IL-6及其受體在膽管癌患者組織中的表達及臨床意義

劉亮亮，黃 強，劉臣海，劉 振，齊 燦

膽管癌是一種缺乏早期診斷，膽汁異質(zhì)性的惡性腫瘤。但是其發(fā)病機制仍很大程度上未知。早期膽管癌一般無癥狀，并且通常在晚期階段被診斷[1]。白細(xì)胞介素6(interleukin-6 , IL-6)是一種多功能的細(xì)胞因子, 通過與細(xì)胞膜的受體(IL-6R)結(jié)合后可作用于多種靶細(xì)胞, 近年來研究[2]顯示IL-6及IL-6R對腫瘤細(xì)胞生長、疾病的病理進程及病情嚴(yán)重程度均有影響。但關(guān)于其在膽管癌組織中的表達情況及其與膽管癌的臨床病理的關(guān)系尚未報道。該研究利用Western blot方法檢測兩種蛋白在膽管癌中的表達，并對其表達意義進行探討。

1 材料與方法

1.1病例資料收集安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院2009年5月～2011年7月手術(shù)切除并經(jīng)病理組織學(xué)證實的膽管癌及癌旁的標(biāo)本40例。所有患者術(shù)前未進行放療、化療、免疫治療等抗腫瘤治療，其中男23例，女17 例，年齡41～80(61.9±8.6) 歲。上段膽管癌(肝門部膽管癌) 24例，中下段膽管癌16 例。經(jīng)病理檢查證實屬高分化腺癌14例，中低分化腺癌26例，手術(shù)中探查及術(shù)后病理切片證實無癌周及遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者16例，已發(fā)生轉(zhuǎn)移者24 例。按照肝外膽管癌TNM 分期進行臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期25例。所有患者行膽管癌根治性手術(shù)R0切除。

1.2Westemblot法檢測IL-6、IL-6R蛋白表達水平過蛋白酶抑制劑處理膽管癌及癌旁組織提取總蛋白，之后經(jīng)過上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育后，最終經(jīng)化學(xué)發(fā)光、顯影、定影后，對膠片進行掃描。通過UVP 凝膠圖像處理系統(tǒng)與Abworks 4.6軟件分析目的條帶與β-actin 條帶灰度值之比來表示目的蛋白的相對表達水平?？?IL-6、IL-6R一抗稀釋濃度為1 ∶200;抗-Actin 一抗稀釋濃度為1 ∶500; 二抗稀釋度為1 ∶5 000。

1.3隨訪采用電話隨訪或信訪。40例均進行了隨訪，通過隨訪獲取生存情況后，繪制生存曲線，分析IL-6及IL-6R在膽管癌組織中的表達與預(yù)后的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件進行分析。組間均數(shù)比較采用t檢驗，生存率的計算采用Kaplan-Meier法，并作Log-Rank檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1IL-6及IL-6R在膽管癌及癌旁組織中的表達通過Western blot法檢測40例膽管癌標(biāo)本中IL-6及IL-6R的表達水平，結(jié)果通過Western blot分析，IL-6R的灰度值在膽管癌組織和癌旁組織分別為(0.780±0.120)和(0.158±0.059)(P<0.05)；IL-6灰度值在膽管癌組織和癌旁組織分別為(0.480±0.112)和(0.058±0.010)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

表1 膽管癌組織中IL-6及IL-6R蛋白的表達與臨床病理關(guān)系±s)

圖1 膽管癌組織與癌旁組織中的受體表達情況

2.2膽管癌組織中IL-6及IL-6R表達水平與臨床病理特征的關(guān)系IL-6及IL-6R表達水平與腫瘤分化程度，TNM分期和淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，且呈正相關(guān)性；在低分化組中表達明顯高于高中分化組，T1+T2期分組中表達水平要明顯低于T3+T4期分組，淋巴轉(zhuǎn)移組表達水平要高于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.3IL-6及IL-6R表達水平與膽管癌預(yù)后的關(guān)系在40例膽管癌患者中IL-6及IL-6R高表達的26例，低表達的14例。Kaplan-Meier 生存分析顯示IL-6及IL-6R高表達者的中位生存期為25.30個月，生存率為7.6%,26例患者中僅2例存活；IL-6及IL-6R低表達者的中位生存期為57.00個月，生存率為35.7%，14例患者中5例存活，經(jīng)Log-Rank檢驗，顯示IL-6及IL-6R高表達者與低表達者生存率相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.080，P=0.043) ，其中生存分析的截尾時間為60個月。見圖2。

3 討論

膽管癌是一種來源于膽管上皮的惡性腫瘤，癌變的過程中炎癥因子在這個過程中發(fā)生了重要的作用，同時在臨床診治中硬化性膽管炎被廣泛認(rèn)為是一種癌前病變，增加了膽管癌發(fā)生的風(fēng)險[3]。而白細(xì)胞介素在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用[4]，本研究探討的IL-6被認(rèn)為是與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的炎癥因子，國外多項研究[4]結(jié)果顯示IL-6能夠促進多種腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移以及影響患者的預(yù)后，例如食道癌等。然而IL-6 的多種生物學(xué)活性是通過IL-6R 介導(dǎo)的,IL-6和IL-6R 形成復(fù)合物后發(fā)揮其生物學(xué)活性。IL-6和IL-6R間有相互協(xié)同的作用, 其異常可影響免疫、造血和內(nèi)分泌系統(tǒng)功能紊亂, 甚至誘發(fā)惡性腫瘤。

圖2 膽管癌組織中表達IL-6及IL-6R表達水平

國外已有文獻[5]在血清學(xué)水平檢測了胃癌患者中血清IL-6水平，顯示胃癌患者血清IL-6水平明顯增高，并指出IL-6是一種診斷胃癌的潛在指標(biāo)。本實驗通過膽管癌組織學(xué)水平研究結(jié)果顯示IL-6及IL-6R表達水平與腫瘤分化程度，TNM分期和淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，且呈正相關(guān)性，推測腫瘤的惡性程度越高，其表達水平越高。40例患者通過手術(shù)后，根據(jù)隨訪結(jié)果，應(yīng)用Kaplan-Meier生存分析顯示生存分析顯示IL-6及IL-6R高表達者生存率明顯低于低表達者并且差異有統(tǒng)計學(xué)意義；推測IL-6及IL-6R表達水平越高，患者預(yù)后越差。同時有國內(nèi)外研究[6-7]顯示IL-6能夠通過激JAK/STAT途徑來增強其增值，侵襲和遷移的能力。但是IL-6及IL-6R在促進人體膽管癌細(xì)胞的侵襲和遷移是否通過該信號通路，也是需要的進一步的組織學(xué)實驗進行驗證及探索。

綜上所述，IL-6及IL-6R在惡性腫瘤中的作用可能是一種機體對腫瘤產(chǎn)生反饋，IL-6及IL-6R是促進膽管癌生長作用過程中的重要分子，有望成為診斷及治療膽管癌的新靶點。

[1] Banales J M, Cardinale V, Carpino G, et al.Expert consensus document: Cholangiocarcinoma: current knowledge and future perspectives consensus statement from the European Network for the Study of Cholangiocarcinoma (ENS-CCA)[J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol,2016,13(5):261-80.

[2] Ibrahim S A, El-Ghonaimy E A, Hassan H,et al.Hormonal-receptor positive breast cancer: IL-6 augments invasion and lymph node metastasisviastimulating cathepsin B expression.[J]. J Ady Res,2016,7(5):661-70.

[3] Ehlken H, Zenouzi R, Schramm C.Risk of cholangiocarcinoma in patients with primary sclerosing cholangitis: diagnosis and surveillance.[J].Curr Opin Gastroenterol,2017,33(2):78-84.

[4] Lukaszewicz-Zajac M,Mroczko B, Kozlowski M, et al. Higher importance of interleukin 6 than classic tumor markers(carcinoembryonic antigen and squamous cell cancer antigen) in the diagnosis of esophageal cancer patients[J].Dis Esophagus, 2012,25(3):242-9.

[5] Sánchez-Zauco N, Torres J, Gómez A,et al.Circulating blood levelsof IL-6, I-FN-γ, and IL-10 as potential diagnostic biomarkers in gastric cancer: a controlled study[J].BMC Cancer,2017,17(1):384.

[6] 瞿 帥，宋 楊，梅金玉，等.IL-17及其受體調(diào)控JAK/STAT3信號通路促進喉癌血管生成的作用[J]. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2015,50(10):1464-7.

[7] Ilamathi M, Prabu P C, Ayyappa K A,et al.Artesunate obliterates experimental hepatocellular carcinoma in rats through suppression of IL-6-JAK-STAT signalling.[J].Biomed Pharmacother,2016,82:72-9.