某規(guī)模豬場免疫抗體水平及抗原檢測分析

許小康 ，鄧賢才 ，鄧琍 ，陳茂金 ，黃萃 ，鄔向東 *

（1.萬年縣裴梅動物防疫檢疫站，江西上饒 335500；2.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)院；3.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動科院）

目前我國規(guī)模化豬場幾乎都有自家的豬場疫病免疫程序，對重要傳染病進(jìn)行有計(jì)劃的免疫接種，這對防控烈性傳染病的暴發(fā)起到了至關(guān)重要的作用。但仍有部分豬場疫情不穩(wěn)定，尤其是在保育階段常出現(xiàn)或大或小的問題。針對豬群的不穩(wěn)定，為查找原因，一般可采血清樣本進(jìn)行免疫抗體水平的監(jiān)測，可以了解注射疫苗免疫的免疫效果；同時對病死豬淋巴結(jié)、肺臟和脾臟等病料進(jìn)行重要疫病病原檢測，對判斷疫情具體重要參考意義。2017年3月，江西省某規(guī)模豬場保育豬群出現(xiàn)疫情，隨即送檢了31份血清樣本和3頭患病仔豬到江西農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)院，分別進(jìn)行了重要疫病免疫抗體水平和抗原的檢測。發(fā)現(xiàn)其豬瘟抗體、偽狂犬總抗體、藍(lán)耳病毒抗體均很高；但偽狂犬野毒抗體陽性率也在75%以上，藍(lán)耳抗體參差不齊。病原基因檢測結(jié)果，未檢測到豬瘟病毒和變異藍(lán)耳病毒基因，但檢測到偽狂犬病毒基因和經(jīng)典藍(lán)耳病毒基因。初步判斷該病疫情與藍(lán)耳、偽狂犬野毒感染相關(guān)，現(xiàn)將其具體分析報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣本：31份全血樣本，來自豬場經(jīng)產(chǎn)母豬（19 頭）、公豬（6 頭）、產(chǎn)床仔豬（3 頭）和保育豬（3頭）。離心，棄沉淀，取上清為待檢測血清樣本。

1.1.2 病料：無菌操作采集病死保育豬脾臟、肺臟以及淋巴結(jié)等病料，一共3頭。

1.1.3 抗體檢測試劑盒：試劑盒均購自美國Idexx公司。

豬瘟抗體檢測ELISA試劑盒，批號：99-43220-H641；豬藍(lán)耳抗體檢測ELISA試劑盒，批號：40959-H461，豬偽狂犬總抗體（gB抗體）檢測ELISA試劑盒，批號09732-EM176，豬偽狂犬野毒抗體（gE抗體）檢測ELISA試劑盒，批號：09836-GM453。

1.1.4 細(xì)菌分離所需鮮血培養(yǎng)基，由實(shí)驗(yàn)室參照文獻(xiàn)［1］自行配制并保存。

1.1.5 病毒基因PCR檢測引物，由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)院設(shè)計(jì)并保存。

1.1.6 PCR檢測試劑，購自Shanghai Promega公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌分離：無菌鉤取病料，劃線接種于鮮血培養(yǎng)基，置37℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。

1.2.2 免疫血清抗體檢測：參照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.3 病料中病毒基因檢測：DNA病毒采用PCR方法；RNA病毒采用RT-PCR方法。

對偽狂犬病毒、圓環(huán)病毒等DNA病毒，采用PCR方法進(jìn)行檢測，先從病料中提取DNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后進(jìn)行核酸電泳，觀察結(jié)果。

對豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病毒、豬變異藍(lán)耳病毒等RNA采用RT-PCR方法檢測，先從病料中提取RNA，再以總RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增cDNA，然后以cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后進(jìn)行核酸電泳，觀察結(jié)果。具體方法參見分子克隆實(shí)驗(yàn)指［2］。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離結(jié)果

血平板上沒有細(xì)菌生長，細(xì)菌分離均為陰性。

2.2 免疫血清抗體檢測結(jié)果

豬瘟抗體24頭合格、藍(lán)耳抗體29頭陽性、偽狂犬gB抗體全合格、偽狂犬gE抗體24頭陽性，陽性率分別為77.42%、93.54%、100%、77.42%（具體見表 1、圖 1）。

表1 免疫血清抗體檢測結(jié)果

圖1 不同豬群重要疫病免疫抗體陽性率

2.3 病原基因檢測結(jié)果

電泳見圖2，結(jié)果顯示送檢3頭仔豬藍(lán)耳病毒和圓環(huán)病毒檢測全陽性（+），變異藍(lán)耳病毒、豬瘟病毒全陰性 （-），2頭仔豬偽狂犬病毒陰性、1頭陽性（+）。

圖2 樣品PCR結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1 本次對送檢31份全血樣本提取血清，分別檢測了豬瘟抗體、偽狂犬總抗體和野毒抗體、藍(lán)耳病毒抗體；對3頭仔豬分別檢測了豬瘟病毒、經(jīng)典藍(lán)耳病毒、變異藍(lán)耳病毒、偽狂犬病毒和圓環(huán)病毒。結(jié)果：豬瘟抗體全群合格率77.42%、平均阻斷率57.16%、變異系數(shù)31.88%；藍(lán)耳抗體陽性率93.55%、平均S/P值1.308、變異系數(shù)55.72%；偽狂犬總抗體（gB抗體）全合格，合格率100%；偽狂犬野毒抗體 （gE抗體）陽性率77.42%、平均S/N值0.326、變異系數(shù)108.18%。豬瘟、變異藍(lán)耳全陰性；偽狂犬2頭陰性、1頭陽性；經(jīng)典藍(lán)耳病毒和圓環(huán)病毒全陽性。

3.2 分豬群來看，豬瘟病毒抗體水平種豬較高，母源抗體水平高，因而哺乳仔豬抗體水平也比較高，但到保育豬出現(xiàn)一個明顯的下降，這與豬群在保育發(fā)病情況是一致的。估計(jì)可能是疫情出現(xiàn)導(dǎo)致免疫力下降，仔豬在第一次免疫豬瘟疫苗后，抗體產(chǎn)生受到抑制。藍(lán)耳病毒和偽狂犬野毒抗體全群抗體水平均很高，尤其藍(lán)耳病毒抗體水平特別高，而且變異系數(shù)比較大，說明抗體水平參差不齊。還有2頭（1頭公豬和1頭母豬）藍(lán)耳病毒抗體S/P值已經(jīng)超過2.5，根據(jù)試劑盒的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)提示豬群有藍(lán)耳野毒感染。這與3頭發(fā)病仔豬均查出經(jīng)典藍(lán)耳病毒是一致的。

3.3 根據(jù)檢測結(jié)果，初步判斷本次疫情應(yīng)是藍(lán)耳病毒感染導(dǎo)致豬群免疫力下降（也表現(xiàn)在保育仔豬豬瘟抗體水平明顯下降），豬群偽狂犬野毒感染壓力大，免疫力下降也導(dǎo)致偽狂犬零星發(fā)生，圓環(huán)病毒普通感染。綜合因素作用下，疫情出現(xiàn)。但疫苗的效果還是有的，所以沒有出現(xiàn)大的疫情暴發(fā)，但豬群一到保育階段就不穩(wěn)定，生長速度減慢、消瘦、腹瀉等癥狀出現(xiàn)，死亡數(shù)量增加。

3.4 本次疫情的控制，還是通過綜合措施得以實(shí)現(xiàn)。針對疫情，主要采取加強(qiáng)飼養(yǎng)管理的基礎(chǔ)上，進(jìn)行藥物保健，同時進(jìn)行適度藍(lán)耳疫苗和偽狂犬疫苗的免疫，最終將疫情控制。但偽狂犬野毒感染在普遍的情況下，豬群仍是處于比較危險(xiǎn)狀況中，建議豬場對后備種豬進(jìn)行偽狂犬病的逐步凈化，才是長久之計(jì)。

參考文獻(xiàn)：

［1］胡桂學(xué)主編，獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程 （第二版）［M］，北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社出版，2016.

［2］ J.薩姆布魯克（Sambrook.J.），D.W.拉塞爾著；黃培堂等譯，分子克隆實(shí)驗(yàn)指南（第三版）［M］，北京：科學(xué)出版社，2008.

［3］何海健，張傳亮，陸國林，等.不同年齡豬群中豬瘟抗體監(jiān)測及免疫效果分析［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012（7）：573～575.

［4］劉永波，宋春蓮，謝相悅，等.云南4個規(guī)?；i場豬瘟抗體水平監(jiān)測及免疫效果分析［J］.中獸醫(yī)學(xué)雜志，2017（1）：84～86.

［5］鄭春芳，雷元順，于桂陽，等.湖南永州某縣豬瘟抗體水平效價低的原因分析及改進(jìn)措施［J］.中國動物檢疫，2013（1）：50～52.