晚期肺鱗癌FOXM1表達(dá)水平與臨床病理特征及吉西他濱化療療效的相關(guān)性

張琰 王強(qiáng) 單莉（通訊作者）

（新疆醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院肺內(nèi)科一病區(qū) 新疆 烏魯木齊830011）

非小細(xì)胞肺癌（non-smallcelllung cancer，NSCLC）是世界范圍內(nèi)病死率最高的惡性腫瘤。近年來，NSCLC的發(fā)病率呈增長趨勢，手術(shù)是最有效的治療手段[1]。NSCLC的主要病理類型包括肺腺癌和肺鱗癌，其中肺鱗癌約占20%～30%,NSCLC在疾病早期較難被發(fā)現(xiàn)，而進(jìn)展期的NSCLC患者5年的生存率小于15%[2]。不同于肺腺癌在各個(gè)分子靶向藥物中取得的突破性進(jìn)展，晚期肺鱗癌的治療效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如腺癌[3]。以吉西他濱、紫杉類藥物為主的化療方案是目前治療肺鱗癌的主要方案，但化療效果存在個(gè)體差異。FOXM1作為FOX轉(zhuǎn)錄因子家族中的重要成員之一，在哺乳動(dòng)物器官的發(fā)育、細(xì)胞的分化和增殖中發(fā)揮著極為重要的作用[4]，F(xiàn)OXM1具有刺激細(xì)胞增殖的作用，故其對于惡性腫瘤的形成及惡化中具有非常重要的意義。本研究探討晚期肺鱗癌FOXM1表達(dá)水平與臨床病理特征及吉西他濱化療療效的相關(guān)性

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2012年—2014年經(jīng)組織病理證實(shí)為肺鱗癌患者105例進(jìn)入本研究，均行表皮生長因子受體基因檢測證實(shí)為野生型。組織學(xué)分型、分級采用2004年世界衛(wèi)生組織公布肺惡性上皮性腫瘤組織分類，TNM分期采用國際肺癌研究學(xué)會(huì)（IASLC）2009年第7版分期。105例患者中男64例，女41例；年齡35～72歲，中位年齡54歲；病理類型均為鱗癌；分期為IIIB～I(xiàn)V期，IIIB期46例，IV期59例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例；病理分級高中分化55例，低分化50例；有吸煙史64例，無吸煙史41例。

1.2 治療方法及療效評價(jià)

病人均采用吉西他濱1000mg/m2，第1天和第8天靜點(diǎn)，卡鉑注射液按照AUC=5計(jì)算，于第1天靜點(diǎn)。每21天為1周期，每2周期復(fù)查CT進(jìn)行療效評價(jià)，療效評價(jià)按照實(shí)體瘤療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（RECIST）1.1版進(jìn)行。分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）及疾病進(jìn)展（PD）?？陀^有效率（ORR）是指CR和PR患者占所有患者的比率。無進(jìn)展生存時(shí)間(PFS)是指腫瘤患者從接受化療開始到觀察到疾病進(jìn)展或者發(fā)生因?yàn)槿魏卧蛩劳龅倪@段時(shí)間。

1.3 免疫組化染色

選取石蠟標(biāo)本進(jìn)行4um連續(xù)切片，然后行免疫組化染色，步驟參考試劑盒說明書。用已知的陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。FOXM1蛋白的陽性表達(dá)主要表現(xiàn)為細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，同時(shí)細(xì)胞胞漿內(nèi)也可呈現(xiàn)少量棕黃色顆粒，因此以細(xì)胞核或細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 FOXM1表達(dá)檢測結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)

每例標(biāo)本選擇5個(gè)高倍視野，根據(jù)細(xì)胞質(zhì)染色的程度和陽性染色細(xì)胞百分比進(jìn)行綜合評分。細(xì)胞質(zhì)染色程度評分標(biāo)準(zhǔn)：不著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕褐色為3分。陽性染色細(xì)胞百分比評分標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞小于1%為0分，1%～10%為1分，11%～50%為2分，＞50%為3分。染色程度評分與陽性染色細(xì)胞百分比評分的乘積大于或等于4分為FOXM1陽性表達(dá)，0～3分為FOXM1陰性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，無進(jìn)展生存期（PFS）的比較采用Kaplan-Meier法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 免疫組化結(jié)果

FOXM1蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核，呈棕黃色或棕褐色顆粒。在105例患者中，陽性表達(dá)47例，陰性表達(dá)58例，陽性表達(dá)率44.8%（47/105）。詳見圖1和圖2。

2.2 FOXM1蛋白的表達(dá)與晚期肺鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系：FOXM1蛋白的表達(dá)與晚期肺鱗癌患者的年齡、性別、分期及吸煙史無關(guān)（P＞0.05）；FOXM1蛋白的表達(dá)與晚期肺鱗癌患者腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)有關(guān)（P＜0.05）。詳見表1。

2.3 FOXM1蛋白的表達(dá)與吉西他濱方案化療療效的關(guān)系

所有患者一線均選用吉西他濱聯(lián)合卡鉑方案，F(xiàn)OXM1蛋白表達(dá)陽性患者有效率低于FOXM1蛋白表達(dá)陰性的患者見表2；FOXM1蛋白表達(dá)陽性患者PFS短于FOXM1表達(dá)陰性患者（P＜0.05）見圖3。

圖1 免疫組化檢測肺鱗癌組織中FOXM1的陽性表達(dá)

圖2 免疫組化檢測肺鱗癌組織中FOXM1的陰性表達(dá)

表1 FOXM1蛋白的表達(dá)與晚期肺鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系

表2 FOXM1蛋白的表達(dá)與晚期肺鱗癌患者一線化療療效的關(guān)系

圖3 FOXM1蛋白表達(dá)與患者PFS的關(guān)系

3.討論

肺癌為全球范圍內(nèi)病死率最高的惡性腫瘤，迄今為止，肺癌患者的總體5年生存率依然處于較低水平，僅為15%左右，造成這種情況是由于大部分患者在確診時(shí)已為晚期病例，采用放化療等治療手段效果不理想之故[5，6]。FOXM1作為FOX轉(zhuǎn)錄因子家族的主要成員之一，在細(xì)胞周期特異性基因的控制、細(xì)胞增殖與分化以及器官的發(fā)育等一系列生理進(jìn)程中擔(dān)當(dāng)著重要的地位。最近幾年的研究顯示，F(xiàn)OXM1具有刺激細(xì)胞增殖的作用，所以其針對惡性腫瘤的產(chǎn)生和進(jìn)展具有非常重大的意義。大量研究結(jié)果顯示，在多種實(shí)體惡性腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)了FOXM1呈高表達(dá)這一情況。由于FOXM1參與了對多種腫瘤生長的調(diào)控，目前關(guān)于FOXM1表達(dá)的差異與晚期肺鱗癌吉西他濱化療的療效的關(guān)系鮮有報(bào)道。本部分研究中我們主要應(yīng)用免疫組化的方法檢測晚期肺鱗癌患者中FOXM1表達(dá)情況，研究其與晚期肺鱗癌患者臨床病理參數(shù)及使用吉西他濱方案化療療效的關(guān)系，為評估晚期肺鱗癌患者預(yù)后以及吉西他濱方案化療的療效提供新的理論依據(jù)。

本研究中，F(xiàn)OXM1蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核，呈棕黃色或棕褐色顆粒。在105例患者中，陽性表達(dá)47例，陰性表達(dá)58例，陽性表達(dá)率44.8%（47/105）。

FOXM1蛋白的表達(dá)與晚期肺鱗癌患者的年齡、性別、分期及吸煙史無關(guān)；FOXM1蛋白的表達(dá)與晚期肺鱗癌患者腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)有關(guān)。FOXM1蛋白表達(dá)陽性患者化療有效率25.5%，低于FOXM1蛋白表達(dá)陰性的患者的有效率44.8%；FOXM1蛋白表達(dá)陽性患者PFS為2.8個(gè)月，短于FOXM1表達(dá)陰性患者4.1個(gè)月。

FOXM1作為一種增殖因子，大量研究結(jié)果表明，F(xiàn)OXM1與惡性腫瘤發(fā)生的調(diào)控進(jìn)程相關(guān)，F(xiàn)OXM1在NSCLC組織中往往表現(xiàn)為過度活化，與NSCLC的產(chǎn)生以及惡性化過程直接有關(guān)，同時(shí)還能影響患者預(yù)后，故其對于惡性腫瘤的形成及惡化中具有非常重要的意義。有學(xué)者選用免疫組化方法對80例NSCLC組織以及癌旁相應(yīng)正常組織中FOXM1蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢查，觀察到的結(jié)論為結(jié)論顯示FOXM1在中低分化的鱗癌中的表達(dá)呈陽性[7]。類似的結(jié)論在本研究中同樣得到了證實(shí)。最近幾十年來，醫(yī)學(xué)工作者們對于年齡、性別、臨床分期、病理類型、血清癌胚抗原（carcino-embryonicantigen，CEA）水平、一般狀況評分、初始治療反應(yīng)、化療方案、放療劑量、原發(fā)腫瘤大小、血清乳酸脫氫酶含量等臨床病理參數(shù)與非小細(xì)胞肺癌化療的療效是否存在相關(guān)性進(jìn)行了大量的探索，旨在尋找出某些規(guī)律，從而為非小細(xì)胞肺癌的化療能夠供新的分子標(biāo)志物，從而開辟新的治療方向。

FOXM1表達(dá)程度的異常升高對惡性腫瘤的發(fā)生具有促成作用，同時(shí)還可以使諸多的惡性腫瘤的臨床期別增高、浸潤及轉(zhuǎn)移的范圍擴(kuò)大、淋巴轉(zhuǎn)移可能性大、從而使得療效和預(yù)后均削弱。因而可得出此結(jié)論，對FOXM1在惡性腫瘤組織中表達(dá)的檢驗(yàn)，可以為腫瘤的診斷、醫(yī)治與預(yù)后提供重要的根據(jù)。

FOXM1在對惡性腫瘤生長的調(diào)控過程中發(fā)揮了重要作用，且目前已有大量研究證實(shí)其與NSCLC患者的預(yù)后之間存在密切聯(lián)系，但迄今為止有關(guān)FOXM1表達(dá)的差異與晚期肺鱗癌患者使用吉西他濱方案化療療效之間關(guān)系的研究依然較少。在腫瘤的增殖進(jìn)程中細(xì)胞信號通路傳導(dǎo)和其余生物學(xué)路徑均可成為NSCLC預(yù)防和治療的新靶點(diǎn)，有一部分研究著力于以FOXM1為靶點(diǎn)探究NSCLC醫(yī)治的新策略。我們希望隨著臨床研究的深入發(fā)展及探索，以期望能夠?yàn)橥砥诜西[癌的臨床治療指明新的方向。

綜上所述，本研究FOXM1作為科研對象檢測其在晚期肺鱗癌患者癌組織中的表達(dá)，剖析其與該部分人群患者病理參數(shù)、化療療效的相關(guān)性。結(jié)論顯示FOXM1在大部分患者組織中表現(xiàn)為高表達(dá)狀態(tài)，與晚期肺鱗癌患者的腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)有關(guān)，同時(shí)還與吉西他濱化療的療效相關(guān)，因此FOXM1有希望作為NSCLC化學(xué)治療的靶標(biāo)。但FOXMl是如何發(fā)揮促進(jìn)轉(zhuǎn)移、影響預(yù)后作用的仍需要進(jìn)一步的深入研究。

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