轉(zhuǎn)錄因子DLX4與EMT相關(guān)蛋白在乳腺癌中表達(dá)與意義研究

柳蘇玲

【中圖分類號】R737 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851（2018）02-0-01

對于女性群體來說，乳腺癌是非常常見的一種危害極大的惡性腫瘤，乳腺癌居女性惡性腫瘤發(fā)病中發(fā)病率非常高的位置，導(dǎo)致女性身心健康受到嚴(yán)重的影響，甚至嚴(yán)重的危及到患者的生命。癌基因是轉(zhuǎn)錄因子DLX4最明顯的特征，上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化EMT相關(guān)蛋白主要包括兩個，第一個是E-cadherin，第二個是vimentin，其主要與以下兩個因素相關(guān)：乳腺癌侵襲和乳腺癌轉(zhuǎn)移。本次研究收集乳腺癌以及對應(yīng)癌旁組織標(biāo)本各200件作為分析主體，分析在乳腺癌組織中轉(zhuǎn)錄因子 DLX4 與 EMT 相關(guān)蛋白的表達(dá)以及意義。詳細(xì)如下所示：

1 資料選擇以及方法

1.1 資料選擇 選取2015年1月到2017年12月期間，選擇各200例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌標(biāo)本（100例乳腺癌以及100例癌旁組織標(biāo)本）作為分析主體，分析其病理分級情況得到：有68例Ⅰ級例數(shù)；有92例Ⅱ級例數(shù)；有40例Ⅲ級例數(shù)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 都需要進(jìn)行病理學(xué)專家確診，確診之后結(jié)果為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌或者是癌旁組織；均沒有接受過經(jīng)放治療以及化療治療；

存在完整的患者隨訪資料以及數(shù)據(jù)。

1.3 試劑的準(zhǔn)備 自北京中杉金橋公司購SP法進(jìn)行免疫組化，嚴(yán)格按試劑盒說明書完成具體操作步驟[1]。在Santa Cruz公司購取以下試劑：鼠抗單克隆抗體β-actin試劑、羊抗單克隆抗體DLX4試劑。在北京中杉金橋公司購取以下試劑：兔抗單克隆抗體vimentin試劑、鼠抗單克隆抗體E-cadherin試劑。在ATCC細(xì)胞庫購取以下細(xì)胞：乳腺癌細(xì)胞系MDA-MD-231。使用SP法進(jìn)行免疫組化的情況：完成脫蠟水化以及抗原修復(fù)，完成一抗的滴加，保持溫度為4℃，儲存過夜，進(jìn)行有效的PBS洗滌操作，進(jìn)而完成二抗的滴加，進(jìn)行PBS洗滌，使用DAB完成顯色工作，在完成蘇木精復(fù)染之后則使用雙蒸水進(jìn)行洗滌，之后進(jìn)行進(jìn)一步的脫水工作、透明工作以及封固工作。

1.4 方法

1.4.1 乳腺癌細(xì)胞系 MDA-MD-231 細(xì)胞的培養(yǎng) 在完成細(xì)胞收集之后，完成裂解液的添加，實現(xiàn)蛋白的添加，添加樣緩沖液，對其混合混勻，之后煮沸，轉(zhuǎn)性處理，在室溫進(jìn)行靜置，在完全冷卻之后，需要將其置放于零下20℃的環(huán)境下進(jìn)行存?zhèn)涫褂?。之后分離使用10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，實現(xiàn)硝酸纖維素（NC）膜的轉(zhuǎn)移，之后使用5%脫脂牛奶進(jìn)行一個小時的封閉處理，并且分別加入以下試劑：1∶2 000比例的鼠抗β-actin單克隆抗體試劑；1∶1 000比例的兔抗vimentin試劑；1∶1 000比例的鼠抗E-cadherin試劑；1∶500比例的羊抗DLX4試劑。之后將其處于4℃的環(huán)境下，需過夜，在第二天，完成三次的洗膜處理，添加1∶2 000比例的二抗HRP，將其處于37℃的環(huán)境下完成兩個小時的反應(yīng)，之后完成三次的洗膜處理，之后進(jìn)行NBT/BCIP顯色處理，對其進(jìn)行水洗，完成反應(yīng)的終止。使用圖像處理儀完成掃描工作，半定量分析使用的是Image J軟件。

1.4.2 免疫組化 使用免疫組化SP法染色。vimentin于胞質(zhì)表達(dá)。DLX4陽性信號主要指的是棕黃色信號或者是棕褐色信號，于細(xì)胞膜表達(dá)。E-cadherin陽性信號主要指的是棕黃色信號，于細(xì)胞膜表達(dá)[2]。

2 結(jié)果

2.1 DLX4、E-cadherin以及vimentin在乳腺癌和癌旁組織中的表達(dá)

分析得到：乳腺癌組織的DLX4的表達(dá)、vimentin的表達(dá)的陽性率均高于癌旁組織；同時，E-cadherin的表達(dá)低于癌旁組織的陽性率表達(dá)。

2.2 DLX4、E-cadherin的表達(dá)、vimen-tin 在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)

檢測乳腺癌細(xì)胞選擇使用Western blot檢測方法，在完成檢測之后得到以下的結(jié)果：

選擇的是乳腺癌細(xì)胞系，分析DLX4在MDA-MD-231細(xì)胞的表達(dá)情況，DLX4在該細(xì)胞的中為高表達(dá)，而在MDA-MD-231細(xì)胞中E-cadherin得到的結(jié)果是低表達(dá)，而vimentin則呈現(xiàn)一個高表達(dá)的結(jié)果。

3 結(jié)論

EMT具有非常顯著的特征，那就是E-cadherin（上皮性標(biāo)志物）表達(dá)下調(diào)，同時還存在vimentin（充質(zhì)蛋白）Fibronectin（充質(zhì)蛋白）表達(dá)升高的情況。然而，EMT具有的最為主要的一個特征就是降低的E-cadherin表達(dá)結(jié)果，并且還存在vimentin表達(dá)結(jié)果升高的情況[3]。

在完成本次研究之后發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌組織中，DLX4的結(jié)果是高表達(dá)的情況，如果是在高侵襲性的癌細(xì)胞系中則結(jié)果為高表達(dá)，如果是在低侵襲性癌細(xì)胞系中結(jié)果則是低表達(dá)。綜上所述，轉(zhuǎn)錄因子DLX4跟E-cadherin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)結(jié)果為兩者之間負(fù)相關(guān)，同時DLX4跟vimentin表達(dá)之間則結(jié)果為正相關(guān)，所以，上述提到的DLX4、E-cadherin、vimentin之間或存在一種調(diào)控的關(guān)系，這是促使腺癌實現(xiàn)局部侵襲的主要原因，同時也是導(dǎo)致出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的主要原因。

參考文獻(xiàn)

王魯英，王永紅，葉瓊，王秋穎.乳腺癌患者中轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白1和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及臨床意義[J].實用癌癥雜志，2017，32（10）：1580-1583.