江西建昌幫姜天麻與其他炮制品中天麻素的含量差異

陸平 金鐳 賈彩虹 李旭冉 念鳳鴻 龔千鋒 葉喜德

[摘要] 目的 建立天麻炮制品中天麻素含量的測定方法，比較姜天麻與其他炮制品中天麻素的含量差異。 方法 采用高效液相色譜法，色譜柱Ultimate3000 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相乙腈-水（3∶97），檢測波長220 nm，流速1 mL/min，柱溫25℃。 結(jié)果 天麻素的進(jìn)樣量和峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.76%，RSD為1.422%，姜天麻、生天麻、硫磺熏蒸天麻中天麻素的含量分別為1.001%、0.458%、0.406%。 結(jié)論 姜天麻與其他不同炮制品中天麻素含量差異較大。本法靈敏，快速簡便，可為深入研究天麻提供參考。

[關(guān)鍵詞] 建昌幫；天麻；天麻素；生姜；含量

[中圖分類號] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）02（a）-0027-04

The content difference of gastrodin between Gastrodia Rhizoma prepared by ginger from Jianchang Faction and other processed products in Jiangxi Province

LU Ping1 JIN Lei1 JIA Caihong1 LI Xuran2 NIAN Fenghong2 GONG Qianfeng2 YE Xide2

1.Department of Pharmacy， the 105th Hospital of Chinese People′s Liberation Army， Anhui Province， Hefei 230031， China； 2.College of Pharmacy， Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Jiangxi Province， Nanchang 330004， China

[Abstract] Objective To establish a method for detecting the contents of gastrodin in processed products of Gastrodia Rhizoma， and to compare the content difference of gastrodin between Gastrodia Rhizoma prepared by ginger and other processed products. Methods High performance liquid chromatography method was conducted for the analysis. The chromatographic column was Ultimate3000 C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）， the flowing phase was acetonitrile-water （3∶97）， the detection wavelength was 220 nm， the flow rate was 1 mL/min， and the column temperature was 25℃. Results The sample amount and peak area of gastrodin showed good linear relationship， the average recovery rate was 99.76%， RSD was 1.42%， the contents of gastrodin in Gastrodia Rhizoma prepared by ginger， raw Gastrodia Rhizoma and Gastrodia Rhizoma prepared by sulfur fumigation were 1.001%， 0.458%， 0.406% respectively. Conclusion The contents of gastrodin in Gastrodia Rhizoma prepared by ginger shows significant differences with other processed products. This method is sensitive， fast and easy， which can provide reference for further research of Gastrodia Rhizoma.

[Key words] Jianchang Faction； Gastrodia Rhizoma； Gastrodin； Ginger； Content

天麻為蘭科植物天麻Gastrodia elata BI.的干燥塊莖[1]，常以冬季至清明前采挖，主產(chǎn)于云南、貴州、四川、東北和華北等地。天麻外表面皺縮，常以“鸚哥嘴”或“紅小辮”，“點(diǎn)環(huán)”和“圓臍”為性狀鑒別特點(diǎn)[2]，其性平，味甘，具息風(fēng)止痙、平抑肝陽、祛風(fēng)通絡(luò)之功[3]，常用于小兒驚風(fēng)、癲癇抽搐、頭目眩暈等證。研究表明[4-5]，天麻具鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抗驚厥、抗癡呆等多種作用，主含天麻素、天麻苷元和黃酮類等多種成分[6]，其中天麻素為其主要有效活性成分，常作為質(zhì)量評價的主要指標(biāo)，該成分易受采集時間、炮制、存儲和運(yùn)輸?shù)榷喾N的影響。

江西“建昌幫”為我國南方古藥幫和中藥炮制重要流派之一，常以“樟幫”合稱為“江西藥幫”[7]。建昌藥幫炮制工藝獨(dú)特[8]、飲片片型精美、臨床療效確切是其主要特點(diǎn)[9]。姜天麻作為其特色飲片之一[10]，采用生姜為輔料，目的是增強(qiáng)天麻止痛、抗眩暈之效。由于生姜具發(fā)表散寒、溫中止嘔之功，具有健胃、抗胃潰瘍、改善血循環(huán)、保肝利膽和抗氧化等活性[11-12]。因此，探討這一炮制變化機(jī)制，具有重要意義。而20世紀(jì)80年代，“建昌幫”主要傳人上官賢就已提出：“天麻的姜制作為建昌幫中藥傳統(tǒng)炮制技術(shù)，已瀕臨失傳和湮沒之危，呼吁有關(guān)方面給予關(guān)注?！比欢?，對姜天麻的研究，目前鮮有文獻(xiàn)報道，其炮制機(jī)制缺少現(xiàn)代研究基礎(chǔ)，臨床推廣受限。為此，本研究基于高效液相色譜法（HPLC），比較姜天麻與其他不同炮制品中天麻素的含量，目的是探討天麻素含量變化差異，以便為深入研究天麻提供基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

儀器：DionexUltiMate3000（LPG-3400SD，四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱，可變波長檢測器和色譜工作站，北京博儀恒業(yè)科技發(fā)展有限公司）；KQ-500E超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，120 W，40 kHz）；AG245電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。

試藥：天麻素對照品（批號：MUST-11122815，由成都曼斯特生物科技有限公司供應(yīng)）；乙腈（色譜純）；水為雙蒸餾水；其余試劑均為分析純。天麻和硫磺熏蒸天麻，均購自樟樹市藥材市場，由江西中醫(yī)藥大學(xué)龔千鋒教授鑒定為蘭科植物天麻Gastrodia elata BI.的干燥塊莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制品制備

天麻生品：依照藥典制法，取原藥材，洗凈，蒸透，切薄片，干燥，粉碎，待用。姜制天麻：取適量生姜，切片，壓榨取汁，浸潤生天麻片，待姜汁被吸盡后，于40℃條件下烘干，置粉碎機(jī)內(nèi)粉碎，待用（生姜與天麻用量比約為12.5∶100）。另取硫磺熏天麻，洗凈，切薄片，烘干，粉碎，待用。

2.2 色譜條件

色譜柱Ultimate3000 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相乙腈-水（3∶97），檢測波長220 nm，流速1 mL/min，柱溫25℃。

2.3 對照品溶液的制備

取天麻素對照品，精密秤定，加乙腈-水（3∶97）混合制成每1 mL含天麻素50 μg的對照品溶液，即得所需的對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

精密稱取天麻生品細(xì)粉（過60目篩）約2 g，將其末放入具塞錐形瓶中，并精密加入50 mL稀乙醇，經(jīng)超聲處理30 min后，精密稱定重量，取出后放冷，稱量，計算超聲前后損失的重量，用稀乙醇補(bǔ)足，0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液10 mL，移至25 mL容量瓶中定容，配比成3∶97的乙腈-水混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得天麻生品供試品溶液[13-16]。分別依法制備天麻姜制品和硫磺熏蒸品供試品溶液，備用。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱定天麻素對照品，加乙腈-水（3∶97）分別制備成12.5、25、50、75、100、125 μg/mL對照品溶液，依據(jù)上述色譜條件測定，以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸，繪制天麻素對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線，得天麻素線行回歸方程y = 0.6323x-0.669，R2 = 0.9995，表明天麻素在12.5～125 μg/mL溶度范圍之間線性關(guān)系良好，見表1和圖1～5。

2.6 精密度試驗

精密稱取天麻素對照品溶液，按“2.2”色譜條件測定，重復(fù)進(jìn)樣6次，測得峰面積的RSD為1.14%，表明該方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗

精密稱取取同一份樣品溶液6份，按“2.3”項下制備溶液，依法測定，得RSD為1.29%，表明該實(shí)驗方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

精密吸取“2.3”項下同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、16、24 h等時間點(diǎn)進(jìn)行測定，得RSD為1.414%，表明天麻樣品溶液在24 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗

精密稱取同一批號已知含量的供試品6份，各約1 g，分別加入天麻素對照品適量，按“2.3”項下制備溶液，以“2.2”項色譜條件下測定，計算天麻素的平均回收率為99.76%，RSD為1.422%，說明該方法回收率良好，見表2。

2.10 樣品測定

取不同天麻炮制品2 g，干燥，粉碎，過60目篩，精密稱量，按“2.3”項下制備供試液，以“2.2”項下色譜條件，測定天麻素的含量，得天麻生品、姜制品和硫磺熏蒸品中天麻素的含量分別為0.458%、1.001%、0.406%，見表3。另取無硫栽培天麻生品，采用不同加工處理方法，按“2.3”項下制備供試液，以“2.2”項下色譜條件，測定天麻素含量，結(jié)果見表4。

3 討論

天麻一般以四川、云南、貴州等省份列為道地藥材，常以天麻素為主要質(zhì)量控制評價指標(biāo)，但其含量受多方面因素的影響[17-20]，如產(chǎn)地、炮制方法、干燥法、儲存環(huán)境和提取方法等，其中炮制對其影響尤為明顯。目前對天麻的炮制，仍以蒸制后曬干、切薄片為主，這是因為加熱可滅活天麻素的分解酶，從而保護(hù)天麻素不受分解。傳統(tǒng)的天麻干燥方法通常為真空干燥，該法能較好地保護(hù)天麻素不被分解。而硫磺熏蒸天麻，主要是為了防止蟲蛀，便于保存，但藥材經(jīng)硫熏后，砷含量增加[21]，對機(jī)體易產(chǎn)生毒副作用。

天麻炮制歷史沿革及近代地方炮制規(guī)范中均有記載，如采用酒、蒺藜子、漿水、姜、蜜、麥麩等法。如張連衛(wèi)[22]提出采用生姜和酒炮制天麻，即天麻制成丸散，常以酒蒸面糊成丸，再以姜湯送服，或熱酒溫服，強(qiáng)調(diào)的是酒與姜對天麻的協(xié)同作用，但未就炮制機(jī)制展開研究。而建昌幫基于臨床經(jīng)驗，提出了姜天麻的炮制方法，天麻經(jīng)姜制后，可增強(qiáng)天麻鎮(zhèn)痛止眩暈作用，但這一作用仍未在臨床獲得推廣，其根本局限在于缺乏現(xiàn)代研究基礎(chǔ)，而判斷炮制對藥材療效高低的重要因素是依據(jù)其主要有效活性成分變化。

基于此，本研究故選擇天麻素作用考察天麻炮制前后變化的主要有效指標(biāo)，目的是探討姜制對天麻素含量的變化情況。本研究結(jié)果表明，三種不同炮制品的含量分別為姜天麻1.001%、生天麻0.458%、硫磺熏蒸天麻0.406%?？梢?，以姜制天麻中天麻素含量相對較高。產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因，可能是由于天麻在姜制過程中，存在加熱這一環(huán)節(jié)，使得姜汁中的某些易于溶出的成分加速了天麻素的溶出，提高了天麻素的溶出率；而硫磺熏蒸品，由于硫磺在熏蒸過程中，有大量砷離子被游離出來，砷含量升高，致使天麻素含量相對降低。但這種變化是否與天麻臨床療效密切關(guān)系，還有待進(jìn)一步闡明，希望本研究能為深入研究天麻提供參考。

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（收稿日期：2017-09-14 本文編輯：張瑜杰）