沙苑子的保肝作用實(shí)驗(yàn)研究

渭南職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西　渭南　714000

沙苑子來源于豆科(Leguminosee)植物扁莖黃芪AstragaluscomplanatusR.Br.的干燥成熟種子，其性味甘溫，歸肝、腎二經(jīng)，具有養(yǎng)肝明目、補(bǔ)腎助陽、固精縮尿止帶的功效。實(shí)驗(yàn)以四氯化碳制備小鼠急性化學(xué)性肝損傷模型，研究沙苑子的保肝作用，以期為肝病的防治，提供更為廣泛的藥源。

1　材料

1.1動(dòng)物SPF級(jí)昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，由陜西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)是陜醫(yī)動(dòng)證字第08-025號(hào)。

1.2藥物沙苑子購(gòu)于華芝堂藥店，經(jīng)渭南職業(yè)技術(shù)學(xué)院孫教授鑒定為正品沙苑子，然后制備成濃度為600 mg生藥/mL、300 mg生藥/mL、150 mg生藥/mL的水煎液，按1 mL/kg體重的劑量給藥，分為三個(gè)計(jì)量組：高(600 mg生藥/kg體重)、中(300 mg生藥/kg體重)、低(150 mg生藥/kg體重)。雙環(huán)醇片(規(guī)格25 mg/片，批號(hào)：130815，北京協(xié)和藥廠)。

1.3試劑四氯化碳(CCL4，批號(hào)：20151030，廣州光華化學(xué)廠有限公司)制備成10%的花生油油劑。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.4儀器UV-754紫外可見分光光度計(jì)(上?？茖W(xué)精密儀器有限公司)。

2　方法

2.1分組將小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，即正常對(duì)照組，模型組，雙環(huán)醇陽性對(duì)照組，沙苑子高(600 mg生藥/kg體重)、中(300 mg生藥/kg體重)、低(150 mg生藥/kg體重)劑量組。

2.2試驗(yàn)方法除正常對(duì)照組與模型組灌胃生理鹽水，其余藥物組灌胃相應(yīng)藥物，1次/d，連續(xù)7 d。末次灌胃后1 h，除正常對(duì)照組外，其余各組腹腔注射四氯化碳花生油油劑造模24 h，眼眶靜脈采血，靜置1 h，3000 rpm離心10 min，取血清100 μL，測(cè)定ALT、AST活性。取小鼠肝臟，用生理鹽水制成10%的肝組織勻漿，離心，取上清，測(cè)定CAT、GSH活性。

3　結(jié)果

與正常組對(duì)比，模型組ALT、AST顯著升高(P<0.01)，CAT、GSH顯著降低(P<0.01)，說明模型制備成功。沙苑子高劑量組可降低血清ALT(P<0.05)，降低AST但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，升高肝組織中CAT、GSH活性(P<0.01)；中劑量組與雙環(huán)醇陽性對(duì)照組均可降低血清ALT(P<0.01)，降低AST(P<0.05)，升高肝組織中CAT、GSH活性(P<0.01)；低劑量組對(duì)四氯化碳引起的小鼠血清ALT、AST升高均無明顯作用(P>0.05)，但可以顯著升高肝組織中CAT活性(P<0.01)。見表1。

組別劑量/g/kgALT/U/LAST/U/LCAT/U/mgprotGSH/mg/gprot正常對(duì)照組-405±1311465±201755±175011±43模型對(duì)照組-3312±1259△△3164±1272△△569±20△△1407±46△△雙環(huán)醇組0151605±582??1933±661?1162±48??9763±139??沙苑子高0061776±1172??2886±12721379±33??9493±93??沙苑子中0031552±1187??2101±763?1330±09??5492±48??沙苑子低00152167±16022261±10541413±82??1734±57

注：與正常對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4　討論

反應(yīng)肝臟毒性的血清酶指標(biāo)是丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，二者存在于機(jī)體肝細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)肝細(xì)胞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破壞，通透性改變，可從細(xì)胞內(nèi)逸出而進(jìn)入血液循環(huán)[1]。研究表明[2]氧化應(yīng)激能夠損傷肝細(xì)胞，在肝臟疾病中起重要作用。大量的ROS可氧化不飽和脂質(zhì)導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化，加劇線粒體功能障礙。此外，抗氧化物質(zhì)的缺乏使ROS滅活障礙，進(jìn)一步增加ROS對(duì)線粒體的損傷作用，致使AST、ALT流出細(xì)胞，消耗細(xì)胞內(nèi)的抗氧化物質(zhì)，導(dǎo)致過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)缺乏，形成惡性循環(huán)，從而引起肝臟疾病。試驗(yàn)結(jié)果顯示以300 mg生藥/kg體重沙苑子灌胃給藥，可達(dá)到陽性對(duì)照藥雙環(huán)醇的效果，均能顯著降低血清ALT(P<0.01)，降低AST(P<0.05)，顯著升高肝組織中CAT、GSH活性(P<0.01)，表明沙苑子在300 mg生藥/kg體重劑量下，可通過升高肝組織中CAT、GSH活性來降低AST、ALT，以達(dá)到保護(hù)肝臟免受CCL4所致的急性化學(xué)性損傷，其機(jī)制還需后續(xù)深入研究。

[1]Jain AK，Jaiswal AK．Phosphorylation of tyrosine 568 controis nuclear export of nrf2[J]．J Biol Chem，2006, 281(17) ∶12132-12142．

[2]Matsuzawa NN，Takamura T，Ando H，et al．Increased oxidative stress precedes the onsetofhigh-fatdiet-induced insulin resistance and obesity[J]．Metabolism，2008,57(8) ∶1071-1077．