益生菌對(duì)結(jié)腸癌化療患者腸道菌群及化療相關(guān)并發(fā)癥影響的研究

邵云娣 路娜娜 趙敏

[摘要] 目的 觀察益生菌對(duì)于結(jié)腸癌化療患者腸道菌群及化療相關(guān)并發(fā)癥的影響。 方法 選擇2015年5月～2016年11月收治的90例結(jié)腸癌術(shù)后需要化療的患者（化療方案均采用奧沙利鉑聯(lián)合亞葉酸鈣、氟尿嘧啶），隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，每組45例。治療組在開始化療的同時(shí)開始服用雙歧桿菌四聯(lián)活菌片，每次3粒，每天3次；對(duì)照組在開始化療時(shí)不給予雙歧桿菌四聯(lián)活菌片干預(yù)。觀察兩組化療期間不良反應(yīng)的發(fā)生率。收集兩組患者的糞便，檢測(cè)化療前后雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌的含量變化；檢測(cè)兩組化療前后血中CD4+、CD8+T細(xì)胞的比例及CD4+/CD8+比值水平。 結(jié)果 在化療期間，與對(duì)照組相比，治療組患者的惡心、嘔吐，腹瀉，食欲下降的發(fā)生率明顯下降（P<0.05）?；熀螅委熃M的雙歧桿菌、乳酸桿菌高于對(duì)照組，而腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌的含量明顯低于對(duì)照組（P<0.05）；化療后，與對(duì)照組相比，治療組CD4+T細(xì)胞的比例明顯升高，CD8+T細(xì)胞比例下降，CD4+/CD8+比值水平明顯高于對(duì)照組。 結(jié)論 益生菌有利于調(diào)整結(jié)腸癌化療患者的腸道菌群，提高患者的免疫力，減少化療相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生。

[關(guān)鍵詞] 益生菌；結(jié)腸癌；化療；腸道菌群；免疫功能

[中圖分類號(hào)] R735.34 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）02-0023-04

[Abstract] Objective To observe the effect of probiotics on intestinal flora and chemotherapy-related complications in patients with chemotherapy of colon cancer. Methods 90 patients with colon cancer needing postoperative chemotherapy who were treated in our hospital from May 2015 to November 2016 were enrolled in this study. All patients were treated with chemotherapy regimen of oxaliplatin combined with leucovorin calcium and fluorouracil. The patients were divided into treatment group and control group， with 45 cases in each group. The treatment group was given bifidobacterium tetravaccine tablets at the same time of starting chemotherapy， with 3 capsules each time for 3 times a day. The control group was not given bifidobacterium tetravaccine tablets at the beginning of chemotherapy. The incidence of adverse reactions in both groups was observed. The feces of both groups were collected. The content changes of bifidobacterium， lactobacillus， enterococcus， escherichia coli and staphylococcus were detected before and after chemotherapy. The ratios of CD4+， CD8+ T cells and CD4+/CD8+ between the two groups before and after chemotherapy were detected. Results During chemotherapy， the incidence of nausea， vomiting， diarrhea and loss of appetite decreased significantly in the treatment group compared with that of the control group（P<0.05）. After chemotherapy， the content of bifidobacterium and lactobacillus in the treatment group were higher than that of the control group， while the content of enterococcus， escherichia coli， staphylococcus aureus was significantly lower than that of the control group（P<0.05）. In the treatment group， the ratio of CD4+ T cells was significantly increased， the proportion of CD8+ T cells was decreased after chemotherapy， compared with that of the control group. The ratio of CD4+/CD8+ was significantly higher than that of the control group. Conclusion The probiotics are beneficial to adjust the intestinal flora of patients with chemotherapy of colon cancer， improve the immunity and to reduce the incidence of chemotherapy-related complications.

[Key words] Probiotics； Colon cancer； Chemotherapy； Intestinal flora； Immune function

結(jié)腸癌是最常見的癌癥之一，在亞洲國(guó)家有逐年增加的趨勢(shì)[1]。然而，由于手術(shù)方式及后續(xù)治療措施（比如放療、化療）的發(fā)展，結(jié)腸癌的5年存活率有穩(wěn)步上升[2]?；熓墙Y(jié)腸癌后期治療的重要方法之一，其可導(dǎo)致患者出現(xiàn)腸道菌群失調(diào)，從而引起惡心、嘔吐，腹瀉，食欲下降等并發(fā)癥，這些并發(fā)癥嚴(yán)重影響了結(jié)腸癌患者的化療期間的生活質(zhì)量，甚至可能導(dǎo)致化療終止[3]。益生菌是一種影響宿主中腸道微生物平衡的活微生物的食物補(bǔ)充劑，已知對(duì)人類健康具有許多有益效果[4]。本研究探討益生菌對(duì)于改善結(jié)腸癌患者化療期間腸道菌群及免疫力是否有影響，觀察益生菌是否能減少結(jié)腸癌患者化療期間的并發(fā)癥的發(fā)生，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院腫瘤內(nèi)科2015年5月～2016年11月收治的90例結(jié)腸癌術(shù)后需要化療的患者為研究對(duì)象，隨機(jī)雙盲分為對(duì)照組和治療組，每組45例。其中男53例，女37例，年齡55～77歲，術(shù)前均無惡心、嘔吐，腹瀉，食欲下降等并發(fā)癥。兩組術(shù)前功能狀態(tài)評(píng)分（KPS分級(jí)評(píng)分，均在90 分以上）、性別、年齡、病程比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施。

1.2 方法

四聯(lián)活菌片0.5 g/粒（杭州遠(yuǎn)大生物制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20060010）；奧沙利鉑100 mg/支（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20000337）；亞葉酸鈣 25 mg/支（廣東嶺南制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20090052）；氟尿嘧啶 250 mg/支（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H31020593）；流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman公司）。完善入院輔助檢查，所有患者均接受mFOLFOX6方案：奧沙利鉑：100 mg/m2 iv gtt（2 h）d1；亞葉酸鈣：400 mg/m2 iv gtt（2 h）dL；氟尿嘧啶：400 mg/m2 iv dL，其后2400 mg/m2持續(xù)滴注46 h；每?jī)芍苤貜?fù)1次，2次為1個(gè)療程。治療組在進(jìn)行化療的同時(shí)服用雙歧桿菌四聯(lián)活菌片，每次3粒，每天3次。對(duì)照組在進(jìn)行化療時(shí)不給予雙歧桿菌四聯(lián)活菌片干預(yù)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 觀察化療期間并發(fā)癥的發(fā)生率 兩組患者開始化療后，觀察兩組患者惡心、嘔吐，腹瀉，食欲下降的發(fā)生情況。

1.3.2 腸道菌群的檢測(cè) 化療前及化療后，采集兩組患者的新鮮糞便4～6 g，半個(gè)小時(shí)內(nèi)送檢，根據(jù)要求選擇各檢查菌的培養(yǎng)基板，根據(jù)需氧菌和厭氧菌的特點(diǎn)，嚴(yán)格按照其生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)，然后鑒別菌落。最后對(duì)糞便稀釋液中的細(xì)菌量進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果以log10N表示每克糞便中的細(xì)菌數(shù)。

1.3.3 血清中CD4+、CD8+ T細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值水平的測(cè)定 化療前及化療后，采集兩組患者的血液。取流式細(xì)胞儀專用的falcon試管，各管中分別加入100 μL混勻的血液，在各管中加入CD4-APC、CD8-PE流式抗體試劑各0.5 μL，低速渦流混勻試劑和血液3 s，室溫避光反應(yīng)10～15 min。在各試管中加入FACS溶血素1×Lysing Solution 2 mL，低速渦流混勻器混勻，室溫避光放置10～15 min。室溫條件下300 r/min離心5 min，棄上清，控干，再加入2 mL 1×PBS洗滌，低速渦流混勻器混勻，300 r/min離心5 min，棄上清，控干。制備完成的樣本，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+、CD8+ T細(xì)胞百分比并計(jì)算CD4+/CD8+比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均用Gradphad Prism 5.0及SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；符合正態(tài)分布及方差齊性的多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，多組之間任兩組間比較采用Dunnet t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布或方差齊性兩者任一條件的數(shù)據(jù)采用Kruskal Wallis非參數(shù)檢驗(yàn)方法比較多組間差異，任兩組間比較采用Dunnet t檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者化療期間不良反應(yīng)發(fā)生率比較

化療期間，與對(duì)照組相比，治療組的惡心、嘔吐，腹瀉，食欲下降發(fā)生率明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。見表1。

2.2 兩組患者化療前后腸道菌落比較

化療前，兩組患者腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌的含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）?；熀?，治療組的雙歧桿菌、乳酸桿菌較對(duì)照組明顯增加（P<0.05）；化療后，與對(duì)照組相比，治療組的腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌的含量明顯減少（P<0.05）。見表2。

2.3兩組患者化療前后CD4+、CD8+ T細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值比較

化療前，兩組患者CD4+、CD8+細(xì)胞比例[對(duì)照組：CD4+（23.75±2.85）%，CD8+（22.87±3.28）%；治療組：CD4+（24.53±2.18）%，CD8+（29.28±4.15）%]比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；化療后，與對(duì)照組[CD4+：（27.63±3.57）%]相比，治療組的CD4+細(xì)胞比例[（36.57±2.63）%]明顯升高（P<0.05），CD8+細(xì)胞比例[對(duì)照組（27.63±4.85）%；治療組（19.67±3.26）%]下降（P<0.05）（圖1）?；熀螅c對(duì)照組相比，治療組的CD4+/CD8+比值更高，見表3。

3 討論

結(jié)腸癌是許多國(guó)家最常見的癌癥之一，最近的研究顯示，我國(guó)的結(jié)腸癌的發(fā)病率為56/10萬，并且在逐年上升[5]。化療是結(jié)腸癌患者手術(shù)后提高其生存率一個(gè)重要的方法，但是化療藥物易引起胃腸道反應(yīng)，如惡心、嘔吐，腹瀉，食欲下降等，主要原因有心理因素、免疫力下降等，嚴(yán)重影響了化療期間患者的生活質(zhì)量，有時(shí)甚至致化療中斷[6，7]。益生菌主要是雙歧桿菌和乳酸桿菌等，研究表明，益生菌具有緩解患者腹瀉及改善胃腸道不適的作用[8，9]。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)益生菌能夠明顯減輕結(jié)腸癌患者化療期間胃腸道的反應(yīng)，改善患者在化療期間的生活質(zhì)量。

化療藥物的使用主要因?yàn)槠淠軞⑺滥[瘤細(xì)胞，達(dá)到治療的作用，但是治療疾病的同時(shí)，由于它對(duì)正常細(xì)胞也有毒性作用，所以也帶來了很多副作用。研究表明，化療藥物在使用期間能對(duì)腸道的上皮細(xì)胞產(chǎn)生破壞，造成腸道的菌群失調(diào)，致使腸道菌群異位[10-13]。在我們的研究中，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組化療后，雙歧桿菌、乳酸桿菌明顯減少，而腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌的含量明顯增加，化療藥物可導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，這個(gè)結(jié)果與文獻(xiàn)的報(bào)道相似。大量研究表明，腸道菌群失調(diào)會(huì)導(dǎo)致嘔心、嘔吐，腹瀉等并發(fā)癥，嚴(yán)重者甚至?xí)l(fā)生內(nèi)源性的感染，治療非常棘手[14]。在合理使用抗生素的同時(shí)，對(duì)腸道微生物環(huán)境的調(diào)節(jié)也顯得十分重要[15]。王占鋒等的研究發(fā)現(xiàn)，益生菌能夠抑制病原菌的生長(zhǎng)，改善腸道菌群失調(diào)[16]。另外還有研究證實(shí)，益生菌的使用并不會(huì)增加細(xì)菌感染的風(fēng)險(xiǎn)[17]。Gratz SW的研究證實(shí)，益生菌能夠改善動(dòng)物的腸道菌群種類，防治腸道菌群的異位[18]。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)，使用益生菌干預(yù)的患者，化療后，雙歧桿菌、乳酸桿菌較對(duì)照組明顯增加，而腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌的含量明顯減少。這個(gè)結(jié)果說明益生菌有利于調(diào)整腸道的菌群的失調(diào)，對(duì)化療患者的腸道起到保護(hù)作用，從而減少并發(fā)癥的發(fā)生。

文獻(xiàn)報(bào)道，接受化療的患者，機(jī)體的免疫力往往會(huì)有明顯的下降，這主要與化療藥物對(duì)機(jī)體細(xì)胞非選擇性的毒性作用有關(guān)，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也對(duì)正常的免疫細(xì)胞（例如粒細(xì)胞）產(chǎn)生了毒性作用[19，20]?；熎陂g患者免疫力下降的主要臨床表現(xiàn)為食欲下降，身體疲乏，容易患感染性疾病等，所以提高化療患者的免疫力是臨床十分關(guān)心的問題[21]。文獻(xiàn)報(bào)道，益生菌有利于調(diào)節(jié)機(jī)體T細(xì)胞的數(shù)量和活性，并直接影響T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，提高機(jī)體的免疫功能[22，23]。王天群等的研究證實(shí)，益生菌能提高結(jié)直腸癌術(shù)后患者的免疫力，減少術(shù)后感染的機(jī)率[24]。Rizzardini G等[25]報(bào)道，益生菌能夠增加血漿中抗體的水平，提高機(jī)體的免疫力。在本研究中，我們觀察了兩組患者化療前后CD4+，CD8+T細(xì)胞比例的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化療前，兩組患者CD4+、CD8+細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值比較，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是，在化療后，與對(duì)照組相比，使用益生菌干預(yù)的治療組患者，CD4+細(xì)胞比例明顯升高，CD8+比例下降，CD4+/CD8+比值升高，這個(gè)結(jié)果提示，益生菌有助于增加化療患者的CD4+細(xì)胞比例，恢復(fù)CD4+/CD8+比值水平，達(dá)到提高化療患者免疫力的作用。

綜上所述，本研究證實(shí)，結(jié)腸癌患者在化療期間使用益生菌對(duì)機(jī)體有很大的益處，它能減少患者化療期間的胃腸道反應(yīng)，預(yù)防化療藥物所致的腸道菌群失調(diào)，還能提高患者的免疫力，改善患者化療期間的生活質(zhì)量。但是，本研究還存在一定不足，首先，本研究是單中心的研究，樣本量較小，還需要多中心，大樣本的研究重復(fù)證實(shí)。另外，本研究對(duì)于益生菌通過什么途徑提高機(jī)體的CD4+T細(xì)胞比例并沒有深入闡述，也沒有探討益生菌是否能改善T細(xì)胞的功能，這些還需要進(jìn)一步的深入研究來闡述。

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（收稿日期：2017-05-16）