因此，提示在不同細(xì)胞中miR-155對(duì)自噬的作用也有所差異。ZHANG等[26]研究結(jié)果表明，在HUVECs中miR-155可促進(jìn)ox-LDL誘導(dǎo)的自噬；相反D′ADAMO等[27]的研究則發(fā)現(xiàn)，miR-155可通過(guò)抑制自噬相關(guān)蛋白從而抑制軟骨細(xì)胞自噬。在本實(shí)驗(yàn)中，雙向調(diào)控miR-155水平后測(cè)定頸動(dòng)脈斑塊中的LC3-Ⅱ蛋白的水平，發(fā)現(xiàn)上調(diào)miR-155可抑制頸動(dòng)脈斑塊中自噬的發(fā)生，而下調(diào)miR-155后自噬抑制明顯減輕。

本研究進(jìn)一步測(cè)定了與自噬密相關(guān)的PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，模型組中PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路蛋白表達(dá)量較對(duì)照組均增加，而與模型組比較，miR-155上調(diào)組中該信號(hào)通路蛋白表達(dá)量增加明顯，miR-155下調(diào)組中該信號(hào)通路蛋白表達(dá)量減少。而ZHUANG等[28]的實(shí)驗(yàn)也表明，下調(diào)miR-155的表達(dá)可抑制PI3K/Akt信號(hào)通路進(jìn)而抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成。綜合本文及他人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們推斷靶向下調(diào)miR-155可抑制ApoE-/-小鼠粥樣硬化斑塊的生長(zhǎng)，對(duì)頸動(dòng)脈起保護(hù)作用，且此過(guò)程涉及的作用機(jī)制考慮與下調(diào)miR-155后抑制PI3K/Akt/mTOR通路進(jìn)而激活自噬有關(guān)。

總而言之，本文研究結(jié)果表明，下調(diào)miR-155可通過(guò)抑制ApoE-/-小鼠頸部AS斑塊中PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路促進(jìn)自噬的發(fā)生，進(jìn)而發(fā)揮抑制頸部AS斑塊的作用。盡管我們未能詳細(xì)闡述miR-155的具體作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制，但本實(shí)驗(yàn)為靶向調(diào)控miR-155以防治AS斑塊提供可靠依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] LUSIS A J. Atherosclerosis[J]. Nature， 2000，407（6801）：233-241.

[2]CARO C G. Discovery of the role of wall shear in atherosclerosis[J]. Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology， 2009，29（2）：158-161.

[3]DAVIES P F. Hemodynamic shear stress and the endothelium in cardiovascular pathophysiology[J]. Nature Clinical Practice Cardiovascular Medicine， 2009，6（1）：16-26.

[4]MIZUSHIMA N， KOMATSU M. Autophagy： renovation of cells and tissues[J]. Cell， 2011，147（4）：728-741.

[5]MARTINET W， DE MEYER G R. Autophagy in atherosclerosis： a cell survival and death phenomenon with therapeutic potential[J]. Circulation Research， 2009，104（3）：304-317.

[6]MARTINET W， LOOF H D， MEYER G R Y D. mTOR inhibition： a promising strategy for stabilization of atherosclerotic plaques[J]. Atherosclerosis， 2014，233（2）：601-607.

[7]WANG X C， LI L X， LI M X， et al. Knockdown of mTOR by lentivirus mediated RNA interference suppresses atherosclerosis and stabilizes plaques via a decrease of macrophages by autophagy in apolipoprotein E deficient mice[J]. International Journal of Molecular Medicine， 2013，32（5）：1215-1221.

[8]LIAO X H， SLUIMER J C， WANG Y， et al. Macrophage autophagy plays a protective role in advanced atherosclerosis[J]. Cell Metabolism， 2012，15（4）：545-553.

[9]ERSAHIN T， TUNCBAG N， CETINATALAY R. The PI3K/AKT/mTOR interactive pathway.[J]. Molecular Biosystems， 2015，11（7）：1946-1954.

[10] PORTA C， PAGLINO C， MOSC A A. Targeting PI3K/Akt/mTOR signaling in cancer[J/OL]. Frontiers in Oncology， 2014，4（4）：64. https：//doi.org/10.3389/fonc.2014.00064.

[11]JIANG Y Q， KOU J Y， HAN X B， et al. ROS-dependent activation of autophagy through the PI3K/Akt/mTOR pathway is induced by hydroxysafflor yellow A-sonodynamic therapy in THP-1 macrophages[J]. Oxidative Medicine and Cellular Longevity， 2017， 2017（8）：8519169.

[12]LOYER X， MALLAT Z， BOULANGER C M， et al. Micro-RNAs as therapeutic targets in atherosclerosis[J]. Expert Opi-nion on Therapeutic Targets， 2015，19（4）：489-496.

[13]SU Z Y， YANG Z Z， XU Y Q， et al. MicroRNAs in apoptosis， autophagy and necroptosis[J]. Oncotarget， 2015，6（11）：8474-8490.

[14]NATARELLI L， SCHOBER A. MicroRNAs and the response to injury in atherosclerosis[J]. Hamostaseologie， 2015，35（2）：142-150.

[15]CARTHEW R W， SONTHEIMER E J. Origins and mechanisms of miRNAs and siRNAs[J]. Cell， 2009，136（4）：642-655.

[16]BURLESON G R， BURLESON F G. Testing human biologicals in animal host resistance models[J]. Journal of Immunotoxicology， 2008，5（1）：23-31.

[17]TAM W. Identification and characterization of human BIC， a gene on chromosome 21 that encodes a noncoding RNA [J]. Gene， 2001，274（1-2）：157-67.

[18]LAGOS-QUINTANA M， RAUHUT R， YALCIN A， et al. Identification of tissue-specific microRNAs from mouse [J]. Current Biology： CB， 2002，12（9）：735-739.

[19]MASHIMA R. Physiological roles of miR-155[J]. Immunology， 2015，145（3）：323-333.

[20]VIRTUE A， JOHNSON C， LOPEZ-PASTRANA J， et al. MicroRNA-155 deficiency leads to decreased atherosclerosis， increased white adipose tissue obesity， and non-alcoholic fatty liver disease： a novel mouse model of obesity paradox[J]. The Journal of Biological Chemistry， 2017，292（4）：1267-1287.

[21]MADRIGALMATUTE J， ROTLLAN N， ARANDA J F， et al. MicroRNAs and atherosclerosis[J]. Current Atherosclerosis Reports， 2013，15（5）：322-335.

[22]TILI E， CROCE C M， MICHAILLE J J. miR-155： on the crosstalk between inflammation and cancer[J]. International Reviews of Immunology， 2009，28（5）：264-284.

[23]ZHENG B， YIN W N， SUZUKI T， et al. Exosome-mediated miR-155 transfer from smooth muscle cells to endothelial cells induces endothelial injury and promotes atherosclerosis[J]. Molecular Therapy： the Journal of the American Society of Gene Therapy， 2017，25（6）：1279-1294.

[24]DU F， YU F， WANG Y Z， et al. MicroRNA-155 deficiency results in decreased macrophage inflammation and attenuated atherogenesis in apolipoprotein E-deficient mice[J]. Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology， 2014，34（4）：759-767.

[25]JIANG P D， MIZUSHIMA N. Autophagy and human diseases[J]. Cell Research， 2014，24（1）：69-79.

[26]ZHANG Z Z， PAN X D， YANG S N， et al. miR-155 Promotes ox-LDL-induced autophagy in human umbilical vein endothelial cells[J/OL]. Mediators of Inflammation， 2017， 2017：917480. doi：10.1155/2017/9174801.

[27]D′ADAMO S， ALVAREZ-GARCIA O， MURAMATSU Y， et al. MicroRNA-155 suppresses autophagy in chondrocytes by modulating expression of autophagy proteins[J]. Osteoarthritis and Cartilage， 2016，24（6）：1082-1091.

[28]ZHUANG Z， HU H， TIAN S Y， et al. Down-regulation of microRNA-155 attenuates retinal neovascularization via the PI3K/Akt pathway[J]. Molecular Vision， 2015，21（10）：1173-1184.