一種醫(yī)用消毒超聲耦合劑對(duì)五種多重耐藥菌的殺滅效果

李 棟, 李曼玉, 郭亞萍, 楊 志

(1 慶陽(yáng)市中醫(yī)院, 甘肅 慶陽(yáng) 745000; 2 甘南藏族自治州舟曲縣醫(yī)院, 甘肅 甘南 746300; 3 山東瑞泰奇醫(yī)療器械有限公司, 山東 德州 253000 )

近年來(lái)，多重耐藥菌問(wèn)題已成為臨床抗感染中日益突出的問(wèn)題，如何減緩多重耐藥菌的產(chǎn)生，阻斷多重耐藥菌的傳播已引起政府、社會(huì)尤其是醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注[1]。醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)在診療操作過(guò)程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)，因預(yù)防消毒不當(dāng)，均可導(dǎo)致多重耐藥菌的傳播[2-5]。在超聲診斷科室，由于超聲探頭與人體表皮接觸，至今為止，絕大多數(shù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)在進(jìn)行超聲診斷時(shí)仍采用普通超聲耦合劑作為超聲探頭與人體表皮之間的填充介質(zhì)，普通超聲耦合劑無(wú)消毒或抑菌作用，更甚者其衛(wèi)生指標(biāo)在應(yīng)用一定時(shí)間后也超出了合理的衛(wèi)生范圍[3-4]，攜帶菌量觸目驚心，成為了多重耐藥菌傳播的通道?，F(xiàn)行的醫(yī)用超聲耦合劑行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)為YY 0299-2008《醫(yī)用超聲耦合劑》，該標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)耦合劑進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)的要求，也未根據(jù)不同風(fēng)險(xiǎn)操作對(duì)耦合劑進(jìn)行分類(lèi)，存在極大的安全隱患。

關(guān)于超聲探頭或超聲耦合劑在超聲診療過(guò)程中引起的感染事件[5-6]，諸如術(shù)前腹部超聲檢查引起孕婦剖宮產(chǎn)術(shù)后手術(shù)部位感染事件，新生兒接受超聲檢查后感染耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)而引發(fā)嚴(yán)重的膿皰病事件，因耦合劑污染加拿大某兒童機(jī)構(gòu)10年持續(xù)暴發(fā)嚴(yán)重的洋蔥伯克霍爾德菌感染事件，耦合劑污染銅綠假單胞菌導(dǎo)致醫(yī)院感染事件等在國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道。由此可見(jiàn)，隨著醫(yī)用超聲耦合劑在醫(yī)學(xué)診斷中應(yīng)用的增加，體外超聲探頭及耦合劑的潛在醫(yī)院感染傳播風(fēng)險(xiǎn)不容小覷。

切斷超聲探頭與人體皮膚黏膜之間病原菌傳播的通道，是降低超聲診療過(guò)程中多重耐藥菌感染的必要干預(yù)措施。采用中、低效消毒劑對(duì)超聲探頭進(jìn)行消毒或采用具有消毒作用的超聲耦合劑替代普通醫(yī)用超聲耦合劑作為介質(zhì)是目前被廣泛推廣的干預(yù)措施[6]。因此，選取一種以三氯羥基二苯醚、丙二醇等為主要有效成分的醫(yī)用消毒超聲耦合劑，于2016年3月—2017年5月對(duì)五種多重耐藥菌進(jìn)行載體定量殺滅試驗(yàn)，研究醫(yī)用消毒超聲耦合劑對(duì)多重耐藥菌的殺滅效果，為臨床科學(xué)合理選用超聲耦合劑提供參考，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)樣品 醫(yī)用消毒超聲耦合劑(批號(hào)：20170305)：主要由三氯羥基二苯醚、丙二醇、丙三醇、卡波姆、三乙醇胺等組成，其中三氯羥基二苯醚的含量為2.98 g/L，該試樣由山東瑞泰奇醫(yī)療器械有限公司提供。

1.1.2 試驗(yàn)菌株 菌株來(lái)源為臨床分離的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(MDR-AB)、MRSA、多重耐藥銅綠假單胞菌(MDR-PA)、耐碳青霉烯類(lèi)肺炎克雷伯菌(CRKP)、產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌(ESBLs-EC)。依據(jù)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行標(biāo)本的細(xì)菌培養(yǎng)與分離，通過(guò)微生物鑒定藥敏分析系統(tǒng)及配套藥敏試條進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，藥敏分析系統(tǒng)為法國(guó)生物梅里埃的Vitek Compact。依據(jù)2015年美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)[7]進(jìn)行抗菌藥物敏感性判斷，質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC 25922、金黃色葡萄球菌ATCC 25923、銅綠假單胞菌ATCC 27853。

1.1.3 中和劑 C/G肉湯(含1%胰蛋白+0.5%氯化鈉+10%吐溫80+3%卵磷脂+0.5%硫代硫酸鈉+3%組氨酸)、1/4倍C/G肉湯。

1.2 殺菌試驗(yàn)方法[8]

1.2.1 菌片制備 將新華濾紙裁剪成10 mm×10 mm 的正方形，壓力蒸氣滅菌后備用。取各試驗(yàn)菌純化分離的單個(gè)典型菌落接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面，于37℃培養(yǎng)18～24 h。分別以胰蛋白胨生理鹽水(TPS) 洗下菌苔并稀釋成適當(dāng)濃度的菌液，制成菌量為2×108～1×109CFU/mL的菌懸液，加入等量的0.3%牛血清白蛋白配制成試驗(yàn)用菌懸液，菌液濃度為 1×108～5×108CFU/mL。將經(jīng)滅菌的載體片平鋪于無(wú)菌平皿內(nèi)，用滴染法染菌，置37℃恒溫培養(yǎng)箱干燥備用。

1.2.2 中和劑鑒定試驗(yàn) 選取MRSA為試驗(yàn)菌，依據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002版)設(shè)為6組，按載體定量殺滅試驗(yàn)方法進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)。作用時(shí)間：樣品原液、中和劑C/G肉湯、第1、2組消毒作用時(shí)間為0.5 min；1/4倍樣品原液，中和劑1/4倍C/G肉湯，第1、2組消毒作用時(shí)間為1.5 min。

1.2.3 載體定量殺滅試驗(yàn) 取無(wú)菌平皿，按每片 5.0 mL的量，吸取試驗(yàn)樣品原液注入平皿中，將盛有消毒劑平皿置(20±1)℃水浴 5 min，用無(wú)菌鑷子取預(yù)先制備的菌片3片分別放入平皿中，并使之浸沒(méi)于試驗(yàn)樣品中，置于(20±1)℃恒溫水浴箱內(nèi)，作用至預(yù)定時(shí)間。用無(wú)菌鑷子將菌片取出分別移入含5.0 mL 中和劑的試管中。將試管在手掌上振打80次，中和作用10 min?；靹蚝?，吸取1.0 mL 直接接種平皿，每管接種 2 個(gè)平皿，測(cè)定活菌數(shù)。另取一平皿，注入10.0 mL稀釋液代替消毒劑，放入2片菌片，作為陽(yáng)性對(duì)照組。試驗(yàn)重復(fù)3 次。

2 結(jié)果

2.1 中和劑鑒定試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明，用含1%胰蛋白+0.5%氯化鈉+10%吐溫80+3%卵磷脂+0.5%硫代硫酸鈉+3%組氨酸C/G肉湯作為中和劑，可有效中和醫(yī)用消毒超聲耦合劑原液殘留的殺菌成分對(duì)試驗(yàn)菌的殺滅作用，該中和劑及其中和產(chǎn)物對(duì)試驗(yàn)菌和培養(yǎng)基均無(wú)影響。1/4倍C/G肉湯作為中和劑，可有效中和1/4倍醫(yī)用消毒超聲耦合劑原液殘留的殺菌成分對(duì)試驗(yàn)菌的殺滅作用，該中和劑及其中和產(chǎn)物對(duì)試驗(yàn)菌和培養(yǎng)基均無(wú)影響。見(jiàn)表1。

表1 消毒超聲耦合劑中和劑鑒定試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Neutralizer identification test result of disinfection ultrasonic coupling agent

2.2 載體定量殺滅試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明，該醫(yī)用消毒超聲耦合劑原液作用1.5、3.0、4.5 min，對(duì)MDR-AB、MRSA、MDR-PA、CRKP、ESBLs-EC的載體菌片殺滅對(duì)數(shù)值均>3.0。見(jiàn)表2。

表2 消毒超聲耦合劑對(duì)多重耐藥菌載體定量殺滅試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Carrier quantitative germicidal test result of disinfection ultrasonic coupling agent on the killing of MDROs

注：陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)

3 討論

醫(yī)用超聲診斷已成為臨床使用最頻繁的疾病診斷方法，在超聲引導(dǎo)下的微創(chuàng)穿刺手術(shù)也得到了廣泛推廣。在超聲診療過(guò)程中，超聲探頭與超聲耦合劑直接接觸患者皮膚、黏膜或開(kāi)放性的創(chuàng)口，存在極大的交叉感染風(fēng)險(xiǎn)，為此，多所醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)對(duì)超聲探頭及醫(yī)用超聲耦合劑進(jìn)行了衛(wèi)生質(zhì)量調(diào)查，調(diào)查結(jié)果不容樂(lè)觀。有調(diào)查研究[9]顯示，未經(jīng)消毒的超聲探頭帶菌率為100%。有文獻(xiàn)[10]研究顯示，超聲探頭上檢出的多數(shù)菌株為多重耐藥菌株。

多重耐藥菌引起的感染是一個(gè)國(guó)際性問(wèn)題[11]，近五年來(lái)，在國(guó)內(nèi)云南、山東、湖南、湖北、重慶、四川、新疆等不同省市地區(qū)的多所研究機(jī)構(gòu)對(duì)多重耐藥菌的臨床分布特征、危險(xiǎn)因素及感染監(jiān)測(cè)情況進(jìn)行了分析，研究[12-13]顯示，銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌五種菌株中多重耐藥菌在檢出率及分布范圍上均位列前十，甚至前五。因此，本研究選擇此五類(lèi)多重耐藥菌作為試驗(yàn)菌株。

醫(yī)用超聲耦合劑是在超聲診斷或治療操作中，充填或涂敷于皮膚與探頭(或治療頭)輻射面之間，用于透射聲波的中介媒質(zhì)，改善探頭與患者皮膚之間的超聲耦合效果，所以，醫(yī)用超聲耦合劑的衛(wèi)生質(zhì)量及殺菌性直接影響超聲探頭與人體接觸面的衛(wèi)生質(zhì)量狀況。消毒型醫(yī)用超聲耦合劑對(duì)多重耐藥菌的載體定量殺滅試驗(yàn)，殺滅對(duì)數(shù)值>3.0，達(dá)到2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》中對(duì)消毒劑的消毒作用要求，說(shuō)明其在超聲診療中可代替消毒劑使用，能減少醫(yī)務(wù)人員的操作程序，提高操作效率，并可降低因普通耦合劑使用引起的交叉感染。

近年來(lái)，關(guān)于消毒型醫(yī)用超聲耦合劑的實(shí)驗(yàn)室殺菌性能及臨床使用消毒效果均有報(bào)道，其中一種以植物源松油醇為殺菌成分的消毒耦合劑殺菌試驗(yàn)顯示，原液作用1.5 min，對(duì)載體上大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的平均殺滅對(duì)數(shù)值均>3.0[14]。使用消毒型醫(yī)用超聲耦合劑與非消毒型醫(yī)用超聲耦合劑用于超聲診斷檢查，臨床對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果顯示，檢查前、后探頭和受檢部位皮膚細(xì)菌數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[15]，但關(guān)于消毒型醫(yī)用超聲耦合劑對(duì)多重耐藥菌的殺滅效果研究目前很少有公開(kāi)報(bào)道。因此，進(jìn)行了一種醫(yī)用消毒超聲耦合劑對(duì)五種多重耐藥菌的殺滅效果的實(shí)驗(yàn)室研究。

本研究所采用的醫(yī)用消毒超聲耦合劑是以三氯羥基二苯醚、丙二醇等為主要有效成分，三氯羥基二苯醚在皮膚、黏膜消毒及衛(wèi)生手消毒中有廣泛應(yīng)用，該化合物對(duì)革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌、酵母菌屬及病毒均有殺滅或抑制作用。研究顯示，試驗(yàn)所采用的以三氯羥基二苯醚、丙二醇等為主要有效成分的醫(yī)用消毒超聲耦合劑原液作用1.5、3.0、4.5 min，對(duì)MDR-AB、MRSA、MDR-PA、CRKP、ESBLs-EC五種常見(jiàn)耐藥菌均可達(dá)消毒的要求。

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