雙氫青蒿素片劑的研制及溶出度研究

黃 靜

(安徽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，安徽合肥 230061)

青蒿素是從中藥黃花蒿中經(jīng)提取分離出來的一種抗瘧藥，療效高、毒性小。雙氫青蒿素(Dihydroartemisinine)是將青蒿素用硼氫化鈉還原而得到的一個(gè)衍生物，療效迅速，毒副作用小。雙氫青蒿素為過氧化物，具有獨(dú)特的過氧橋結(jié)構(gòu)，其抗虐作用與鐵介導(dǎo)的藥物分子內(nèi)過氧橋裂解產(chǎn)生的自由基有關(guān)[1]。雙氫青蒿素具有強(qiáng)大的抗瘧原蟲作用，其抗虐作用是青蒿素的4～8倍，且對(duì)耐氯喹株瘧原蟲感染亦有效。口服吸收良好，起效迅速。雙氫青蒿素片劑口服吸收完全，生物利用度高，其生物利用度約為青蒿素的10～60倍，適用于各種類型瘧疾的癥狀控制，尤其是對(duì)抗氯喹惡性及兇險(xiǎn)型瘧疾有較好療效[2]。本實(shí)驗(yàn)研制了其片劑，并考察其溶出度。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

片劑四用測(cè)定儀78X-2(上海黃海藥檢儀器廠)；紫外可見分光光度計(jì)UV-2450(日本島津公司)；藥物溶出度儀RCZ-6B(上海黃海藥檢儀器廠)；電熱鼓風(fēng)干燥箱JB101(南通滬南科學(xué)儀器有限公司)；電子天平FA1104(上海民橋天平儀器廠)；旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)ZP-33(上海天祥健臺(tái)藥機(jī)廠)；標(biāo)準(zhǔn)分樣篩(24,20,200,100,80目)(合肥通達(dá)篩網(wǎng)有限公司)。

1.2 試藥

雙氫青蒿素原料藥(浙江新和成藥業(yè)股份有限公司)；微晶纖維素(淮南山河藥用輔料有限公司)；羧甲基淀粉鈉(淮南山河藥用輔料有限公司)；聚乙烯吡咯烷酮K30(中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司)；乳糖(廣東西隴化工廠)；硬脂酸鎂(淮南山河藥用輔料有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方設(shè)計(jì)

2.1.1 劑量依據(jù)

依據(jù)中國藥典2015版二部收載的雙氫青蒿素片，其規(guī)格為20 mg/片，制定本品規(guī)格為20 mg/片。

2.1.2 崩解劑選擇

本品為難溶性藥物，為使藥物能夠快速溶出起效，片劑中需加入適量的崩解劑。常用的崩解劑有淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等，我們選用微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉為崩解劑進(jìn)行處方篩選。

2.1.3 填充劑的選擇

藥物的體積太小不易壓片，本品的劑量較小(規(guī)格為20 mg)，須加入適量的填充劑，以增加片劑的體積。常用的填充劑有糖粉、乳糖、淀粉等，其中乳糖無吸濕性，釋放藥物快，對(duì)藥物含量測(cè)定影響小，我們選用乳糖、淀粉為填充劑進(jìn)行處方篩選。

2.1.4 潤濕劑及粘合劑的選擇

本品擬采用濕法制粒，需加入水、醇或其它粘合劑以產(chǎn)生粘性制成顆粒，對(duì)于疏水性藥物，用PVP水溶液作粘合劑，不但易于均勻濕潤，并能使疏水性藥物顆粒表面變?yōu)橛H水性，有利于藥物的崩解和溶出。結(jié)合主藥和所選用輔料的性質(zhì)，我們選用水、5%PVP溶液及PVP為潤濕劑或粘合劑進(jìn)行處方篩選。

2.1.5 潤滑劑的選擇

為增加顆粒的流動(dòng)性，壓片時(shí)需加入適當(dāng)適量潤滑劑。硬脂酸鎂、滑石粉及微粉硅膠等為常用的潤滑劑。根據(jù)本品的性質(zhì)，我們選用硬脂酸鎂、微粉硅膠為潤滑劑進(jìn)行處方篩選。

2.1.6 處方

根據(jù)本品的劑型特點(diǎn)及原輔料的性質(zhì)和用量等，我們?cè)O(shè)計(jì)了以下6個(gè)處方(表1)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

表1 處方摸索

2.2 制備工藝

將原料藥、輔料在60℃干燥2小時(shí)，原料藥過200目篩，輔料過100目篩，備用。按每處方30片量分別稱取上述各組分，按等量遞增原則混勻，再過80目篩混勻。加入潤濕劑或粘合劑制軟材，過24目篩制粒，所得濕顆粒在60℃恒溫烘箱中通風(fēng)干燥2小時(shí)，其干顆粒過20目篩整粒，加入潤滑劑混勻。調(diào)節(jié)裝量和壓力，壓片，即得。

2.3 溶出度的測(cè)定

2.3.1 溶出介質(zhì)的選擇

本品難溶于水，在乙醇中略溶，參考2010年版藥典，選用0.15%氫氧化鈉-乙醇(4∶1)[4]為溶出介質(zhì)。

2.3.2 測(cè)定波長的選擇

精密稱取雙氫青蒿素原料藥40 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇適量，振搖使雙氫青蒿素溶解并稀釋至刻度，搖勻，靜置2小時(shí)以上，精密量取靜置后溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加0.15%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，在37℃條件下保溫30分鐘，再精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加2%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，置60℃恒溫水浴中反應(yīng)30分鐘，取出冷卻至室溫，以(0.15%氫氧化鈉溶液-乙醇(4∶1))-2%氫氧化鈉溶液(1∶4)為空白，于200～400 nm波長間掃描。

由紫外掃描可知，雙氫青蒿素在2%氫氧化鈉-乙醇溶液(4∶1)中于241 nm波長處有最大吸收。另取處方量的空白輔料。將上述溶液置60℃恒溫水浴中，反應(yīng)30分鐘，冷至室溫，按照分光光度法，在241 nm的波長處測(cè)定吸收度。結(jié)果表明：輔料在此波長下無吸收，不干擾本法的測(cè)定。故選定241 nm為溶出度測(cè)定波長。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱得雙氫青蒿素對(duì)照品40 mg，置250 mL量瓶中，加溶出介質(zhì)(0.15%氫氧化鈉-乙醇(4∶1))溶解并稀釋至刻度，搖勻，置37℃保溫30分鐘，作為對(duì)照品貯備液。精密量取貯備液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL，分別置10 mL量瓶中，加溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，另精密量取溶出介質(zhì)2 mL，置10mL量瓶中，加2%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，作為空白溶液。以濃度(μg/mL)為縱坐標(biāo)，吸收度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸結(jié)果見圖1和表2。

表2 溶出度測(cè)定線性

圖1 線性回歸結(jié)果

得回歸方程為：A=4.335×10-3×C-6.640×10-4(R=0.9998，n=7)。表明雙氫青蒿素在6.54～26.18 μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.4 精密度

精密稱取雙氫青蒿素對(duì)照品10 mg、16 mg、20 mg，分別置250 mL量瓶中，加溶出介質(zhì)充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，置37℃保溫30分鐘。精密量取上述各濃度溶液各2 mL，共5份，分別置10 mL量瓶中，加2%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度。將上述溶液置60℃恒溫水浴中，反應(yīng)30分鐘，冷至室溫，照分光光度法，在241 nm的波長處測(cè)定吸收度，以吸收度計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為1.38%(低)、1.24%(中)、0.87%(高)，本法的精密度良好。

2.3.5 回收率考察

取雙氫青蒿素對(duì)照品10 mg、16 mg、20 mg，各3份，分別置250 mL量瓶中，加入處方比例的空白輔料約60 mg，共9份，分別置上述量瓶中，加溶出介質(zhì)充分溶解并稀釋至刻度，在37℃條件下保溫30分鐘，再精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加2%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，作為供試品溶液。另取雙氫青蒿素對(duì)照品適量，加乙醇溶解并定量稀釋成每1mL中含0.4 mg的溶液，放置2小時(shí)以上，精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加0.15%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，置37℃保溫30分鐘，再精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加2%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。將供試品溶液及對(duì)照品溶液置60℃恒溫水浴中，反應(yīng)30分鐘，同時(shí)取出，冷至室溫，照分光光度法，在241 nm的波長處測(cè)定吸收度，計(jì)算結(jié)果見表3。

結(jié)果表明，本法測(cè)定雙氫青蒿素片溶出度方法的回收率良好。

2.3.6 制劑處方溶出度的測(cè)定

取各處方的樣品，照溶出度測(cè)定法，以0.15%氫氧化鈉-乙醇(4∶1)250 mL為溶劑，依法操作，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液5 mL(同時(shí)補(bǔ)充溶液5 mL)，濾過，精密量取續(xù)濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加2%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，作為供試品溶液。另取雙氫青蒿素對(duì)照品適量，加乙醇溶解并定量稀釋成每1 mL中含0.4 mg的溶液，精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加0.15%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，再精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加2%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。將供試品溶液及對(duì)照品溶液置60℃恒溫水浴中，反應(yīng)30分鐘，同時(shí)取出，冷至室溫，結(jié)果見表4。

表3 溶出度測(cè)定回收率試驗(yàn)

表4 各處方溶出度測(cè)定結(jié)果

處方1、2制得的樣品溶出度不符合要求；處方3、4溶出度均符合要求，但處方3溶出稍慢；處方5、6壓出的片子外觀性狀、溶出度均符合要求，但處方5溶出偏慢。綜合考慮，處方4、6為最佳處方，按照處方4、6制備的片劑其外觀性狀、溶出度均較為理想。但處方4中的微粉硅膠較硬脂酸鎂價(jià)格高，從成本考慮，選擇處方6作為最佳處方。

2.3.7 樣品溶出曲線考察

取處方6的片子，照溶出度測(cè)定法，以0.15%氫氧化鈉-乙醇(4∶1)250 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)5、10、15、30、45、60分鐘時(shí)，取溶液5 mL(并同時(shí)補(bǔ)液5 mL)，濾過，精密量取續(xù)濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加2%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，作為供試品溶液。照上述方法操作，在241 nm的波長處測(cè)定吸收度，繪制出溶出曲線,結(jié)果見表5和圖2。

表5 樣品溶出曲線數(shù)據(jù)

圖2 溶出曲線

3 結(jié)果和討論

(1)劑量小的藥物通過濕法制?？蛇_(dá)到含量準(zhǔn)確、分散良好，同時(shí)獲得良好的流動(dòng)性，減少細(xì)粉飛揚(yáng)。故采用濕法制粒。(2)本品為難溶性藥物，必須有足夠的細(xì)度以保證混合均勻及溶出度要求。(3)本品藥物量少，與輔料量相差懸殊，要采用等體積遞增混合法混勻。(4)制軟材時(shí)要控制潤濕劑或粘合劑的用量，使軟材達(dá)到“握之成團(tuán)，觸之即散”，并以握后掌上不粘粉為度。

[參考文獻(xiàn)]

[1]翟自立,肖樹華.青蒿素類抗虐藥的作用機(jī)制[J].中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲雜志,2007(3):182-185.

[2]趙凱存,宋振玉.雙氫青蒿素在人的藥代動(dòng)力學(xué)及與青蒿素的比較[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2006(5):342-346.

[3]侯惠民,王浩,張光杰,等.藥用輔料應(yīng)用技術(shù)[M].2版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005:53-78.

[4]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典二部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.