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    淺議基因克隆與病毒載體的構(gòu)建在研究生教學(xué)中的開展

    2018-03-23 07:52:58王菁華王樂天胡瓊瓊穆莉莉
    中國校外教育(下旬) 2017年13期
    關(guān)鍵詞:克隆質(zhì)粒載體

    王菁華 王樂天 胡瓊瓊 穆莉莉

    【摘要】基因克隆技術(shù)是分子生物學(xué)的基本技術(shù),是研究生日后進行畢業(yè)課題研究所需的重要手段,但是該技術(shù)特別是病毒載體構(gòu)建部分在本科生教學(xué)中并不普及,鑒于此,學(xué)校在新入學(xué)的研究生中開設(shè)了基因克隆與病毒載體的構(gòu)建的選修課程。對該課程的開展和學(xué)生的反饋進行了介紹。

    【關(guān)鍵詞】研究生教學(xué) 基因克隆 病毒載體對于新入學(xué)的碩士研究新生,由于其需要在短時間內(nèi)了解并掌握大量的實驗技術(shù)方面的理論與實戰(zhàn)內(nèi)容,我校在碩士研究生一年級的第一學(xué)期開設(shè)了研究生選修課,課程的內(nèi)容主要針對碩士生們在實驗中可能遇到的相關(guān)實驗技術(shù),主要包括分子雜交,電鏡技術(shù)及應(yīng)用,膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用,聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù),標記技術(shù),組織化學(xué)和細胞化學(xué)技術(shù),細胞培養(yǎng)技術(shù),流式細胞技術(shù)和基因克隆與病毒載體的構(gòu)建等。筆者負責(zé)基因克隆與病毒載體的構(gòu)建的教學(xué)內(nèi)容,2017年選修人數(shù)為71人,分兩個半天,講授8學(xué)時,在教學(xué)過程中積累了一些經(jīng)驗和體會,希望與同行進行交流。

    一、教學(xué)內(nèi)容

    “基因克隆”是伴隨著生物學(xué)尤其是分子生物學(xué)的飛速發(fā)展而興起的一門新學(xué)科?;蚩寺〖夹g(shù),又稱重組DNA技術(shù),是將目的基因與具有自主復(fù)制能力的載體DNA 進行體外重組,獲得新的重組DNA后導(dǎo)入受體細胞中表達相應(yīng)蛋白,以研究蛋白結(jié)構(gòu)與功能及其與其它分子的相互作用。本門課程開設(shè)的指導(dǎo)思想在于使學(xué)生在掌握一般生物學(xué)以及分子生物學(xué)知識的基礎(chǔ)上,掌握DNA重組,轉(zhuǎn)移、表達和檢測等技術(shù)的基本概念和基本原理,為學(xué)生們?nèi)蘸髲氖驴茖W(xué)研究打下技術(shù)和操作方面的理論基礎(chǔ)??紤]到課程的實用性,筆者將8學(xué)時課安排為4個內(nèi)容,即基因克隆原理及載體圖譜的識別,Vector NTI及相關(guān)軟件的應(yīng)用,蛋白標簽在基因克隆中的應(yīng)用和病毒載體的構(gòu)建及應(yīng)用,每個內(nèi)容2學(xué)時。由于基因克隆知識理解較為困難,為了更好地讓學(xué)生們學(xué)習(xí)與掌握,筆者采用了案例式教學(xué),通過筆者本人的基因克隆經(jīng)歷,零起點教學(xué),用通俗易懂的講解從最基本的知識如閱讀質(zhì)粒圖譜pEGFP-N1,pQCXIP,pCMV-Tag2B,pLVX-AcGFP-N1等開始講起,并且把筆者所克隆過基因的過程如Ostn,Bex1,RGS5等一一逐條講解。每個克隆質(zhì)粒的案例都包括基因的背景,明確克隆目的,選擇適合骨架質(zhì)粒,查找目的片段,選擇酶切位點,設(shè)計引物,獲取目的片段,膠回收,酶切,連接轉(zhuǎn)化,驗證陽性產(chǎn)物等內(nèi)容。通過對多個案例的反復(fù)講解,學(xué)生們對于基因克隆的理解逐漸加深。在最后一次課,結(jié)合目前基因克隆的前沿,著重講授構(gòu)建病毒質(zhì)粒,包裝腺病毒、慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒的包裝等應(yīng)用性比較強的知識。而對于有一定基因克隆基礎(chǔ)的研究生,筆者在課堂上對其在實驗中遇到的問題或者疑問進行答疑解惑,密切師生之間的互動關(guān)系,并且對于該課程感興趣的學(xué)生在課后可以到我們的實驗室參觀學(xué)習(xí)基因克隆整個實驗流程。

    二、考核方式

    由于基因克隆與病毒載體的構(gòu)建是選修課程,只要參加上課并且認真聽講的學(xué)生都給予合格的基本成績,但是為了考察學(xué)生們對所學(xué)內(nèi)容的掌握情況,在最后一次課上隨堂進行小測驗,題目如給出兩個質(zhì)粒的圖譜,根據(jù)圖譜回答質(zhì)粒具有是什么原核抗性,什么真核抗性,是否可以用于包裝病毒等。根據(jù)評卷結(jié)果,大部分的學(xué)生都能正確回答問題。

    在最后一節(jié)課上,筆者還對學(xué)生們進行了問卷調(diào)查,得到了一些反饋,現(xiàn)總結(jié)如下:

    (1)學(xué)生們認為在授課的過程中,由于是從最基本的知識開始講起,所以有無基礎(chǔ)都可以聽懂;(2)教師在課堂上對學(xué)生們在實驗中具體的問題進行了答疑解惑,許多學(xué)生反映在課堂上得到了他們想要的知識;(3)對于課程的設(shè)置,學(xué)生們反映集中在兩個半天學(xué)習(xí)基因克隆的課程并不利于知識消化,建議把課程的講授時間拉長,一邊學(xué)習(xí),一邊鞏固,并且一致認為病毒載體的構(gòu)建部分內(nèi)容實用性比較強,建議把這個內(nèi)容單獨設(shè)立成一門單獨的選修課;(4)有的學(xué)生認為由于是實驗還沒開始,并沒有辦法帶著問題來上課,以后在做基因克隆的過程中還會遇到更加具體的問題,但是沒有機會再找老師解決了;(5)有的學(xué)生還建議除了講授理論知識外,開設(shè)基因克隆的實驗輔導(dǎo)班,從而真正動手學(xué)習(xí)實驗的操作。

    為了適應(yīng)當(dāng)今研究生培養(yǎng)的需要,使新入學(xué)的研究生能夠盡快的從本科生向研究生轉(zhuǎn)型,讓他們用最短的時間具備基本的科研素質(zhì)和知識背景,在研究生中開設(shè)實驗技術(shù)方面的選修課是一個不錯的選擇。我們將在今后的教學(xué)工作中不斷改進、完善基因克隆與病毒載體的構(gòu)建的課程,從提高學(xué)生的科研能力和水平入手,培養(yǎng)學(xué)生的科研興趣,為研究生日后的科研工作奠定堅實的基礎(chǔ)。

    參考文獻:

    [1]蘭泓,張玉祥.基因克隆技術(shù)及其進展[J].中國醫(yī)藥生物技術(shù),2015,(05) :448-452.

    [2]于琨,安然.案例教學(xué)在醫(yī)學(xué)生物學(xué)教學(xué)中的實踐分析[J].黑龍江科學(xué),2014,(11) :72.

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