• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    甩片改良抗酸法與FQ-PCR技術(shù)在腦脊液抗酸菌檢查中的應(yīng)用分析

    2015-12-28 09:04:59呂翠環(huán)李玉靜孫志平鄭立恒
    關(guān)鍵詞:胸科抗酸腦脊液

    呂翠環(huán),李玉靜,孫志平,李 卓,呂 莎,鄭立恒

    (1.河北省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科,河北石家莊050041;2.河北省胸科醫(yī)院骨科,河北石家莊050041; 3.河北省胸科醫(yī)院呼吸科,河北石家莊050041)

    甩片改良抗酸法與FQ-PCR技術(shù)在腦脊液抗酸菌檢查中的應(yīng)用分析

    呂翠環(huán)1,李玉靜1,孫志平1,李 卓2*,呂 莎3,鄭立恒1

    (1.河北省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科,河北石家莊050041;2.河北省胸科醫(yī)院骨科,河北石家莊050041; 3.河北省胸科醫(yī)院呼吸科,河北石家莊050041)

    目的評(píng)價(jià)腦脊液改良抗酸染色法與實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,F(xiàn)Q-PCR)法診斷結(jié)核性腦膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的意義。方法 TBM患者81例,采集腦脊液檢測標(biāo)本,分別采用離心甩片改良抗酸染色法、實(shí)時(shí)FQ-PCR法檢測抗酸桿菌。結(jié)果81例改良抗酸染色法陽性率66.7%(54/81)高于FQ-PCR方法陽性率50.6%(41/81),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論在診斷TBM方面,改良抗酸染色方法顯著優(yōu)于FQ-PCR方法。

    結(jié)核,腦膜;染色與標(biāo)記;實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)

    結(jié)核性腦膜炎(tuberculous meningitis,TBM)是最常見的肺外結(jié)核病之一,致殘率和致死率高,其預(yù)后與早期診斷和早期治療有密切關(guān)系,但是因其臨床表現(xiàn)不典型,確診十分困難。目前對(duì)結(jié)核的診斷手段較多,但有的特異度低、有的準(zhǔn)確度低,各有其局限性。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng) (fluorescence quantitative polymerase chain reaction,F(xiàn)Q-PCR)技術(shù)反應(yīng)靈敏、特異度高、高效快速,這些優(yōu)勢是涂片法及培養(yǎng)法難以達(dá)到的[1]。改良抗酸染色法是在普通涂片抗酸染色基礎(chǔ)上,對(duì)腦脊液涂片進(jìn)行特殊處理,以發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)的抗酸桿菌,提高陽性率。本研究回顧性分析河北省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科81例TBM腦脊液標(biāo)本資料,并進(jìn)行FQ-PCR檢測與改良抗酸染色檢測的比較,現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選擇2013—2014年河北省胸科醫(yī)院確診為TBM的患者81例,男性47例,女性34例,年齡14~68歲,平均(32.1±12.3)歲。收集所有患者的腦脊液進(jìn)行改良抗酸染色及FQ-PCR檢測,送檢時(shí)間為發(fā)病后3~37 d。

    1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 所有患者經(jīng)過臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室診斷、影像學(xué)診斷、臨床治療評(píng)價(jià)等,根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)編著的《臨床診療指南結(jié)核病學(xué)分冊(cè)》標(biāo)準(zhǔn)確診[2]。

    1.3 方法

    1.3.1 改良抗酸染色[3]標(biāo)本處理,收取腦脊液1.0~1.5 mL,置于Thermo Scientific Cytospin 4型細(xì)胞離心涂片機(jī)中制備涂片。用4%多聚甲醛固定15 min,0.3% TritonX-100浸泡30 min??顾崛旧?①石炭酸復(fù)紅溶液染色10 min后,流水輕輕沖洗;②加3%鹽酸酒精溶液脫色1~2 min至近無色,流水輕輕沖洗;③加亞甲基藍(lán)溶液染色30 s,流水輕輕沖洗,待干,鏡檢;④每次染色,同時(shí)做陰、陽性質(zhì)控片,質(zhì)控片染色結(jié)果正確,方可進(jìn)行臨床標(biāo)本閱片;⑤由有3年以上工作經(jīng)驗(yàn)人員在光學(xué)顯微鏡油鏡下觀察。

    1.3.2 FQ-PCR檢測 收取腦脊液1 mL進(jìn)行腦脊液結(jié)核分枝桿菌脫氧核糖核酸檢測,儀器設(shè)備為達(dá)安基因有限公司生產(chǎn)的7600型實(shí)時(shí)熒光定量檢測系統(tǒng),試劑盒為中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司生產(chǎn)的結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光試劑盒。嚴(yán)格按照試劑說明書操作,每次操作均加入質(zhì)控品。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料以百分率表示,采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    改良抗酸染色法陽性率66.7%(54/81)高于FQ-PCR法50.6%(41/81),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 2種方法檢測結(jié)果比較Table1 Comparison of the results of two methods (例數(shù))

    3 討 論

    結(jié)核病是全球性的公共衛(wèi)生問題[4],TBM是肺外結(jié)核中最嚴(yán)重的結(jié)核病,由結(jié)核桿菌引起,早期診斷困難,病殘率和病死率高,是結(jié)核病死亡的主要原因[5]。臨床對(duì)TBM的診斷主要依據(jù)腦脊液、臨床表現(xiàn)以及腦影像學(xué)[6]來判斷患者的病情程度。腦脊液是能夠直接反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理變化的標(biāo)本,是實(shí)驗(yàn)診斷TBM的理想標(biāo)本。如果在腦脊液中檢測出結(jié)核桿菌及其特異度標(biāo)記物等,則能夠?yàn)榕R床診斷TBM提供依據(jù)。目前對(duì)結(jié)核桿菌的檢測方法有許多,培養(yǎng)法是診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn),但其需要5~6周的時(shí)間,直接涂片顯微鏡檢查是目前所有方法中比較快速的,但其靈敏度和特異度低[7],這些方法各有其局限性。

    本研究結(jié)果顯示,甩片法改良抗酸染色陽性率為66.7%,高于于慶杰等[8]的報(bào)道研究。甩片改良抗酸法應(yīng)用離心甩片機(jī)將腦脊液中有形成分通過小孔聚集在載玻片上,形成直徑約0.5 cm薄膜,菌量集中,易于找到,且利用多聚甲醛將細(xì)胞等物質(zhì)進(jìn)行充分固定,因結(jié)核桿菌是一種緩慢的細(xì)胞內(nèi)寄生菌[9],利用TritonX-100對(duì)細(xì)胞膜的滲透性,使抗酸染色試劑滲入細(xì)胞內(nèi),從而使細(xì)胞內(nèi)的抗酸菌易于著色[10]。

    FQ-PCR法作為一種較理想的檢測TBM的方法,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)中得到廣泛的應(yīng)用,理論上,只要樣本中有一個(gè)病原體存在,就可以檢測到。一般實(shí)驗(yàn)室能檢出10~100基因拷貝,而目前其他病原體抗原檢測方法一般需要105~107個(gè)病原體才可檢測到。FQ-PCR法已有研究資料表明[11-12],病原體數(shù)量與感染性疾病病情的輕重程度、傳染性及治療效果均有相關(guān)性。FQ-PCR方法可進(jìn)行準(zhǔn)確的定量檢測,特異度更強(qiáng),操作簡單快速。有報(bào)道[13]基因探針方法檢測TBM結(jié)核分枝桿菌脫氧核糖核酸敏感度33%~83%,特異度100%。Amin等[14]報(bào)道用FQ-PCR法檢測腦脊液結(jié)核菌陽性率為42.1%。而FQ-PCR法檢測腦脊液結(jié)核桿菌具有更高的敏感度與特異度[15-16]。本研究結(jié)果顯示,81例TBM標(biāo)本中FQ-PCR法檢測結(jié)核分枝桿菌脫氧核糖核酸陽性41例(50.6%),與報(bào)道基本相符。

    綜合分析甩片改良抗酸法操作相對(duì)簡單,無需昂貴的設(shè)備,實(shí)驗(yàn)室條件要求相對(duì)較低,成本相對(duì)低廉,而FQ-PCR法則各個(gè)方面要求條件嚴(yán)格,成本相對(duì)增加,加重患者負(fù)擔(dān)。本研究結(jié)果顯示,對(duì)于TBM的實(shí)驗(yàn)室診斷,腦脊液標(biāo)本應(yīng)用甩片法改良抗酸染色檢測結(jié)核桿菌陽性率大大提高,而檢測成本并未相應(yīng)提高,是單項(xiàng)指標(biāo)中較理想的項(xiàng)目,而FQPCR法檢測結(jié)核菌如果條件允許也不失為一種好的檢測方法。

    [1]張翊,盧建平,葉淼.四種結(jié)核分枝桿菌檢測方法的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].中國防癆雜志,2006,28(1):14-17.

    [2]中華醫(yī)學(xué)會(huì).臨床診療指南結(jié)核病學(xué)分冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2009:58-61.

    [3]Chen P,Shi M,F(xiàn)eng GD,et al.A highly efficient Ziehl-Neelsen stain:identifying de novo intracellular Mycobacterium tuberculosis and improving detection of extracellular M.tuberculosis in cerebrospinal fluid[J].J Clin Microbiol,2012,50(4):1166-1170.

    [4]Herbert N,George A,Baroness Masham of Ilton,et al.World TB Day 2014:finding the missing 3 million[J].Lancet,2014,383 (9922):1016-1018.

    [5]Dinnes J,Deeks J,Kunst H,et al.A systematic review of rapid diagnostic tests for the detection of tuberculosis infection[J]. Health Technol Assess,2007,11(3):1-196.

    [6]李美杰,何俊瑛,張楠,等.TBM伴腦實(shí)質(zhì)損害6例診治分析[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,31(10):1219-1221.

    [7]Marais S,Thwaites G,Schoeman JF,et al. Tuberculous meningitis:a uniform case definition for use in clinical research[J].Lancet Infect Dis,2010,10(11):803-812.

    [8]于慶杰,孫艷,李亞峰.離心甩片法檢測腦脊液中抗酸桿菌的應(yīng)用價(jià)值[J].中國誤診學(xué)雜志,2009,9(16):3852-3853.

    [9]Manganelli R,Dubnau E,Tyagi S,et al.Differential expression of 10 sigma factor genes in Mycobacterium tuberculosis[J].Mol Microbiol,1999,31(2):715-724.

    [10]Koley D,Bard AJ.Triton X-100 concentration effects on membrane permeability of a single HeLa cell by scanning electrochemical microscopy(SECM)[J].Proc Natl Acad Sci U SA,2010,107(39):16783-16787.

    [11]Dworkin LL,Gibler TM,van Gelder RN.Real-time quantitative polymerase chain reaction diagnosis of infectious posterior uveitis[J].Arch Ophthalmol,2002,120(11):1534-1539.

    [12]高斌,劉敬忠.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的研究及其應(yīng)用進(jìn)展[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐,2005,4(6):507-509.

    [13]Lang AM,F(xiàn)eris-Iglesias J,Pena C,et al.Clinical evaluation of the Gen-Probe Amplified Direct Test for detection of Mycobacterium tuberculosis complex organisms in cerebrospinal fluid[J].J Clin Microbiol,1998,36(8):2191-2194.

    [14]Amin I,Idrees M,Awan Z,et al.PCR could be a method of choice for identification of both pulmonary and extra-pulmonary tuberculosis[J].BMC Res Notes,2011,4:332.

    [15]Chaidir L,Ganiem AR,Vander Zanden A,et al.Comparison of real time IS6110-PCR,microscopy,and culture for diagnosis of tuberculous meningitis in a cohort of adult patients in Indonesia[J].PLoS One,2012,7(12):e52001.

    [16]李銳成,劉昕陽,閻琳,等.實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)在TBM中的診斷價(jià)值[J],臨床薈萃,2014,29(1):31-34.

    (本文編輯:趙麗潔)

    Analysis of acid fast bacilli in cerebrospinal fluid with modified acid-fast method and FQ-PCR technique

    LV Cui-huan1,LI Yu-jing1,SUN Zhi-ping1,LI Zhuo2*,LV Sha3,ZHENG Li-heng1
    ( 1. Department of Clinical Laboratory,the Chest Hospital of Hebei Province,Shijiazhuang 050041,China; 2. Department of Orthopedics,the Chest Hospital of Hebei Province,Shijiazhuang 050041,China; 3. Department of Respiratory Medicine,the Chest Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang 050041,China)

    Objective To evaluate united test significance in the diagnosis of tuberculous meningitis(TBM) with modified acid-fast staining method of cerebrospinal fluid and real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction(FQ-PCR).MethodsCerebrospinal fluid samples from 81 patients with TBM were detected for Mycobacterium tuberculosis respectively with centrifugal modified acid-fast staining method and real-time FQ-PCR.Results The positive rate of modified acidfast staining 66.7%(54/81)was significantly higher than that of FQ-PCR 50.6%(41/81),there was significant difference between the two methods(P<0.05).ConclusionModified acid-fast staining method is significantly better than FQ-PCR in the diagnosis of TBM.

    tuberculosis,meningeal;staining and labeling;real-time polymerase chain reaction

    R529.3

    A

    1007-3205(2015)02-0170-03

    2014-10-15;

    2014-12-09

    河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(13277794D);河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目(132777269)

    呂翠環(huán)(1966-),女,河北石家莊人,河北省胸科醫(yī)院主任技師,醫(yī)學(xué)學(xué)士,從事臨床檢驗(yàn)學(xué)研究。

    *通訊作者

    10.3969/j.issn.1007-3205.2015.02.018

    猜你喜歡
    胸科抗酸腦脊液
    抗酸染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法和實(shí)時(shí)熒光PCR法在分枝桿菌檢查中的應(yīng)用比較
    呼出氣一氧化氮與一氧化碳在胸科手術(shù)臨床應(yīng)用研究進(jìn)展
    ??? ??
    中國(韓文)(2018年1期)2018-01-17 06:51:06
    PCR技術(shù)、抗酸染色法在肺結(jié)核病理學(xué)診斷中應(yīng)用比較
    腰椎術(shù)后腦脊液漏的治療
    腦脊液引流在早期顱內(nèi)破裂動(dòng)脈瘤治療中的應(yīng)用
    PC-MRI對(duì)腦脊液循環(huán)的研究價(jià)值
    胸科手術(shù)中腦血氧含量下降與術(shù)后認(rèn)知功能障礙的相關(guān)性分析
    改良抗酸染色法在結(jié)核性漿膜炎臨床診斷中的價(jià)值
    痰標(biāo)本替代物的抗酸染色效果分析
    真人做人爱边吃奶动态| 男女午夜视频在线观看| 怎么达到女性高潮| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产精品精品国产色婷婷| 丁香欧美五月| 激情在线观看视频在线高清| 在线播放无遮挡| 少妇熟女aⅴ在线视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产精品三级大全| 桃红色精品国产亚洲av| 国产色爽女视频免费观看| 欧美日韩国产亚洲二区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 免费高清视频大片| 最近在线观看免费完整版| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲精品在线观看二区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 午夜精品久久久久久毛片777| 日韩欧美国产在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 岛国视频午夜一区免费看| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲久久久久久中文字幕| 欧美乱码精品一区二区三区| 好男人电影高清在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲avbb在线观看| 国产黄片美女视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久久久久久久大av| av视频在线观看入口| 亚洲五月天丁香| 首页视频小说图片口味搜索| 99久久九九国产精品国产免费| 久久国产乱子伦精品免费另类| 免费看美女性在线毛片视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 9191精品国产免费久久| 亚洲精品成人久久久久久| 午夜亚洲福利在线播放| svipshipincom国产片| 色精品久久人妻99蜜桃| 好男人在线观看高清免费视频| 国产单亲对白刺激| av专区在线播放| 国产高潮美女av| 国产黄a三级三级三级人| 精品熟女少妇八av免费久了| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品一区二区三区人妻视频| a级毛片a级免费在线| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品电影一区二区三区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| www.色视频.com| 精品国产三级普通话版| 夜夜夜夜夜久久久久| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美乱妇无乱码| 久久亚洲真实| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产免费av片在线观看野外av| 少妇丰满av| 国产男靠女视频免费网站| 又粗又爽又猛毛片免费看| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲,欧美精品.| 亚洲精品色激情综合| 他把我摸到了高潮在线观看| www.色视频.com| 久久精品国产自在天天线| 日本 av在线| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产三级黄色录像| 天天躁日日操中文字幕| 精品熟女少妇八av免费久了| 天天躁日日操中文字幕| 婷婷亚洲欧美| 韩国av一区二区三区四区| 在线天堂最新版资源| 又粗又爽又猛毛片免费看| 在线观看av片永久免费下载| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 特级一级黄色大片| 午夜福利18| 国产精品,欧美在线| 久久久久久国产a免费观看| 99riav亚洲国产免费| 首页视频小说图片口味搜索| 男女那种视频在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 三级国产精品欧美在线观看| 波多野结衣高清无吗| АⅤ资源中文在线天堂| 国产高清有码在线观看视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 精品一区二区三区视频在线 | 国产亚洲精品一区二区www| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产精品久久久久久久电影 | 国产亚洲av嫩草精品影院| 制服人妻中文乱码| 国产激情欧美一区二区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产高潮美女av| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国产精品久久久久久人妻精品电影| bbb黄色大片| 日本一本二区三区精品| 免费av不卡在线播放| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产熟女xx| 久久香蕉精品热| 日韩欧美精品v在线| 久久久久久大精品| www.www免费av| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产高清videossex| av福利片在线观看| 在线观看一区二区三区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲av成人av| 一夜夜www| 最近最新免费中文字幕在线| 午夜免费激情av| 老司机午夜十八禁免费视频| 女警被强在线播放| 一进一出抽搐动态| 久久久国产成人免费| 国产精品久久电影中文字幕| 黄色丝袜av网址大全| 91在线观看av| 一级黄色大片毛片| 午夜福利高清视频| 国产午夜福利久久久久久| 成人三级黄色视频| av国产免费在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久久久久久大av| 亚洲七黄色美女视频| 露出奶头的视频| 亚洲人与动物交配视频| 午夜福利成人在线免费观看| 免费看光身美女| 国产精品国产高清国产av| 黄色成人免费大全| 99热这里只有是精品50| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国产欧美日韩一区二区三| 久久精品影院6| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产亚洲精品一区二区www| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 99久久99久久久精品蜜桃| 免费无遮挡裸体视频| 国产成人系列免费观看| 国产乱人视频| 黄色成人免费大全| 亚洲av二区三区四区| 欧美不卡视频在线免费观看| 在线观看av片永久免费下载| 午夜福利18| 综合色av麻豆| 舔av片在线| 黄色视频,在线免费观看| tocl精华| 黄片大片在线免费观看| 国产精品 国内视频| 人妻久久中文字幕网| 国产伦精品一区二区三区四那| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 午夜a级毛片| 久久99热这里只有精品18| 天堂动漫精品| 美女cb高潮喷水在线观看| 免费看日本二区| 中文字幕av在线有码专区| 成人av一区二区三区在线看| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 丝袜美腿在线中文| 在线观看日韩欧美| 黄色丝袜av网址大全| 欧美日韩精品网址| 亚洲美女黄片视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 午夜激情欧美在线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲欧美精品综合久久99| 757午夜福利合集在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 免费观看人在逋| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 少妇的逼水好多| 美女大奶头视频| 一二三四社区在线视频社区8| 精品一区二区三区视频在线 | avwww免费| 最后的刺客免费高清国语| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲中文字幕日韩| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 啪啪无遮挡十八禁网站| 九色国产91popny在线| 亚洲色图av天堂| 天堂动漫精品| 国产亚洲欧美98| 亚洲av二区三区四区| 国产精品,欧美在线| 99在线视频只有这里精品首页| 免费一级毛片在线播放高清视频| 91久久精品电影网| 久久香蕉国产精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久精品国产综合久久久| 亚洲精品在线观看二区| 国产高清有码在线观看视频| 国产v大片淫在线免费观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久精品国产清高在天天线| 一进一出抽搐动态| 国产伦在线观看视频一区| 男人舔女人下体高潮全视频| 国模一区二区三区四区视频| 真人做人爱边吃奶动态| 美女免费视频网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲av电影在线进入| 91麻豆av在线| 欧美区成人在线视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 美女高潮的动态| 免费看光身美女| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| av片东京热男人的天堂| 中文资源天堂在线| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲五月婷婷丁香| 91在线观看av| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲黑人精品在线| 国产伦精品一区二区三区四那| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 91久久精品国产一区二区成人 | 757午夜福利合集在线观看| 黄片小视频在线播放| 在线观看日韩欧美| 在线国产一区二区在线| 午夜福利18| 午夜福利在线观看吧| 国产伦精品一区二区三区四那| 91久久精品电影网| 国产精品一及| 桃色一区二区三区在线观看| 看免费av毛片| 欧美一区二区精品小视频在线| 两个人视频免费观看高清| 亚洲av成人精品一区久久| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 国产精华一区二区三区| 一级毛片女人18水好多| 丁香欧美五月| av片东京热男人的天堂| 亚洲精品456在线播放app | 日韩高清综合在线| 中文字幕高清在线视频| 午夜两性在线视频| 在线免费观看的www视频| 1024手机看黄色片| 国产午夜精品论理片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 在线播放无遮挡| 一进一出好大好爽视频| 美女 人体艺术 gogo| 在线播放无遮挡| www.色视频.com| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国内精品一区二区在线观看| www.色视频.com| 99久久精品国产亚洲精品| 黄色成人免费大全| 色综合站精品国产| 亚洲久久久久久中文字幕| 好男人电影高清在线观看| 久久亚洲真实| 丁香六月欧美| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 狂野欧美激情性xxxx| 国产精品99久久久久久久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日韩欧美三级三区| 69人妻影院| 欧美成人性av电影在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| av黄色大香蕉| 欧美区成人在线视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产av一区在线观看免费| 色哟哟哟哟哟哟| 天堂动漫精品| 精品日产1卡2卡| 亚洲国产精品合色在线| 色吧在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 日韩国内少妇激情av| 97超视频在线观看视频| 欧美3d第一页| 国产欧美日韩精品亚洲av| 婷婷丁香在线五月| 我的老师免费观看完整版| 国产黄色小视频在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲美女黄片视频| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲最大成人中文| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 国产色爽女视频免费观看| 1000部很黄的大片| 国产午夜福利久久久久久| 久久中文看片网| 在线免费观看不下载黄p国产 | 老鸭窝网址在线观看| 国产成人a区在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 内地一区二区视频在线| 久久久久久人人人人人| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 中文字幕久久专区| 色噜噜av男人的天堂激情| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 欧美日韩精品网址| 露出奶头的视频| 欧美大码av| 97碰自拍视频| 亚洲国产精品成人综合色| 制服人妻中文乱码| 在线观看66精品国产| 有码 亚洲区| 成年女人毛片免费观看观看9| 婷婷亚洲欧美| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲欧美激情综合另类| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲专区中文字幕在线| 丝袜美腿在线中文| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产精品综合久久久久久久免费| a级毛片a级免费在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久久久久人人人人人| av视频在线观看入口| 欧美一级a爱片免费观看看| 午夜影院日韩av| 一级作爱视频免费观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 有码 亚洲区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲国产精品999在线| 午夜亚洲福利在线播放| 久久亚洲真实| 美女cb高潮喷水在线观看| 一个人看视频在线观看www免费 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 女同久久另类99精品国产91| 90打野战视频偷拍视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 国内精品一区二区在线观看| 高清日韩中文字幕在线| 麻豆成人午夜福利视频| 一个人看视频在线观看www免费 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲乱码一区二区免费版| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 欧美乱妇无乱码| 精品福利观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人精品一区二区免费| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 性欧美人与动物交配| 免费在线观看影片大全网站| 叶爱在线成人免费视频播放| 午夜激情福利司机影院| 在线十欧美十亚洲十日本专区| av国产免费在线观看| 日本免费a在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 少妇人妻一区二区三区视频| 男女视频在线观看网站免费| 脱女人内裤的视频| 一级a爱片免费观看的视频| 99在线视频只有这里精品首页| 久久精品国产综合久久久| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 日本一本二区三区精品| 少妇高潮的动态图| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 桃色一区二区三区在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产三级黄色录像| 啦啦啦韩国在线观看视频| 99久久精品热视频| 久久久国产成人精品二区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲av免费高清在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产av一区在线观看免费| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 男人和女人高潮做爰伦理| 成人特级黄色片久久久久久久| 狠狠狠狠99中文字幕| 中文资源天堂在线| www.999成人在线观看| 日韩欧美在线二视频| 日韩精品青青久久久久久| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| 变态另类丝袜制服| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲专区中文字幕在线| 无人区码免费观看不卡| 欧美乱码精品一区二区三区| АⅤ资源中文在线天堂| 久久人妻av系列| 国产免费av片在线观看野外av| 老司机午夜福利在线观看视频| 悠悠久久av| 免费人成视频x8x8入口观看| 一级毛片高清免费大全| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲av不卡在线观看| 国内精品美女久久久久久| 一夜夜www| 99久久精品一区二区三区| 色吧在线观看| xxxwww97欧美| 欧美一区二区精品小视频在线| 老鸭窝网址在线观看| 91九色精品人成在线观看| 一a级毛片在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 一个人免费在线观看的高清视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 我的老师免费观看完整版| 69av精品久久久久久| 亚洲在线观看片| 深夜精品福利| 成人亚洲精品av一区二区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 天堂√8在线中文| 很黄的视频免费| 一区二区三区高清视频在线| 日韩av在线大香蕉| 麻豆一二三区av精品| 一a级毛片在线观看| 午夜激情欧美在线| 日本黄色片子视频| 看黄色毛片网站| 欧美在线黄色| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美一区二区精品小视频在线| 51午夜福利影视在线观看| 国产高清videossex| 亚洲精品一区av在线观看| 十八禁人妻一区二区| 国产高清三级在线| 一a级毛片在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 99视频精品全部免费 在线| 一个人免费在线观看电影| 久久久国产成人精品二区| 国产乱人伦免费视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 成人特级av手机在线观看| 久久草成人影院| 日韩欧美 国产精品| 性色av乱码一区二区三区2| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久久久亚洲av毛片大全| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 男女午夜视频在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 日本成人三级电影网站| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲午夜理论影院| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲中文日韩欧美视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲色图av天堂| 十八禁人妻一区二区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久99久视频精品免费| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日韩欧美三级三区| 国产亚洲精品一区二区www| 午夜福利免费观看在线| 伊人久久精品亚洲午夜| 母亲3免费完整高清在线观看| 麻豆成人av在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲精品456在线播放app | 人人妻人人看人人澡| 叶爱在线成人免费视频播放| 少妇高潮的动态图| 精品欧美国产一区二区三| 久久久久亚洲av毛片大全| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国产真实伦视频高清在线观看 | 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产伦精品一区二区三区视频9 | 日韩人妻高清精品专区| av女优亚洲男人天堂| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 色视频www国产| 国产不卡一卡二| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日本黄色片子视频| 在线观看av片永久免费下载| 免费观看的影片在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产午夜精品论理片| 日本免费a在线| 搞女人的毛片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 老司机深夜福利视频在线观看| 香蕉丝袜av| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产精华一区二区三区| 成年女人看的毛片在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 成人av一区二区三区在线看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美成人免费av一区二区三区| 色综合亚洲欧美另类图片| 丁香六月欧美| 99国产综合亚洲精品| 一本综合久久免费| 日韩av在线大香蕉| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精品一区二区三区视频在线 | 久99久视频精品免费| 在线观看av片永久免费下载| aaaaa片日本免费| 日韩精品青青久久久久久| 最新在线观看一区二区三区| 国产野战对白在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日韩欧美三级三区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 九色成人免费人妻av| a级一级毛片免费在线观看| 天堂动漫精品| 色综合婷婷激情| 51午夜福利影视在线观看| 国产老妇女一区| 亚洲成av人片免费观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国内精品久久久久久久电影| av在线蜜桃| 国产69精品久久久久777片| 91av网一区二区| 午夜久久久久精精品| 丰满人妻一区二区三区视频av | 真人做人爱边吃奶动态| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 日韩国内少妇激情av| 中亚洲国语对白在线视频| 国产一区二区三区视频了| a在线观看视频网站| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久久色成人| 日韩人妻高清精品专区| 免费看日本二区| 日本 av在线| 亚洲人成网站高清观看|