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    楓蓼醇提液槲皮素含量測(cè)定及藥效

    2018-03-13 07:22:21彭新宇袁明貴徐志宏廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所農(nóng)業(yè)部獸用藥物與診斷技術(shù)廣東科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站廣東省畜禽疫病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣東省中獸藥工程技術(shù)研究中心廣州510640
    中國(guó)獸藥雜志 2018年2期
    關(guān)鍵詞:小鼠劑量

    高 彪,彭新宇,袁明貴,徐志宏(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所 農(nóng)業(yè)部獸用藥物與診斷技術(shù)廣東科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站廣東省畜禽疫病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣東省中獸藥工程技術(shù)研究中心,廣州 510640)

    楓蓼制劑是由牛耳楓及辣蓼這兩味藥材共同組成,是傳統(tǒng)民間方劑。牛耳楓(DaphniphyllumcalycinumBenth.)又稱(chēng)牛耳鈴,是屬虎皮楠科(Daphniphyllaceae)虎皮楠屬植物,主要分布于我國(guó)海南、廣東、江西、福建等省份,具有活血散瘀、祛風(fēng)止痛、止痢清熱等功效,主治痢疾、風(fēng)濕骨痛、感冒發(fā)熱等疾病。辣蓼(polygonumhydropiperL)又稱(chēng)柳蓼,為蓼科(Polygonaceae)蓼屬(polygonum)植物。廣泛分布于我國(guó)廣東、云南、海南、臺(tái)灣等省市[1],具有止痢、活血化瘀、止癢殺蟲(chóng)等功效,主治腹瀉、腸胃炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、跌打損傷等[2-4]。

    現(xiàn)代中藥藥理研究發(fā)現(xiàn),黃酮類(lèi)化合物是辣蓼與牛耳楓中的主要活性物質(zhì),研究表明黃酮類(lèi)化合物具有抗氧化,抗炎,鎮(zhèn)痛等作用[5]。目前從辣廖和牛耳楓中分離的主要黃酮類(lèi)化合物有蘆丁、槲皮素等。其中槲皮素含量可用作評(píng)價(jià)其質(zhì)量的定量標(biāo)準(zhǔn)之一,快速、準(zhǔn)確的測(cè)定方法具有重要意義。通過(guò)熱板法、醋酸扭體法、二甲苯誘發(fā)小鼠耳廓腫脹法及醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響,研究了楓蓼乙醇提取液的抗炎、鎮(zhèn)痛活性效果,為臨床應(yīng)用提供了科學(xué)的依據(jù)[6-7]。

    1 材料與方法

    1.1 主要儀器 RE-5399型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);SB25-12DT型超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司);Metter-Toledo-xs型十萬(wàn)分之一天平(瑞士梅特勒公司);SHZD-D(Ⅲ)型循環(huán)式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)。

    1.2 主要材料 牛耳楓藥材購(gòu)于廣東茂名(批次201507);辣蓼藥材購(gòu)于廣東茂名(批次201508);羅通定(批號(hào)A160101 山西云鵬制藥有限公司);腸胃康(批號(hào)151002,海口市制藥廠有限公司);阿司匹林(批號(hào)160102,湖南新匯制藥股份有限公司);伊文斯蘭(批號(hào)20130218,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);二甲苯、乙醇、醋酸均是分析純。

    試驗(yàn)動(dòng)物:昆明小鼠,SPF級(jí)別,體重18~22 g,雌雄各半,采購(gòu)于南方醫(yī)科大學(xué)的試驗(yàn)動(dòng)物中心(合格證號(hào):SCXK(粵)2011-0015)。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 楓蓼藥材中槲皮素含量測(cè)定

    1.3.1.1 最佳吸收波長(zhǎng)的選擇 精密稱(chēng)取槲皮素對(duì)照品,甲醇溶解,定容,制得每1 mL含20 μg的槲皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行200~400 nm掃描。

    1.3.1.2 流動(dòng)相的選擇 本試驗(yàn)研究比較了乙腈、甲醇有機(jī)相與水或不同濃度磷酸之間的組合,也對(duì)柱溫、梯度洗脫方法及流速進(jìn)行了考察。

    1.3.1.3 對(duì)照品的配制 精密稱(chēng)量10 mg槲皮素對(duì)照品于10 mL棕色容量瓶中,加甲醇適量,超聲溶解,冷卻至室溫,加適量甲醇定容至刻度,搖勻,制得槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液(每1 mL含槲皮素1.00 mg)。分別精密移取槲皮素對(duì)照品0.05、0.10、0.15、0.20、0.25 mL于5 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,搖勻,制得濃度為10、20、30、40、50 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。0.45 μm有機(jī)濾膜濾過(guò),備用。

    1.3.1.4 供試品的配制 精密稱(chēng)取楓蓼粉末20 g(牛耳楓∶辣蓼=2∶1),置于圓底燒瓶中,加入65%乙醇200 mL,浸泡1 h,加熱回流1 h,減壓濃縮至100 mL,0.45 μm有機(jī)濾膜濾過(guò),備用。

    精密量取上述濃縮液2.5 mL于10 mL棕色容量瓶中,用65%的乙醇定容至刻度搖勻,制得含量為0.05 g/mL供試品,0.45 μm有機(jī)濾膜濾過(guò),備用。

    1.3.1.5 線性關(guān)系考察 取上述各濃度對(duì)照品溶液10 μL注入高效液相色譜儀,按優(yōu)選出的色譜條件測(cè)定峰面積,以濃度x為橫坐標(biāo),峰面積Y為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

    1.3.1.6 精密度試驗(yàn) 取“1.3.1.3”項(xiàng)下20 μg/mL的對(duì)照品溶液10 μL注入高效液相色譜儀中,連續(xù)進(jìn)樣6次,按優(yōu)選出的色譜條件測(cè)定峰面積,計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD考察日內(nèi)精密度。

    1.3.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“1.3.1.3”項(xiàng)下20 μg/mL的對(duì)照品溶液在0、4、8、12、16、20、24 h時(shí)取10 μL注入高效液相色譜儀中,按優(yōu)選出的色譜條件準(zhǔn)確測(cè)定槲皮素的峰面積,計(jì)算相應(yīng)的RSD值考察對(duì)照品穩(wěn)定性。

    分別在“1.3.1.4”項(xiàng)下供試品溶液制備后,在0、4、8、12、16、20、24 h時(shí)取10 μL注入高效液相色譜儀中,按優(yōu)選出的色譜條件準(zhǔn)確測(cè)定槲皮素的峰面積,計(jì)算相應(yīng)的RSD值考察樣品穩(wěn)定性。

    1.3.1.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批楓蓼藥材,按“1.3.1.4”項(xiàng)下供試品制備方法制備樣品6份,精密量取10 μL注入高效液相色譜儀中,按優(yōu)選出的色譜條件測(cè)定槲皮素峰面積,計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD考察樣品的重復(fù)性。

    1.3.1.9 加樣回收率試驗(yàn) 取同批次已知槲皮素含量的楓蓼粉末6份,每份約0.2 g,精密稱(chēng)定,分別精密加入20 μg/mL的槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液3 mL,按“1.3.1.4”項(xiàng)下的方法處理供試品,精密量取10 μL注入高效液相色譜儀中,按優(yōu)選出的色譜條件測(cè)定槲皮素峰面積,并測(cè)定槲皮素含量,按公式(1)計(jì)算加樣回收率。

    加樣回收率=(測(cè)得值-樣品中所含成分量)/對(duì)照品加入量×100% (1)

    1.3.2 藥效學(xué)試驗(yàn)方法

    1.3.2.1 楓蓼醇提液制備 稱(chēng)取楓蓼粉末20 g,置于圓底燒瓶中,加入65%乙醇200 mL,浸泡1 h,加熱回流1 h,過(guò)濾,減壓濃縮至20 mL(1 g/mL),備用。

    1.3.2.2 熱板法 水浴鍋加滿水,使熱板接觸水面,熱板溫度控制在55±0.5 ℃。取18~22 g的雌性小鼠,放于熱板上至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間作為該鼠的痛閾值,篩選痛閾值在5~30 s的合格小鼠50只,隨機(jī)分為羅通定對(duì)照組(0.02 g/kg)、腸胃康對(duì)照組(15 g/kg)、空生理鹽水組(0.60 mL)、楓蓼醇提液高劑量組(20 g/kg)、中劑量組(10 g/kg)、低劑量組(5 g/kg),各組小鼠分別用苦味酸標(biāo)記,每天同一時(shí)間點(diǎn)灌胃一次,連續(xù)給藥3 d,末次灌胃后于15、30、60、90 min時(shí)間點(diǎn)測(cè)定痛閾值,并進(jìn)行組間比較。

    1.3.2.3 醋酸扭體法 取50只18~22 g SPF級(jí)昆明種小鼠,雌雄各半,隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組(0.60 mL)、阿司匹林對(duì)照組(0.2 g/kg)、腸胃康對(duì)照組(15 g/kg)、楓蓼醇提液高劑量組(20 g/kg)、中劑量組(10 g/kg)、低劑量組(5 g/kg)。每天同一時(shí)間點(diǎn)灌胃一次,連續(xù)給藥3 d,末次給藥1 h后,每只小鼠腹腔注射0.6%的醋酸溶液0.2 mL,觀察并記錄20 min內(nèi)各組小鼠的扭體次數(shù),計(jì)算鎮(zhèn)痛率,并進(jìn)行組間比較。

    陣痛率=(對(duì)照組-給藥組)/對(duì)照組×100%。

    1.3.2.4 二甲苯誘發(fā)小鼠耳廓腫脹法 取50只18~22 g SPF級(jí)昆明種小鼠,雌雄各半,隨機(jī)分為阿司匹林對(duì)照組(0.2 g/kg)、腸胃康對(duì)照組(15 g/kg)、生理鹽水對(duì)照組(0.60 mL)、楓蓼醇提液高劑量組(20 g/kg)、中劑量組(10 g/kg)、低劑量組(5 g/kg)。每天同一時(shí)間點(diǎn)灌胃一次,連續(xù)給藥3 d,最后一次灌胃60 min后,各組小鼠右耳的前后兩面均涂抹0.02 mL二甲苯,左耳不處理。120 min后處死小鼠,于相同部位在小鼠的左耳和右耳分別打下半徑為4 mm的圓狀耳片,精密稱(chēng)重,計(jì)算各組小鼠耳腫脹度,并進(jìn)行組間比較。

    耳腫脹度(mg)=右耳重量(mg)-左耳重量(mg)

    1.3.2.5 醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響

    取50只18~22 g健康昆明小鼠,雌雄各半,隨機(jī)分為阿司匹林對(duì)照組(0.2 g/kg)、腸胃康對(duì)照組(15 g/kg)、生理鹽水對(duì)照組(0.60 mL)、楓蓼醇提液高劑量組(20 g/kg)、中劑量組(10 g/kg)、低劑量組(5 g/kg)。每天同一時(shí)間點(diǎn)灌胃一次,連續(xù)給藥3 d,最后一次灌胃1 h后,各鼠按體重0.1 mL/10 g迅速尾靜脈注射5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液,隨即每只腹腔注射 0.6%醋酸溶液0.2 mL。20 min后,脫頸處死小鼠,用6 mL生理鹽水洗滌腹腔,輕揉腹部2 min,用針管吸出腹腔洗滌液4 mL,洗滌液于3000 r/min轉(zhuǎn)速下離心15 min,取上清液。以生理鹽水為空白對(duì)照,于590 nm處用紫外分光光度法測(cè)得洗滌液吸光度A值,記錄并計(jì)算炎癥抑制率,公式如下:

    炎癥抑制率(%)=(生理鹽水組吸光度-給藥組吸光度)/生理鹽水組吸光度×100%

    2 結(jié) 果

    2.1 槲皮素含量的測(cè)定

    2.1.1 最佳檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 于200~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,確定370 nm為槲皮素檢測(cè)波長(zhǎng)。

    圖1 槲皮素光譜圖Fig 1 The spectrum of Quercetin

    2.1.2 色譜條件 Waters Symmetry shield RP18 色譜柱(4.6 mm×250 mm,5.0 μm);流動(dòng)相:A為乙腈,B為0.4%磷酸水溶液;梯度洗脫:0~13 min,A為20%~45%;13~15 min,A為45%~60%;15~20 min,A為70%~20%。流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):370 nm;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量10 μL。槲皮素對(duì)照品色譜圖如圖2。

    圖2 槲皮素色譜圖Fig 2 Quercetin chromatogram

    2.1.3 線性關(guān)系考察 以濃度μg/mL為橫坐標(biāo)X,峰面積Y為縱坐標(biāo),做線性回歸,得回歸方程為Y=43215X-146476,R2=0.9995,結(jié)果表明槲皮素在10~50 μg/mL濃度范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。結(jié)果見(jiàn)圖3。

    2.1.4 精密度考察 精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液峰面積RSD為0.81%,表明儀器精密度良好。

    圖3 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig 3 The standard curve line

    表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 The result of precision test

    2.1.5 穩(wěn)定性考察

    2.1.5.1 對(duì)照品穩(wěn)定性考察 對(duì)照品穩(wěn)定性考察結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明,對(duì)照品峰面積RSD為0.92%,表明槲皮素對(duì)照品24 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

    2.1.5.2 供試品穩(wěn)定考察 供試品穩(wěn)定性考察結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明,供試品峰面積RSD為1.68%,表明供試品在24 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

    表2 對(duì)照品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 The results of reference substance stability test

    表3 供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Tab 3 The results of testing sample stability test

    2.1.6 重復(fù)性考察 重復(fù)性試驗(yàn)考察結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明,供試品中槲皮素平均含量為353.37 μg/g,RSD為1.74%,表明該方法重復(fù)性良好。

    2.1.7 加樣回收率考察 加樣回收率考察結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明,槲皮素平均回收率為99.44%,RSD為0.59%,表明該法符合試驗(yàn)分析要求,準(zhǔn)確度高。

    表4 重復(fù)性試驗(yàn)考察結(jié)果Tab 4 The results of repeatability test

    表5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 5 The results of recovery test

    2.2 楓蓼醇提液藥效作用

    2.2.1 熱板法 熱板法觀察楓蓼醇提液鎮(zhèn)痛結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可知,15 min時(shí),與生理鹽水組比較,醇提液高劑量組能夠顯著延長(zhǎng)痛閾值(P<0.05),醇提液高劑量組與羅通定組比較,差異不具有顯著性(P>0.05);30、60及90 min時(shí),與生理鹽水比較,醇提液高、中、低劑量組及腸胃康組鎮(zhèn)痛效果均不明顯,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與給藥前痛閾值比較,15 min時(shí),羅通定組、腸胃康組、醇提液高劑量組能夠顯著延長(zhǎng)小鼠痛閾值(P<0.05),30 min時(shí),羅通定腸胃康組能夠顯著延長(zhǎng)小鼠痛閾值(P<0.05),其他各給藥組劑量組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。熱板法試驗(yàn)結(jié)果表明醇提液高劑量組在給藥15 min時(shí)能有效延長(zhǎng)小鼠痛閾值,具有鎮(zhèn)痛作用。

    表6 楓蓼醇提液對(duì)熱刺激致小鼠疼痛反應(yīng)的影響Tab 6 Effect of Fengliao alcohol extract on pain response in mice induced by heat stimulation

    與給藥前痛閾值作比較1:P<0.05;同一時(shí)間點(diǎn),與生理鹽水對(duì)照組比較2:P<0.05;同一時(shí)間點(diǎn),與羅通定對(duì)照組作比較3:P<0.05

    The pain threshold compare with before give drugs 1:P<0.05; At the same time, compare with normal saline 2:P<0.05; At the same time, compare with rotundine 3:P<0.05

    2.2.2 醋酸扭體法 醋酸扭體法結(jié)果見(jiàn)表7。由表7可知,與生理鹽水組比較,各給藥組扭體次數(shù)均有所下降,阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組、腸胃康對(duì)照組、楓蓼醇提液高、中劑量組均能夠顯著降低小鼠扭體次數(shù)(P<0.05),醇提液高、中劑量鎮(zhèn)痛率分別為28.33%、17.41%,作用均顯著弱于阿司匹林組(P<0.05),醇提液高劑量組鎮(zhèn)痛作用與腸胃康組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05),中劑量組差異顯著(P<0.05)。醋酸扭體法試驗(yàn)結(jié)果表明,醇提液高、中劑量均能有效降低小鼠扭體次數(shù),鎮(zhèn)痛作用良好,并具有一定的量效關(guān)系,醇提液高劑量組鎮(zhèn)痛作用與腸胃康組相當(dāng)。

    表7 楓蓼醇提液對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響Tab 7 Effect of Fengliao alcohol extract for injection on mice analgesia caused by acetic acid

    與生理鹽水組作比較1:P<0.05;與阿司匹林作比較2:P<0.05;與腸胃康作比較3:P<0.05

    Compare with normal saline 1:P<0.05;Compare with Acetylsalicylic acid 2:P<0.05;Compare with Chang weikang 3:P<0.05

    2.2.3 二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹法 二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹法結(jié)果見(jiàn)表8。由表8可知,與生理鹽水組比較,腸胃康中藥對(duì)照組、阿司匹林西藥對(duì)照組、醇提液高劑量組均能顯著降低小鼠的耳腫脹度(P<0.05),醇提液高劑量組腫脹抑制率約為53.09%;與阿司匹林組比較,醇提液高劑量組腫脹抑制率弱于阿司匹林組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與腸胃康組比較,醇提液高劑量組腫脹抑制率高于腸胃康組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹法結(jié)果表明,醇提液高劑量組局部鎮(zhèn)痛效果良好。

    表8 楓蓼醇提液對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響Tab 8 Effect of Fengliao alcohol extract on anti-inflammatory of mice ear

    與生理鹽水組作比較1)P<0.05;與阿司匹林作比較2)P<0.05;與腸胃康作比較3)P<0.05

    Compare with normal saline 1)P<0.05;Compare with Acetylsalicylic acid 2)P<0.05;Compare with Chang weikang 3)P<0.05

    2.2.4 醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響 醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響結(jié)果見(jiàn)表9。與生理鹽水組比較,各給藥組腹腔毛細(xì)血管滲透液吸光度均有所下降,阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組、腸胃康對(duì)照組、楓蓼醇提液高、中劑量組下降顯著(P<0.05),醇提液高、中劑量平均炎癥抑制率分別為37.10%、35.48%;與阿司匹林組比較,醇提液高、中劑量吸光度顯著高于阿司匹林組(P<0.05);與腸胃康組比較,醇提液高、中劑量組吸光度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)果表明,醇提液高、中劑量組抗炎效果良好,能夠有效抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管的通透性,抑制作用弱于阿司匹林,但與腸胃康作用相當(dāng)。

    表9 楓蓼醇提液對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響Tab 9 Effect of Fengliao alcohol extract on the test of acetic acid on the permeability of capillary in the small intestine of rats

    與生理鹽水組作比較1:P<0.05;與阿司匹5林作比較2:P<0.05;與腸胃康作比較3:P<0.05

    Compare with normal saline 1:P<0.05;Compare with Acetylsalicylic acid 2:P<0.05;Compare with Chang weikang 3:P<0.05

    3 討 論

    槲皮素含量測(cè)定方法的建立中,流動(dòng)的選擇分別考察了不同比例的有機(jī)相及不同酸度的磷酸溶液對(duì)目標(biāo)峰形的影響,結(jié)果顯示采用乙腈—0.4%磷酸峰形較好,雜質(zhì)峰無(wú)干擾。洗脫方式分別考察了梯度洗脫及等度洗脫方式(乙腈∶0.4%磷酸=0.48∶0.52),結(jié)果顯示采用梯度洗脫效果較好,各極性成分能夠比較好的分離,因此選用梯度洗脫的方式。研究在建立了含量測(cè)定方法的同時(shí),亦進(jìn)行了穩(wěn)定性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)等一系列方法學(xué)考察,結(jié)果表明準(zhǔn)確度高,重復(fù)性良好,可操作性強(qiáng),能夠滿足質(zhì)量控制的需要。

    藥效試驗(yàn)中,熱板法和醋酸扭體法考察的是楓蓼醇提液的鎮(zhèn)痛效果。熱板法為物理致痛,借助通過(guò)熱的刺激傳入神經(jīng)中樞,使動(dòng)物產(chǎn)生疼痛的感覺(jué),使用羅通定可以抑制痛覺(jué)向中樞的傳遞,從而抑制熱刺激所引起的疼痛反應(yīng),而非甾體化合物阿司匹林作用效果較弱;醋酸扭體法為H+刺激而產(chǎn)生的化學(xué)疼痛,同進(jìn)還會(huì)出現(xiàn)炎癥反應(yīng),非甾體化合物阿司匹林對(duì)這類(lèi)疼痛作用較強(qiáng)[8-9]。故在鎮(zhèn)痛試驗(yàn)研究中,羅通定作為熱板法西藥陽(yáng)性對(duì)照藥,阿司匹林作為醋酸扭體法西藥陽(yáng)性對(duì)照藥。同時(shí)選擇腸胃康作為中藥陽(yáng)性對(duì)照。由熱板法試驗(yàn)結(jié)果可知,醇提液高劑量組在15 min時(shí)痛閾時(shí)間顯著延長(zhǎng),而其他時(shí)間段皆無(wú)顯著性變化;由醋酸扭體法試驗(yàn)結(jié)果可知,各劑量組均可減少扭體次數(shù),其中醇提液高、中劑量組作用明顯。由此可知,楓蓼醇提液制劑對(duì)中樞神經(jīng)鎮(zhèn)痛作用稍弱于外周神經(jīng)的鎮(zhèn)痛作用。

    二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹法及醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響試驗(yàn)考察的是楓蓼醇提液的抗炎效果。早期炎癥的特點(diǎn)包括因毛細(xì)血管通透性增加或擴(kuò)張而引起的炎性滲出或腫脹[10]。在二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹試驗(yàn)中,120 min后生理鹽水造模組耳片腫脹明顯,與生理鹽水組比較,各組小鼠腫脹度均降低,且陽(yáng)性對(duì)照組及醇提液高劑量組均有顯著性降低作用(P<0.05),試驗(yàn)表明楓蓼醇提液能顯著抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹炎癥反應(yīng)。在醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響的試驗(yàn)中,與生理鹽水組比較各給藥組吸光度均呈下降狀態(tài),且陽(yáng)性對(duì)照組及醇提液高、中劑量組具有吸光度顯著性下降(P<0.05)。試驗(yàn)表明楓蓼醇提液能有效降低早期炎性組織液的滲出,且呈現(xiàn)量效關(guān)系,即劑量越高,抑制率越大。

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