不同處理方式對(duì)血清中ALT檢測(cè)結(jié)果的影響

劉建霞，宋凱霞

（山西大同大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西大同037009）

ALT是臨床常用的血液檢驗(yàn)指標(biāo)，其檢測(cè)值受血清處理方式的影響。血清的穩(wěn)定性受到多種因素的影響，常見的有保存溫度、保存時(shí)間、放置方式等等。本實(shí)驗(yàn)分析比較了上述影響因素對(duì)ALT檢測(cè)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料血樣來源

按正規(guī)采血規(guī)范隨機(jī)采集北京某醫(yī)院同一天門診患者的空腹靜脈血40例于普通采血管內(nèi)，要求無溶血、無脂血，于采集2 h內(nèi)按照常規(guī)方法分離血清。

1.2 方法

1.2.1 血清樣本處理

取血清樣本于1.5 mL EP管中，在生化分析儀日立7180上測(cè)定ALT值，計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差為即時(shí)ALT測(cè)定結(jié)果。然后將血清標(biāo)本均勻分裝于9個(gè)高壓消毒的1.5 mL EP管中，每管200 μL，即分為9組，每組15份（包含每個(gè)人的血樣）、編號(hào)。

將第1組標(biāo)本密封置于常溫17～28℃環(huán)境中（溫度由空調(diào)控制）；第2組標(biāo)本非密封置于常溫17～28℃；第3組標(biāo)本密封置于2～8℃冰箱；第4組標(biāo)本非密封置于2～8℃冰箱；5～8組都密封置于-20℃冰箱內(nèi)，其中6、8組的15份標(biāo)本分別合并為1支樣本為以后的反復(fù)凍融做準(zhǔn)備；第9組密封置于-80℃冰箱內(nèi)，整個(gè)過程在1 h內(nèi)完成。

1、2組血清標(biāo)本于存放2、4、8、24、48 h時(shí)間段測(cè)定ALT值；3、4組于存放2、4、8 h和1、2、3、7、10、14、21、28 d時(shí)間段測(cè)定ALT值；5～ 9組于存放1、2、3、7、10、14、21、28 d時(shí)間段測(cè)定，其中5、7組在 -20℃冰箱存放1周后開始做解凍實(shí)驗(yàn)，處理如下：第5組從冰箱中取出置于室溫17～28℃（由空調(diào)調(diào)節(jié)）解凍10、20、40、60、90 min后，馬上上機(jī)測(cè)定ALT值,第7組從冰箱中取出置于2～8℃冰箱下解凍10、20、40、60、90 min后，上機(jī)測(cè)定ALT值；6、8組在-20 ℃ 冰箱放置1、2、3、7、10 d時(shí)間段取出分別置于室溫17～28℃、2～8℃冰箱下凍融，上機(jī)檢測(cè)完后立即放回-20℃冰箱內(nèi)保存，每次測(cè)定都在1 h內(nèi)完成。各組在上機(jī)檢測(cè)之前都在快速混勻器上混勻10 s。

1.2.2 檢測(cè)方法

采用BCKMAN～7180全自動(dòng)生化分析儀，以IFCC國際臨床化學(xué)學(xué)會(huì)推薦的速率法測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶。每次檢測(cè)前都進(jìn)行校準(zhǔn)品定標(biāo)。確定校準(zhǔn)值在規(guī)定范圍內(nèi)之后進(jìn)行質(zhì)控，再進(jìn)行血清標(biāo)本檢測(cè)。ALT雙試劑測(cè)定試劑盒、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均由九強(qiáng)生物技術(shù)公司提供。

使用全自動(dòng)生化分析儀之前，擦拭探針，并對(duì)其比色杯及管道進(jìn)行清洗，清除殘留血液、蛋白質(zhì)及其他雜物。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

每次檢測(cè)取3次檢測(cè)結(jié)果的平均值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果以±s表示。用SPSS24.0分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以0 h監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)作為對(duì)照組。其余檢測(cè)結(jié)果分別與對(duì)照組進(jìn)行比較。利用單因素方差分析法進(jìn)行分析，P＜0.05表示與對(duì)照組有差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同保存溫度對(duì)血清中ALT檢測(cè)結(jié)果的影響

ALT對(duì)照組的檢測(cè)值為（90.14±0.02）U/L，血清在-80℃下密封保存至28 d，檢測(cè)值與對(duì)照組的差異均無顯著性差異（P＞0.05）；血清于-20℃密封保存0～10 d，ALT檢測(cè)值與對(duì)照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，保存至14～28 d，ALT檢測(cè)值均極顯著下降，與對(duì)照組有極顯著性差異；血清在2～8℃密封保存至3 d，ALT檢測(cè)值與對(duì)照組差異不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，保存7～28 d，ALT檢測(cè)值均極顯著下降，與對(duì)照組有極顯著性差異；血清在17～28℃密封保存0～1 d，ALT檢測(cè)值于對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，保存至2 d，檢測(cè)值與對(duì)照組有極顯著性差異，其中保存2～4 h內(nèi)ALT檢測(cè)值與對(duì)照組相比稍微變高，8 h之后ALT檢測(cè)值呈下降趨勢(shì)，見表1。

2.2 2種溫度下不同密封狀態(tài)對(duì)血清中ALT檢測(cè)結(jié)果的影響

表1 不同溫度、時(shí)間下血清中ALT檢測(cè)結(jié)果/U·L-1

血清在2～8℃非密封保存0～8 h，ALT檢測(cè)值呈現(xiàn)增高趨勢(shì)，但與對(duì)照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，1～14 d ALT檢測(cè)值極顯著增高，檢測(cè)值與對(duì)照組的差異均有極顯著性差異，其中1～10 d ALT檢測(cè)值增高至10 d達(dá)到最高，14 d檢測(cè)值下降；血清在17～28℃非密封保存0～2 h，ALT檢測(cè)值與對(duì)照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，4 h～2 d內(nèi)ALT檢測(cè)值與對(duì)照組的差異顯著，其中4～8 h檢測(cè)值呈增高趨勢(shì)，至8 h達(dá)到最高，8 h之后檢測(cè)值下降。正常血清為淡黃色透明液體，2 d后，血清標(biāo)本因水分蒸發(fā)而濃縮，血清變渾濁，見表2。

2.3 不同解凍溫度、解凍時(shí)間對(duì)血清中ALT檢測(cè)結(jié)果的影響

表2 不同保存溫度、密封狀態(tài)下血清樣本ALT檢測(cè)結(jié)果/U·L-1

血清在-20℃保存7 d之后解凍。血清在2～8℃解凍10～90 min，ALT檢測(cè)值與對(duì)照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中，10～40 min檢測(cè)值有下降趨勢(shì)，40～60 min檢測(cè)值升高，60 min之后檢測(cè)值開始下降；血清在17～28℃解凍10～60 min，ALT檢測(cè)值呈升高趨勢(shì)，但與對(duì)照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，至90 min，檢測(cè)值與對(duì)照組有顯著性差異，見圖1。

2.4 不同解凍溫度反復(fù)凍融對(duì)血清中ALT檢測(cè)結(jié)果的影響

圖1 ALT隨解凍溫度、時(shí)間變化圖

血清在10d內(nèi)于2～8℃和17～28℃反復(fù)凍融5次，ALT檢測(cè)值與對(duì)照組的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中2～8℃和17～28℃反復(fù)凍融中，檢測(cè)值均下降，2～8℃下降相對(duì)明顯，見圖2。

圖2 ALT隨反復(fù)凍融變化圖

3 結(jié)論與討論

血清內(nèi)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性測(cè)定方法（速率法）的原理：

NADH在340 nm處有特殊的吸收峰，ALT的活性由340 nm處吸光度的下降速率表示，血清中游離的丙酮酸又能消耗NADH[1]，使轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定值偏高。

血清放置的時(shí)間、溫度對(duì)其代謝動(dòng)態(tài)變化影響很大。血清內(nèi)的葡萄糖隨著血清保存時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低[2-5]。并且隨著溫度的增加，葡萄糖酵解的速率增加，產(chǎn)生大量的丙酮酸[6]。丙酮酸增加，消耗NADH，使ALT的檢測(cè)值增高。隨著葡萄糖的消耗增加[7]，丙氨酸生成減少，進(jìn)而影響ALT檢測(cè)值的變化[7-8]；密封與非密封相比，檢測(cè)結(jié)果偏高。原因可能是因?yàn)榉敲芊鈱?dǎo)致樣本內(nèi)水分蒸發(fā)，ALT濃縮，濃度增大。且17～28℃環(huán)境與2～8℃環(huán)境相比，同一時(shí)間，密封情況下ALT濃度增加的快。

臨床血液檢驗(yàn)中，ALT檢測(cè)值受到血清采集運(yùn)輸、血清保存方式、檢驗(yàn)試劑種類、儀器的校準(zhǔn)鑒定、參數(shù)設(shè)置、檢測(cè)環(huán)境等多種因素的影響。其中，檢驗(yàn)試劑種類、儀器的校準(zhǔn)鑒定、參數(shù)設(shè)置可以通過實(shí)驗(yàn)室相應(yīng)的控制措施將其誤差降低到最小。谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性與血清放置的溫度高低、密封狀態(tài)、時(shí)間長(zhǎng)短、解凍方式有著緊密的聯(lián)系。本實(shí)驗(yàn)以患者血清為材料，通過不同溫度、時(shí)間、密封狀態(tài)、解凍方式對(duì)血清進(jìn)行處理來觀察血清中ALT檢測(cè)值的變化，從而找出適合血清的保存方式。研究表明：血清標(biāo)本密封狀態(tài)保存下，于17～28℃保存≤1 d；2～8℃保存≤3 d；-20℃保存≤10 d；-80℃保存≤28 d，對(duì)ALT檢測(cè)結(jié)果無明顯影響（P＞0.05）。血清非密封狀態(tài)保存下，17～28℃保存≤2 h；2～8℃保存≤8 h，對(duì)ALT檢測(cè)結(jié)果無明顯影響（P＞0.05）；從-20℃冰箱轉(zhuǎn)至2～8℃下解凍≤90 min或轉(zhuǎn)至17～28℃ 下解凍 ≤60 min；17～28℃、2～8℃反復(fù)凍融5次，對(duì)ALT檢測(cè)結(jié)果均無明顯影響（P＞ 0.05）。

所以，為提高血清ALT測(cè)定結(jié)果的真實(shí)性和穩(wěn)定性，血液標(biāo)本采集后要盡早完成測(cè)定。若條件不許，應(yīng)盡快分離血清較低溫度保存。以確保ALT值的動(dòng)態(tài)穩(wěn)定性。

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