微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)范

吳鋒，王博，趙亮，蒲春文

為提高學(xué)校實(shí)驗(yàn)室處理微生物（包括原生動(dòng)物、真菌、浮游生物、細(xì)胞依賴性細(xì)菌和病毒）和轉(zhuǎn)基因生物的生物安全性，保障相關(guān)工作人員掌握開(kāi)展工作必需的知識(shí)，避免實(shí)驗(yàn)室感染，防止實(shí)驗(yàn)室事故，特制定此規(guī)范。

1 學(xué)校管理者責(zé)任

學(xué)校管理者應(yīng)向員工提供實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)，使其認(rèn)識(shí)到學(xué)校微生物實(shí)驗(yàn)室的特殊危害。在實(shí)施風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和明確所有的危險(xiǎn)可控之前，不允許對(duì)相關(guān)的生物進(jìn)行教學(xué)或操作。

學(xué)校應(yīng)至少有一名工作人員作為生物安全委員會(huì)委員，主要職責(zé)有：①對(duì)實(shí)驗(yàn)室安全設(shè)備的使用提出建議；②協(xié)調(diào)和制定實(shí)驗(yàn)室安全計(jì)劃；③明確學(xué)校實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)中包含實(shí)驗(yàn)室實(shí)施工作安全程序的章節(jié)；④調(diào)查實(shí)驗(yàn)室生物安全事故；⑤確保新員工在入職時(shí)得到清晰的安全說(shuō)明；⑥培訓(xùn)和指導(dǎo)員工學(xué)習(xí)安全規(guī)程和消毒操作。

2 實(shí)驗(yàn)室管理者責(zé)任

實(shí)驗(yàn)室管理者必須確保安全程序的制定并付諸實(shí)施，具體如下：①完成員工初期和繼續(xù)教育培訓(xùn)計(jì)劃；②告知全體員工微生物職業(yè)暴露的潛在風(fēng)險(xiǎn)；③確保為實(shí)驗(yàn)室用戶提供個(gè)人防護(hù)裝備；④向基因技術(shù)管理辦公室（OGTR）報(bào)告涉及轉(zhuǎn)基因生物的重組 DNA 事件；⑤在清潔教學(xué)實(shí)驗(yàn)室和準(zhǔn)備區(qū)域時(shí)，應(yīng)向清潔公司做出必要的說(shuō)明。

3 個(gè)人責(zé)任

所有的實(shí)驗(yàn)室工作必須在認(rèn)為對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員安全的前提下進(jìn)行，以下適用于所有實(shí)驗(yàn)室人員：①須熟悉實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)中的建議和要求；②須熟悉安全設(shè)備的使用；③應(yīng)掌握輕微割傷、擦傷以及接觸污染表面造成感染的處理；④在實(shí)驗(yàn)室發(fā)生的所有傷害，應(yīng)記錄并盡快向?qū)嶒?yàn)室管理者報(bào)告；⑤有免疫抑制、免疫缺陷或?yàn)橐赘姓撸ㄈ缭袐D或者糖尿病患者）應(yīng)該告知實(shí)驗(yàn)室管理者，以便采用適當(dāng)?shù)姆婪洞胧?/p>

4 微生物危害等級(jí)

應(yīng)將所有微生物當(dāng)作潛在的病原體，處理與微生物有關(guān)的工作時(shí)，需應(yīng)用一定的技術(shù)使其對(duì)員工、學(xué)生和環(huán)境的危害降至最低，同時(shí)這種技術(shù)也能保持實(shí)驗(yàn)室菌株的純度?；谖⑸飳?duì)個(gè)體和群體的危害程度將其分為 4 級(jí)：危險(xiǎn)等級(jí) 1（低個(gè)體危害，低群體危害）；危險(xiǎn)等級(jí) 2（中等個(gè)人危害，有限群體危害）；危險(xiǎn)等級(jí) 3（高個(gè)體危害，有限群體危害）；危險(xiǎn)等級(jí) 4（高個(gè)體危害，高群體危害）。

學(xué)校實(shí)驗(yàn)室只允許處理危害等級(jí) 1 的微生物，因種類(lèi)太多，故目前沒(méi)有危害等級(jí)為 1 的微生物目錄。但生活在土壤中的微生物，如固氮菌屬、生產(chǎn)醋的醋酸桿菌、釀酒酵母菌、大腸桿菌（K12）、表皮葡萄球菌、藤黃八疊球菌（藤黃微球菌）、枯草芽孢桿菌、紅色毛癬菌和熒光假單胞菌對(duì)學(xué)校實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行教學(xué)工作是安全的。但對(duì)于應(yīng)用免疫抑制劑和免疫受損的人群，一些被認(rèn)為對(duì)人類(lèi)和動(dòng)物正常的部分菌群仍然可能致病。值得注意的是許多寄生蟲(chóng)在感染階段被認(rèn)定為是危險(xiǎn)等級(jí) 2，大多數(shù)植物致病源被認(rèn)為是危險(xiǎn)等級(jí) 1，但仍需依照轉(zhuǎn)基因生物監(jiān)管部門(mén)的規(guī)章制度對(duì)其進(jìn)行遺傳加工和處理。

5 一級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室

學(xué)校實(shí)驗(yàn)室一般屬于一級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室，適合處理風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)為 1 的微生物，實(shí)驗(yàn)室人員可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室操作得到充分的保護(hù)。處理工作可以在開(kāi)放的工作臺(tái)進(jìn)行，沒(méi)有激活或者定植的樣本都可以在這樣的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理。

一級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室的要求如下：①工作室臺(tái)面必須由防水和隔熱材料制成；②座椅應(yīng)有光滑的防水表面并便于清潔；③每個(gè)實(shí)驗(yàn)室房間都應(yīng)在出口處設(shè)置有冷熱水的洗臉池；④工作臺(tái)、柜子和設(shè)備之間和下面的空間須便于清潔；⑤防火設(shè)施須符合相關(guān)規(guī)定。

6 個(gè)人防護(hù)

1.在實(shí)驗(yàn)室須穿戴工作服或罩衫等防護(hù)服；

2.長(zhǎng)發(fā)應(yīng)該束起；

3.所有緊急和安全設(shè)備需要按照生產(chǎn)商的說(shuō)明進(jìn)行保存和維護(hù)；

4.須保證實(shí)驗(yàn)室人員能隨時(shí)使用所有的安全裝備；

5.應(yīng)該識(shí)別所有的工作危害，預(yù)先評(píng)估其風(fēng)險(xiǎn)；

6.不論化學(xué)物濃度多大，皮膚接觸化學(xué)物后必須清洗；

7.嚴(yán)禁用口吹吸移液管；

8.所有的培養(yǎng)物都應(yīng)標(biāo)識(shí)日期；

9.培養(yǎng)物不能在工作臺(tái)上長(zhǎng)時(shí)間保存，應(yīng)轉(zhuǎn)移至專(zhuān)門(mén)的保存區(qū)域，比如冰箱和冷凍室；

10.最好使用不產(chǎn)生氣溶膠的接種環(huán)；

11.采取措施盡量避免氣溶膠的產(chǎn)生；

12.采取預(yù)防措施避免讀寫(xiě)材料受到污染；

13.嚴(yán)禁粘貼標(biāo)簽時(shí)用舌頭舔舐，應(yīng)使用自粘標(biāo)簽；

14.必須馬上清理泄漏的污染物，并對(duì)污染的區(qū)域進(jìn)行消毒處理；

15.每次教學(xué)后或者每天對(duì)工作臺(tái)進(jìn)行一次消毒；

16.專(zhuān)門(mén)的廢物應(yīng)該被隔離存放在廢棄點(diǎn)，并按照當(dāng)?shù)乇O(jiān)管部門(mén)的規(guī)定進(jìn)行消毒和處理；

17.應(yīng)提供防護(hù)衣物和裝備的儲(chǔ)存區(qū)域；

18.離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)徹底清洗手和指甲。

7 實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)

工作區(qū)域的組成：培養(yǎng)基準(zhǔn)備區(qū)、待滅菌物保存區(qū)、滅菌區(qū)、無(wú)菌物品貯存區(qū)、行政工作區(qū)。工作區(qū)域的清潔包括：①工作區(qū)域應(yīng)保持整潔，非正在使用的物品和可能引起泄漏的有害物品不應(yīng)出現(xiàn)在該區(qū)域；②工作臺(tái)應(yīng)在教學(xué)結(jié)束后進(jìn)行清潔和消毒，并將用于滅菌的物品收集起來(lái)；③使用含有清潔劑的拖布清潔地板；④生化實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁使用家用吸塵器，必須使用安裝排氣裝置的高效微?？諝膺^(guò)濾器，以避免產(chǎn)生氣溶膠；⑤定期清理墻壁，對(duì)污染嚴(yán)重的墻壁，需要使用清潔劑清洗；⑥離心機(jī)、水浴器、孵化器、冰箱、冷藏柜和液氮罐等設(shè)備應(yīng)定期清洗、消毒，送修理或處置之前應(yīng)消毒。

8 廢物收集和處理

實(shí)驗(yàn)室廢物應(yīng)用特定容器收集，根據(jù)下列類(lèi)別明確標(biāo)識(shí)。非感染性材料如廢紙、塑料和紙制品應(yīng)放于單層塑料袋中；而注射器針頭、碎玻璃和刀片，應(yīng)放在不易刺破的容器中；感染性樣品殘余、用過(guò)的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、一次性物品和用過(guò)的手套應(yīng)收集在一個(gè)標(biāo)有生化危害的大容器中。

廢物的處理原則有：①所有含有活體微生物的廢物均應(yīng)使用壓力蒸汽滅菌或者化學(xué)消毒劑處理（最少浸泡 30 min，最好是過(guò)夜），經(jīng)消毒處理或化學(xué)處理后的廢物，可在垃圾填埋場(chǎng)處置，但應(yīng)符合當(dāng)?shù)匾?guī)定；②所有涉及轉(zhuǎn)基因生物的處理應(yīng)符合轉(zhuǎn)基因監(jiān)督組織的要求；③未被污染的實(shí)驗(yàn)室廢物處理原則可以和生活垃圾相同。

9 消毒方法

1.壓力蒸汽滅菌：壓力蒸汽滅菌（高壓）是消毒最可靠的手段。壓力蒸汽滅菌器需在高溫高壓下進(jìn)行操作，所以應(yīng)采取適當(dāng)措施保護(hù)人員安全。達(dá)到溫度后的最小滅菌時(shí)間應(yīng)為：121 ℃ 15 min；134 ℃ 4 min。

2.化學(xué)消毒劑：雖然壓力蒸汽滅菌是最可靠的消毒手段，但這種方法不適用于學(xué)校實(shí)驗(yàn)室?；瘜W(xué)消毒通常是學(xué)校對(duì)較大空間或表面區(qū)域和熱不穩(wěn)定的材料或設(shè)備進(jìn)行消毒的唯一可行的方法。常見(jiàn)的消毒方法見(jiàn)表 1。

表1 常見(jiàn)消毒方法

10 實(shí)驗(yàn)室泄露的處理

對(duì)不產(chǎn)生氣溶膠的危害等級(jí)為 1 的微生物泄漏時(shí)，可使用浸潤(rùn)有效化學(xué)消毒劑的紙巾進(jìn)行擦拭，具體步驟如下：①穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服和手套；②用釋放次氯酸鈉的專(zhuān)有吸收材料，進(jìn)行大約 10 min 的消毒；使用鑷子移動(dòng)尖銳的物品，并把其當(dāng)成污染物丟棄；③使用相同的消毒劑溶液擦拭可能被污染的區(qū)域；④仔細(xì)清理溢液和消毒液，并將所有受污染物質(zhì)轉(zhuǎn)移至處置點(diǎn)；⑤脫掉防護(hù)服并洗手。

11 危險(xiǎn)材料運(yùn)輸

根據(jù)材料的傳染性或是否含有轉(zhuǎn)基因微生物，選擇不同的包裝和運(yùn)輸方式，寄件人負(fù)責(zé)確保遵守國(guó)家規(guī)定的包裝和運(yùn)輸規(guī)則。不含有傳染性病原體的生物材料的運(yùn)輸可以不受限制，含有危害等級(jí)為 1 的生物體和那些已知不具有危害等級(jí) 2、3 或 4 的微生物制品的運(yùn)輸不受限制。所有經(jīng)遺傳改良但對(duì)動(dòng)物和人無(wú)傳染性的材料，應(yīng)按照《國(guó)際航空運(yùn)輸協(xié)會(huì)危險(xiǎn)品條例》第913 號(hào)包裝說(shuō)明進(jìn)行包裝。