· 基礎(chǔ)研究 ·

S1-1 梔子藏紅花色素部位GJ-4治療阿爾茨海默癥的藥效學(xué)與作用機(jī)制研究

臧彩霞 鮑秀琦 張 丹

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，天然藥物活性物質(zhì)與功能國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京，100050，中國(guó)

【摘要】 目的：阿爾茨海默癥（Alzhimer’s disease，AD）是目前最常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病，主要以記憶進(jìn)行性減退和認(rèn)知功能障礙為特征。AD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，主要有遺傳、年齡、A β假說(shuō)、Tau蛋白假說(shuō)、神經(jīng)炎癥和氧化應(yīng)激等。臨床上用于治療AD的藥物較少，并且長(zhǎng)期服用的副作用較大，因此迫切需要研發(fā)新的藥物。GJ-4是從梔子中提取分離出的一種藏紅花色素富集的活性部位，前期實(shí)驗(yàn)利用A β轉(zhuǎn)基因老年癡呆果蠅模型對(duì)GJ-4的藥效進(jìn)行初步評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)GJ-4可顯著改善A β轉(zhuǎn)基因果蠅的學(xué)習(xí)記憶能力，提示其具有良好的研究開(kāi)發(fā)前景。我們計(jì)劃在多種AD模型上對(duì)GJ-4進(jìn)行綜合藥效學(xué)評(píng)價(jià)，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討。方法：采用A β25-35側(cè)腦室注射模型、岡田酸側(cè)腦室注射模型及血管性癡呆模型，利用跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮進(jìn)行小鼠行為學(xué)評(píng)價(jià)。用免疫組化觀察小鼠皮層和海馬區(qū)域神經(jīng)元的凋亡及膠質(zhì)細(xì)胞的激活；Western Blot法檢測(cè)GJ-4對(duì)COX-2和iNOS、JAK2/STAT1炎癥信號(hào)通路的影響；ELISA法測(cè)定GJ-4對(duì)皮層和海馬炎癥因子TNF-α和PGE2釋放量的影響；并檢測(cè)GJ-4對(duì)乙酰膽堿酯酶活性及乙酰膽堿含量的影響。結(jié)果：GJ-4對(duì)三種學(xué)習(xí)記憶損傷小鼠（A β25-35側(cè)腦室注射模型、岡田酸側(cè)腦室注射模型及血管性癡呆模型）表現(xiàn)出較好的改善學(xué)習(xí)記憶的能力，如在跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)中GJ-4能減少跳臺(tái)錯(cuò)誤次數(shù)并延長(zhǎng)潛伏期；在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中，GJ-4能明顯提高小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力及空間探索能力。免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)GJ-4能減少皮層和海馬區(qū)域的神經(jīng)元的凋亡，并能抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。乙酰膽堿與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)，我們發(fā)現(xiàn)GJ-4能改善膽堿能系統(tǒng)的功能障礙，主要表現(xiàn)在抑制乙酰膽堿酯酶的活性及提高乙酰膽堿的含量。初步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)GJ-4能抑制腦內(nèi)的炎癥反應(yīng)，如炎癥因子TNF-α和PGE2的釋放及炎癥蛋白COX-2和iNOS的表達(dá)，并抑制JAK2/STAT1信號(hào)通路的激活。結(jié)論：研究發(fā)現(xiàn)GJ-4具有明顯的提高小鼠學(xué)習(xí)記憶的能力，可能與其改善膽堿能系統(tǒng)功能紊亂及抑制腦內(nèi)的神經(jīng)炎癥有關(guān)。初步機(jī)制研究表明GJ-4通過(guò)抑制JAK2/STAT1相關(guān)炎癥信號(hào)通路激活，從而發(fā)揮抑制神經(jīng)炎癥的作用，但其具體的作用靶點(diǎn)仍需進(jìn)一步研究。

S1-2 加味資成湯對(duì)情志所致糖尿病認(rèn)知功能障礙大鼠腦MAM蛋白質(zhì)組學(xué)的影響

許慧英 戰(zhàn)麗彬

南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)脾藏象現(xiàn)代研究實(shí)驗(yàn)室，南京，210023，中國(guó)

【摘要】 目的：探討情志所致糖尿病認(rèn)知功能障礙發(fā)病及加味資成湯調(diào)節(jié)的可能分子機(jī)制。方法：采用自發(fā)性糖尿病模型ZDF大鼠，施加旋轉(zhuǎn)、擁擠、限制慢性心理應(yīng)激，將大鼠隨機(jī)分為ZDF組（ZDF對(duì)照鼠）、PSD組（ZDF對(duì)照鼠+慢性心理應(yīng)激組）和PDZ組（ZDF對(duì)照鼠+慢性心理應(yīng)激+加味資成湯治療組），每組各3只，PDZ組給予加味資成湯32.9 g·kg-1·d-1。采用差速離心法聯(lián)合密度梯度離心法提取ZDF組、PSD組和PDZ組大鼠腦線粒體相關(guān)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜（MAM）。利用等重同位素多標(biāo)簽相對(duì)定量（iTRAQ）結(jié)合液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)（LC-MS/MS）的蛋白質(zhì)組學(xué)定量分析技術(shù)進(jìn)行對(duì)比研究。利用生物信息學(xué)方法，包括GO分類注釋、KEGG通路和蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)相互作用網(wǎng)絡(luò)（PPI），對(duì)差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果：①考染結(jié)果顯示，樣品條帶分離清晰，平行性較好。②質(zhì)譜鑒定結(jié)果顯示，唯一肽段數(shù)目為9 150，蛋白質(zhì)組數(shù)目為1 819，各通道標(biāo)記標(biāo)簽皆有定量信息的蛋白質(zhì)有938個(gè)。③PSD組和ZDF組比較上調(diào)的共同差異表達(dá)蛋白有41個(gè)，下調(diào)的有53個(gè)；PDZ組和PSD組比較上調(diào)的共同差異表達(dá)蛋白有28個(gè)，下調(diào)的有10個(gè)。④通過(guò)GO功能分類，發(fā)現(xiàn)慢性心理應(yīng)激后腦MAM中差異表達(dá)蛋白定位于細(xì)胞、細(xì)胞器、膜等部位，具有結(jié)合、催化、轉(zhuǎn)運(yùn)活性等，主要參與單細(xì)胞生物過(guò)程、細(xì)胞過(guò)程和生物調(diào)節(jié)等。⑤通過(guò)KEGG通路分析，發(fā)現(xiàn)與情志所致糖尿病認(rèn)知功能障礙發(fā)病和加味資成湯干預(yù)相關(guān)的主要通路有阿爾茨海默病通路、胰島素信號(hào)傳導(dǎo)途徑、Ⅱ型糖尿病通路、糖酵解/糖異生途徑等。⑥通過(guò)PPI分析，發(fā)現(xiàn)ZDF組與PSD組有32個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)存在相互作用，PSD組和PDZ組有14個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)存在相互作用。結(jié)論：加味資成湯可調(diào)節(jié)腦MAM中多種蛋白質(zhì)的表達(dá)，提示其可能是通過(guò)調(diào)節(jié)阿爾茨海默病通路、胰島素信號(hào)傳導(dǎo)途徑、Ⅱ型糖尿病通路、糖酵解/糖異生途徑等來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)情志所致糖尿病認(rèn)知功能障礙的潛在治療作用。

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.81230084，No.81730111），江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目（中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)學(xué)）

通訊作者：戰(zhàn)麗彬，女，教授，博士生導(dǎo)師；主要研究方向：從事脾藏象理論及其應(yīng)用的現(xiàn)代研究；E-mail：zlbnj@njucm.edu.cn

S1-3 PSD-93通過(guò)調(diào)節(jié)SSTR4改善APP/PS1小鼠認(rèn)知功能

于林杰 劉 祎 楊 卉 趙 輝 徐 運(yùn)

南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，南京，210008，中國(guó)

【摘要】 目的：阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一種最常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，65歲以上人群中患病率已達(dá)5%～10%，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。近期研究認(rèn)為，AD神經(jīng)變性過(guò)程最初表現(xiàn)為突觸損害。抑制突觸可塑性，減少樹(shù)突棘和突觸的密度，最終引起神經(jīng)元損傷。突觸后密度（postsynaptic density protein，PSD）93是突觸后主要成分，主要表達(dá)于皮層與海馬，在復(fù)雜記憶中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)旨在探討：①PSD-93對(duì)APP/PS1小鼠認(rèn)知功能影響；②探討其主要機(jī)制。方法：利用行為學(xué)、Western Blot及免疫熒光技術(shù)檢測(cè)6月齡APP/PS1小鼠認(rèn)知功能及PSD-93變化。將構(gòu)建成功的PSD-93慢病毒立體定位注射入6月齡APP/PS1小鼠海馬中，1個(gè)月后檢測(cè)AD小鼠的行為學(xué)改變。運(yùn)用Western Blot分析膜結(jié)合鳥(niǎo)苷酸激酶家族（membrane-associated guanylate kinase，MAGUK）及生長(zhǎng)抑素受體（somatostatin receptor，SSTR）蛋白表達(dá)變化。采用ELISA、免疫熒光及Western Blot技術(shù)分析PSD-93過(guò)表達(dá)APP/PS1小鼠海馬β淀粉樣蛋白（amyloid beta，A β）變化。運(yùn)用免疫共沉淀及免疫熒光技術(shù)檢測(cè)PSD-93與SSTR4結(jié)合情況。采用Western Blot、定量PCR及免疫共沉淀技術(shù)研究PSD-93對(duì)SSTR4的泛素化降解影響。結(jié)果：6月齡APP/PS1曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，中心區(qū)域、邊緣區(qū)域停留時(shí)間，及運(yùn)動(dòng)速度無(wú)明顯變化。6月齡APP/PS1小鼠Morris水迷宮及條件恐懼實(shí)驗(yàn)明顯受損，提示其認(rèn)知功能明顯受損。進(jìn)一步運(yùn)用Western Blot及免疫熒光技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，海馬中PSD-93含量明顯降低，提示認(rèn)知功能損害可能與PSD-93減少有關(guān)。PSD-93過(guò)表達(dá)不影響APP/PS1小鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)，Morris水迷宮及條件恐懼記憶的表現(xiàn)明顯改善，提示其海馬依賴記憶提高。運(yùn)用分子生物技術(shù)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，PSD-93過(guò)表達(dá)對(duì)PSD-95、SAP-97、SAP-102、Syn無(wú)明顯影響。同時(shí)，PSD-93過(guò)表達(dá)能明顯升高海馬SSTR4表達(dá)。提示認(rèn)知功能改善可能與SSTR增加有關(guān)。PSD-93過(guò)表達(dá)能明顯減少可溶性、不可溶性及FA可溶性A β1-40含量，明顯減少可溶性A β1-42含量，但對(duì)可溶性及FA可溶性A β1-42無(wú)明顯影響。A β生成和代謝相關(guān)酶表達(dá)發(fā)現(xiàn)，PSD-93達(dá)對(duì)海馬NEP表達(dá)明顯增加。采用免疫共沉淀及免疫熒光技術(shù)檢測(cè)PSD-93與SSTR4存在結(jié)合，PSD-93減少引起的SSTR4降低主要是胞膜蛋白含量。采用Q-PCR及免疫共沉淀技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，PSD-93減少能明顯增加SSTR4的泛素化水平。結(jié)論：PSD-93在APP/PS1小鼠認(rèn)知功能損害中發(fā)揮重要作用，其機(jī)制可能是通過(guò)與SSTR4相互結(jié)合，影響其泛素化，進(jìn)而影響A β含量。

【關(guān)鍵詞】PSD-93；阿爾茨海默癥；生長(zhǎng)抑素受體；泛素化

S1-4 商陸皂苷甲通過(guò)MAPK信號(hào)抑制Aβ誘導(dǎo)的阿爾茨海默病體外模型炎癥反應(yīng)

陳易簡(jiǎn) 徐 運(yùn)

南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，南京，210008，中國(guó)

【摘要】 目的：研究商陸皂苷甲（esculentoside A，EsA）對(duì)A β1-42誘導(dǎo)的阿爾茨海默病體外模型神經(jīng)炎癥反應(yīng)的作用，并探索其作用機(jī)制。方法：使用A β1-42處理小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞建立阿爾茨海默病體外神經(jīng)炎癥模型，使用CCK8法檢測(cè)EsA對(duì)小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞活力的影響，利用ELISA、定量PCR及Western Blot技術(shù)檢測(cè)EsA對(duì)A β1-42刺激后小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥相關(guān)分子表達(dá)水平的作用，并研究了EsA對(duì)原代小膠質(zhì)細(xì)胞MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)和磷酸化水平的改變，以探討其作用機(jī)制。結(jié)果：EsA能減少Aβ1-42處理后小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞NO和PGE2的產(chǎn)生，抑制iNOS和COX-2的mRNA及蛋白表達(dá)；EsA能抑制Aβ1-42處理后小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞MAPK信號(hào)通路的激活。結(jié)論：EsA可以抑制Aβ1-42誘導(dǎo)的阿爾茨海默病體外模型神經(jīng)炎癥反應(yīng)，降低A β1-42刺激后小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥相關(guān)分子的表達(dá)，其機(jī)制可能與抑制MAPK信號(hào)通路的激活有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】商陸皂苷甲；阿爾茨海默??；β-淀粉樣蛋白；小膠質(zhì)細(xì)胞；神經(jīng)炎癥

S1-5 兩種淀粉樣斑塊染色方法在APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠中的比較

張 麗 陳 晨 萇浩曉 楊翠翠 張 蘭 李 林

首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院藥物研究室，神經(jīng)變性病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京市神經(jīng)藥物工程技術(shù)研究中心，北京，100053，中國(guó)

【摘要】 目的：比較剛果紅染色和硫磺素S染色兩種方法在檢測(cè)阿爾茨海默病（AD）動(dòng)物模型腦組織淀粉樣斑塊中的特點(diǎn)，為AD病理診斷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：將APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠和正常對(duì)照組小鼠飼養(yǎng)至17月齡，動(dòng)物取腦后切片，分別用剛果紅染色和硫磺素S染色兩種方法觀察腦組織淀粉樣斑塊的變化。結(jié)果：剛果紅和硫磺素S兩種染色方法均顯示APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠大腦皮層和海馬區(qū)有淀粉樣斑塊形成，但硫磺素S染色法對(duì)淀粉樣斑塊的檢測(cè)更靈敏，小斑塊沉積的檢出率較高。結(jié)論：與剛果紅染色法相比，硫磺素S染色法能更清晰顯示AD動(dòng)物模型腦中淀粉樣斑塊，是一種簡(jiǎn)單易行的染色方法。

通訊作者：李林，E-mail：13651194287@163.com

S1-6 醒腦靜抑制興奮性氨基酸毒性及改善突觸可塑性的研究

劉 祎 陳易簡(jiǎn) 徐 運(yùn)

南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院，南京，210008，中國(guó)

【摘要】 目的：阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）是病理過(guò)程復(fù)雜的腦退行性疾病，年齡是其最重要的危險(xiǎn)因素，臨床上以認(rèn)知能力損害為主。AD 患者突觸結(jié)構(gòu)的異常改變及興奮性氨基酸毒性影響更早出現(xiàn)，并與認(rèn)知功能的下降密切相關(guān)。醒腦靜注射液是在安宮牛黃丸的基礎(chǔ)上改制而成的水溶性注射液，廣泛應(yīng)用于臨床腦血管系統(tǒng)疾病的治療中。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谔接憣?duì)醒腦靜注射液針對(duì)AD模型小鼠改善其突觸可塑性及抑制興奮性氨基酸毒性的研究。方法：向C57/BL6小鼠雙側(cè)海馬內(nèi)注射A β1-42制備AD模型，應(yīng)用不同濃度的醒腦靜注射液連續(xù)腹腔注射15天，通過(guò)Morris水迷宮，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、新物體識(shí)別試驗(yàn)檢測(cè)AD模型小鼠的學(xué)習(xí)認(rèn)知功能；通過(guò)免疫熒光檢測(cè)突觸形態(tài)情況；通過(guò)WB技術(shù)檢測(cè)突觸相關(guān)蛋白表達(dá)情況以及興奮性氨基酸受體情況。結(jié)果：礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果示，各組小鼠的運(yùn)動(dòng)距離及平均速度未見(jiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并且用藥后各組小鼠的corner time及center time兩項(xiàng)指標(biāo)未見(jiàn)明顯變化；新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果示，醒腦靜注射液中劑量組小鼠探索新物體時(shí)間較其他組時(shí)間更長(zhǎng)，其次為高劑量組；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果示，訓(xùn)練期醒腦靜中劑量組duration時(shí)長(zhǎng)有減少趨勢(shì)，測(cè)試期比較AD模型小鼠，醒腦靜中劑量組穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增加，目標(biāo)象限停留時(shí)間更長(zhǎng)；免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果示，AD模型組MAP-2熒光信號(hào)強(qiáng)度較對(duì)照組有所減弱，且醒腦靜中劑量組MAP-2熒光信號(hào)強(qiáng)度有所增加；WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果示，與AD模型小鼠相比，醒腦靜中劑量組GAP-43、PSD-95、Bcl-2蛋白表達(dá)情況均顯著增加。結(jié)論：通過(guò)礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、新物體識(shí)別、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)以及WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，醒腦靜對(duì)AD模型小鼠在中劑量組有明顯改善作用，且此改善作用主要在于焦慮狀態(tài)、探索能力、空間記憶功能、神經(jīng)元突觸信號(hào)傳遞情況以及細(xì)胞凋亡情況。

通訊作者：徐運(yùn)，E-mail：xuyun20042001@aliyun.com

S1-7 從小膠質(zhì)細(xì)胞探索AD發(fā)病機(jī)制

信怡榕 羅煥敏

暨南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣州，510632，中國(guó)

【摘要】小膠質(zhì)細(xì)胞（microglia），一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的固有免疫細(xì)胞，一度被忽視，最近在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的健康和疾病研究中占據(jù)了中心地位。許多新的分子工具和小鼠疾病模型正在越來(lái)越多地將這種神秘的神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞作為神經(jīng)發(fā)育障礙（如自閉癥）、神經(jīng)退行性疾?。ㄈ绨柎暮Ｄ。┖吐蕴弁吹燃膊〉年P(guān)鍵參與者。同時(shí)，在神經(jīng)環(huán)路的發(fā)育及學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的突觸可塑性的形成過(guò)程中，小膠質(zhì)細(xì)胞在健康的腦中也扮演多種角色。在健康的腦和脊髓中，小膠質(zhì)細(xì)胞占據(jù)約10%的神經(jīng)細(xì)胞，高度分枝，具有許多精細(xì)的、異?；钴S的突起，持續(xù)地探測(cè)腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的環(huán)境。在這種探測(cè)過(guò)程中，小膠質(zhì)細(xì)胞檢測(cè)到多種細(xì)胞外信號(hào)，然后對(duì)它們進(jìn)行信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)、整合和應(yīng)答來(lái)維持腦的穩(wěn)態(tài)。研究者們逐漸開(kāi)始關(guān)注小膠質(zhì)細(xì)胞多樣性的信號(hào)應(yīng)答，認(rèn)為其很多應(yīng)答狀態(tài)有異于中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥狀態(tài)。總之，與過(guò)去的簡(jiǎn)單認(rèn)識(shí)不同，如今被越來(lái)越清晰地認(rèn)識(shí)到，小膠質(zhì)細(xì)胞是腦功能與功能障礙的積極參與者。也是眾多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，包括阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）的新的、極具潛力的治療靶標(biāo)。

小膠質(zhì)細(xì)胞通過(guò)改變自身的基因表達(dá)和功能特征來(lái)應(yīng)對(duì)腦組織穩(wěn)態(tài)的改變，因此為研究者們提供了大量可用于確定腦組織健康、壓力或疾病狀態(tài)的轉(zhuǎn)錄標(biāo)志。Krasemann等人從轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究提出了一種在衰老小鼠、AD模型小鼠及AD患者腦內(nèi)老年斑、神經(jīng)炎性斑塊附近圍繞的具有吞噬作用的小膠質(zhì)細(xì)胞表型稱為MGnD。這種小膠質(zhì)細(xì)胞表型可以由凋亡的神經(jīng)元誘導(dǎo)，抑制穩(wěn)態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞表型的基因（如P2ry12，Cx3cr1，Csf1r，Mef2a和Sall1）的表達(dá)，但又與脂多糖和γ干擾素誘導(dǎo)的M1型小膠質(zhì)細(xì)胞不同，Apoe在其中高表達(dá)。這種表型在小鼠神經(jīng)退行性疾病模型常見(jiàn)而在疼痛模型中不常見(jiàn)。凋亡的神經(jīng)元通過(guò)觸發(fā)TREM2-APOE通路誘導(dǎo)MGnD態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞，抑制穩(wěn)態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞。敲除Apoe或消融Trem2都會(huì)導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)法從穩(wěn)態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)镸GnD態(tài)，因此這提供了一個(gè)AD的潛在治療靶標(biāo)，即通過(guò)調(diào)節(jié)TREM2-APOE通路實(shí)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)變，促進(jìn)穩(wěn)態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞的恢復(fù)。此外，Trem2還是重要的AD風(fēng)險(xiǎn)基因，其多種變體均與AD或顳葉癡呆、帕金森氏病有關(guān)。在免疫系統(tǒng)中，TREM2通過(guò)其受體DAP12介導(dǎo)免疫系統(tǒng)中的炎癥和吞噬信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。削弱TREM2信號(hào)的突變可能通過(guò)影響小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬作用、小膠質(zhì)細(xì)胞的存活、神經(jīng)炎癥以及其他過(guò)程導(dǎo)致AD發(fā)病。

在以多種AD發(fā)病學(xué)說(shuō)為指導(dǎo)思想研發(fā)的藥物臨床實(shí)驗(yàn)受挫的情況下，從中樞神經(jīng)系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)以及小膠質(zhì)細(xì)胞在其中發(fā)揮的作用的角度去也許是一種新的嘗試。當(dāng)然，與AD更加確切相關(guān)的小膠質(zhì)細(xì)胞表型尚待確認(rèn)，更重要的是各種表型之間轉(zhuǎn)化的條件與分子機(jī)制也亟待繼續(xù)研究。

S1-8 基于整合藥理學(xué)平臺(tái)探究加味資成湯防治輕度認(rèn)知功能障礙的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制

周 雯 戰(zhàn)麗彬

南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)脾藏象現(xiàn)代研究實(shí)驗(yàn)室，南京，210023，中國(guó)

【摘要】 目的：探討加味資成湯防治輕度認(rèn)知功能障礙（mild cognitive impairment，MCI）的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制。方法：利用由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所聯(lián)合北京大學(xué)藥學(xué)院、中國(guó)科學(xué)院相關(guān)機(jī)構(gòu)構(gòu)建的中藥整合藥理學(xué)計(jì)算平臺(tái)（TCM-IP，www.tcmip.cn），從中藥材數(shù)據(jù)庫(kù)獲得加味資成湯12味中藥的名稱、拉丁名、性味歸經(jīng)、產(chǎn)地、功效及其所含化合物等；從中藥成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)獲得12味中藥的CAS號(hào)、相對(duì)分子質(zhì)量、物理化學(xué)性質(zhì)以及藥物代謝性質(zhì)等信息。在疾病/癥狀靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)中，以“MCI”作為疾病或癥狀關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，獲得治療“MCI”的藥物名稱、藥物療效、藥物靶標(biāo)的基因和蛋白質(zhì)相關(guān)信息。采用二維結(jié)構(gòu)相似性搜索（即MACCS分子指紋），開(kāi)源軟件 Open Babel提取化學(xué)指紋特征，使用Tanimoto系數(shù)定義的相似度計(jì)量方法，與FDA上市藥物進(jìn)行相似性打分（Score≥0.8），獲得加味資成湯作用的潛在靶標(biāo)，建立藥物候選靶標(biāo)信息數(shù)據(jù)庫(kù)?；诩游顿Y成湯藥物靶標(biāo)與MCI之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)，建立加味資成湯靶標(biāo)-MCI基因互作網(wǎng)絡(luò)；以“節(jié)點(diǎn)連接度（degree）”的2倍中位數(shù)為卡值，選取加味資成湯靶標(biāo)-MCI基因互作網(wǎng)絡(luò)的核心節(jié)點(diǎn)（hubs）；在構(gòu)建關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)子網(wǎng)的基礎(chǔ)上，以“degree”、“節(jié)點(diǎn)緊密度（closeness）”和“節(jié)點(diǎn)介度（betweenness）”的中位數(shù)為卡值，選取同時(shí)滿足3個(gè)卡值的節(jié)點(diǎn)為加味資成湯治療MCI失衡網(wǎng)絡(luò)的候選靶標(biāo)；然后，通過(guò)對(duì)上述加味資成湯候選靶標(biāo)參與的功能與通路進(jìn)行富集分析，進(jìn)一步挖掘加味資成湯緩解MCI關(guān)鍵病理的分子機(jī)制，構(gòu)建“加味資成湯-中藥材-化學(xué)成分-核心靶標(biāo)-關(guān)鍵通路”的多層次網(wǎng)絡(luò)關(guān)聯(lián)圖。結(jié)果：平臺(tái)篩選出加味資成湯687種藥物化學(xué)成分，其中人參的成分?jǐn)?shù)量最多有158種，蓮子的成分?jǐn)?shù)量最少僅10種，主要為苷類、糖類、醇類；以及595個(gè)治療MCI的關(guān)鍵靶標(biāo)，包括羥酰輔酶A脫氫酶三功能多酶復(fù)合物亞基α（HADHA）、羥酰-CoA脫氫酶（HADH）、NAD（P）依賴類固醇脫氫酶樣（NSDHL）、1-磷脂酰肌醇 4，5-二磷酸磷酸二酯酶δ-1（PLCD1）、乙醇脫氫酶 1A（ADH1A）、脂肪醛脫氫酶（ALDH3A2）、葡萄糖激酶（GCK）、乙醇脫氫酶 1C（ADH1C）、核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員1（ENPP1）、腺苷酸環(huán)化酶2型（ADCY2）等。GO和KEGG富集分析顯示這些關(guān)鍵靶標(biāo)主要定位于細(xì)胞質(zhì)、線粒體，最常見(jiàn)的分子功能是ATP結(jié)合、蛋白結(jié)合等，并參與嘌呤代謝、核苷酸代謝、碳代謝、碳水化合物代謝等通路。結(jié)論：通過(guò)該平臺(tái)能夠預(yù)測(cè)出加味資成湯防治MCI的關(guān)鍵靶標(biāo)及參與的相關(guān)通路，為進(jìn)一步深入揭示其作用機(jī)制奠定了良好基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】整合藥理學(xué)；加味資成湯；輕度認(rèn)知功能障礙；物質(zhì)基礎(chǔ)；作用機(jī)制

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.81230084，No.81730111），江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目（中醫(yī)學(xué)）

通訊作者： 戰(zhàn)麗彬，女，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：從事脾藏象理論及其應(yīng)用的現(xiàn)代研究，E-mail：zlbnj@njucm.edu.cn

S1-9 中藥治療神經(jīng)重大疾病的多靶點(diǎn)策略和實(shí)驗(yàn)研究

李 林

首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院藥物研究室，北京市神經(jīng)藥物工程技術(shù)研究中心，北京，100053，中國(guó)

【摘要】阿爾茨海默?。ˋlzhimer’s disease，AD）、腦卒中、多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病率高、致殘率高，是世界公認(rèn)的嚴(yán)重危害人類健康的重要疾病。這些疾病是多因素相關(guān)的復(fù)雜性疾病，僅針對(duì)單靶點(diǎn)或單致病途徑的藥物不易取得好的療效。我們的研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)腎中藥何首烏、山茱萸、淫羊藿的提取物何首烏二苯乙烯苷、山茱萸環(huán)烯醚萜苷、淫羊藿黃酮和淫羊藿苷對(duì)多種AD動(dòng)物模型、腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ秃蚆S動(dòng)物模型具有抗神經(jīng)炎癥及減少神經(jīng)元死亡的神經(jīng)保護(hù)作用，同時(shí)具有促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子生成、神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化、髓鞘再生、軸突生長(zhǎng)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)及神經(jīng)再生作用。這些補(bǔ)腎中藥的特點(diǎn)是作用在疾病發(fā)病機(jī)制的多靶點(diǎn)和多途徑，尤其是具有神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)/再生的雙重作用，對(duì)于治療AD、腦卒中、MS等復(fù)雜性神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有明顯的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)。

通訊作者：李林，E-mail：linlixw@126.com

S1-10 中藥抗老年癡呆的物質(zhì)基礎(chǔ)與網(wǎng)絡(luò)機(jī)制研究

劉艾林 龐曉叢 張寶月 王 喆 杜冠華

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，北京，100050，中國(guó)

【摘要】為了探討抗老年癡呆中藥復(fù)方的網(wǎng)絡(luò)藥理機(jī)制，本研究通過(guò)中藥方劑相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)收集老年癡呆防治相關(guān)的中藥復(fù)方，根據(jù)單味藥出現(xiàn)的頻次進(jìn)行排名，從中選取頻次較高的單味藥，使用cnpc和TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行化學(xué)成分的收集；收集了91個(gè)老年癡呆防治相關(guān)中藥復(fù)方，其中出現(xiàn)頻次大于18的單味藥有6個(gè)，依次為人參、甘草、遠(yuǎn)志、菖蒲、當(dāng)歸、茯苓，收集其已知化學(xué)成分分別為187、259、135、9、148、49個(gè)。利用藥物靶標(biāo)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)收集了51個(gè)；阿爾茨海默癥（Alzhimer’s disease，AD）相關(guān)靶標(biāo)，同時(shí)收集了老年癡呆相關(guān)靶標(biāo)的活性化合物，利用樸素貝葉斯和遞歸算法，構(gòu)建了多靶標(biāo)抗老年癡呆預(yù)測(cè)模型，并用于所收集化學(xué)成分的靶標(biāo)預(yù)測(cè)。在此基礎(chǔ)上，利用Cytoscape構(gòu)建化學(xué)成分—靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)，靶標(biāo)—靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)以及靶標(biāo)—疾病網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)大部分化學(xué)成分可以作用于多個(gè)靶標(biāo)，發(fā)揮協(xié)同藥效作用。該研究應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、機(jī)器學(xué)習(xí)算法、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法及分子對(duì)接方法，研究了抗老年癡呆傳統(tǒng)中藥有效成分的網(wǎng)絡(luò)作用機(jī)制，為中藥抗老年癡呆的臨床應(yīng)用以及多靶標(biāo)抗老年癡呆藥物設(shè)計(jì)提供重要信息。

基金項(xiàng)目： “重大新藥創(chuàng)制”國(guó)家科技重大專項(xiàng)（No.2014ZX09507003-002），中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康科技創(chuàng)新工程（No.2016-I2M-3-007）

通訊作者：劉艾林，E-mail：liuailin@imm.ac.cn

杜冠華，E-mail：dugh@imm.ac.cn