VM與E-cad在人卵巢上皮癌組織中的表達(dá)及意義

張永生

（河南省漯河市郾城區(qū)人民醫(yī)院病理科 漯河462000）

卵巢惡性腫瘤為常見的女性生殖器官腫瘤，卵巢上皮癌為其中的常見類型，因其內(nèi)分泌機(jī)制較為復(fù)雜，早期患者癥狀多不明顯，發(fā)現(xiàn)時多已發(fā)生轉(zhuǎn)移，惡性程度相對較高，且目前發(fā)病機(jī)制尚不明確，同時缺乏診斷該疾病敏感性和特異性的方法[1]。相關(guān)研究認(rèn)為[2]，明確卵巢上皮癌發(fā)生發(fā)展過程中的生物標(biāo)志物及分子機(jī)制，在提高卵巢上皮診斷率及病情進(jìn)展監(jiān)測上，具有重要的臨床意義。血管生成擬態(tài)（Vasculogenic Mimicry，VM）為內(nèi)皮細(xì)胞未參與下細(xì)胞表型出現(xiàn)自身變形和基質(zhì)重塑，繼而形成特有的微循環(huán)管道，可促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。E-鈣黏蛋白為重要的黏附因子，是血管生成擬態(tài)結(jié)構(gòu)中，癌細(xì)胞與癌細(xì)胞之間、癌細(xì)胞與基質(zhì)間黏附的關(guān)鍵要素，與癌細(xì)胞的生物學(xué)行為關(guān)系密切[3]。故選取我院收治卵巢病變患者的卵巢上皮組織切片為研究對象，旨在分析VM與E-cad在人卵巢上皮癌組織中的表達(dá)及意義，為卵巢上皮癌的病情監(jiān)測及預(yù)后判斷提供一定的臨床依據(jù)?，F(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2016年8月～2018年2月收治的110例卵巢病變患者卵巢上皮組織切片為研究對象，其中卵巢上皮癌86例，卵巢上皮良性腫瘤24例。卵巢上皮癌患者年齡37～78歲，平均（52.10±7.83）歲；卵巢上皮良性腫瘤患者年齡36～73歲，平均（51.93±7.52）歲。比較兩組臨床資料，無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)病理組織確診卵巢病變，且接受手術(shù)治療者；患者及其家屬均知曉參與本研究，并自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：非上皮卵巢腫瘤者；入院前已行手術(shù)治療或入院后手術(shù)接受其它治療者。

1.3 檢測方法 （1）分別選取5張切片，1張進(jìn)行HE染色，1張進(jìn)行E-鈣黏蛋白（E-cad）免疫組化染色，1張進(jìn)行CD34-PAS染色，1張使用PBS液進(jìn)行陰性對照組，1張備用。（2）HE染色：將切片放于載玻片上于60℃烤箱中過夜烘干，隨后放入二甲苯溶液1、2中浸泡10 min，再放入酒精溶液中進(jìn)行梯度水化，于流動水下沖洗干凈，進(jìn)行蘇木素染色2 min、1%鹽水酒精中進(jìn)行分化數(shù)秒、1%氨水返藍(lán)數(shù)秒、伊紅染色，酒精脫水，二甲苯溶液透明，隨后封片，晾干，于顯微鏡下進(jìn)行觀察。（3）免疫組化染色：同HE染色水化后，使用pH值7.4～7.6的PBS液浸泡3次，每次持續(xù)5 min，過蒸餾水，放入沸騰的檸檬酸抗原修復(fù)液中繼續(xù)加熱（210℃加熱至冒氣后調(diào)至130℃中加熱2.5 min），加熱鍋外冷水降溫20 min，過蒸餾水，室溫下進(jìn)行去離子阻斷，PBS沖洗，滴加養(yǎng)血清進(jìn)行封閉，隨后進(jìn)行一抗、二抗、DAB顯色、蘇木素染色、鹽酸分化、氨水返藍(lán)、酒精脫水、二甲苯溶液透明，封片，晾干，于顯微鏡下進(jìn)行觀察。（4）CD34-PAS染色：在DAB顯色后于鏡下觀察內(nèi)皮細(xì)胞CD34著色后，立即給予流動水沖洗，蒸餾水水洗，滴加PAS，再次沖洗、過蒸餾水后滴加Schiff試劑恒溫反應(yīng)15 min，隨后沖洗、蘇木素染色、鹽酸分化、氨水返藍(lán)、酒精脫水、二甲苯溶液透明，封片，晾干，于顯微鏡下進(jìn)行觀察并進(jìn)行結(jié)果判定。

1.4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 觀察兩組VM、E-cad表達(dá)情況，分析VM、E-cad表達(dá)與卵巢上皮癌患者臨床病理資料的關(guān)系。判定標(biāo)準(zhǔn)：CD34陽性顆粒分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜中，PAS陽性呈紫紅色，表達(dá)于血管壁基膜，鏡下觀察CD34陰性癌細(xì)胞圍成PAS陽性基膜樣不規(guī)則血管樣結(jié)構(gòu)，且周圍無炎性細(xì)胞、無出血壞死，即可判定為VM；E-cad陽性顆粒表達(dá)與細(xì)胞膜/漿中，采用半定量積分法進(jìn)行判定，其中棕褐色3分、棕黃色2分、淡黃色1分、不顯色0分，高倍鏡下10個視野陽性細(xì)胞比例為0計0分，為 1%～10%計1分，11%～50%計 2分，51%～80%計3分，80%以上計4分，前后積分相加，總分0～3分為陰性表達(dá)，3分以上為陽性表達(dá)[4]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以%表示，行χ2檢驗，計量資料行t檢驗，用（±s）表示，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)系數(shù)，同時采用Logistic回歸進(jìn)行多因素分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VM、E-cad表達(dá)情況 卵巢上皮癌組織中，VM陽性表達(dá)率為58.14%（50/86），陰性表達(dá)率為41.86%（36/86），E-cad 陽 性 表 達(dá) 率 為 47.67%（41/86），陰性表達(dá)率為 52.33%（45/86）；卵巢上皮良性腫瘤組織中，VM陽性表達(dá)率為0.00（0/24），陰性表達(dá)率為 100.00%（24/24），E-cad陽性表達(dá)率為79.17%（19/24），陰性表達(dá)率為 20.83%（5/24）。兩組VM、E-cad陽性表達(dá)率比較，有顯著性差異，P＜0.05。

2.2 卵巢上皮癌組織中VM、E-cad陽性表達(dá)與病理參數(shù)的關(guān)系 VM、E-cad陽性表達(dá)與腫瘤直徑、病理類型等參數(shù)無明顯關(guān)系，差異不顯著，P＞0.05；在腫瘤分期、分化程度、淋巴及腹腔轉(zhuǎn)移等參數(shù)方面，在腫瘤分期越高，分化程度越低，有淋巴及腹腔轉(zhuǎn)移的情況下，VM陽性表達(dá)越高，E-cad陽性表達(dá)越低，差異顯著，P＜0.05。且經(jīng)Spearman相關(guān)分析，VM陽性表達(dá)與E-cad陽性表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)，r=-0.674，P＜0.05。見表 1。

表1 卵巢上皮癌組織中VM、E-cad表達(dá)與病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 Logistic多因素分析 將單因素分析存在顯著差異的因子導(dǎo)入Logistic回歸模型中進(jìn)行多因素分析，發(fā)現(xiàn) VM 陽性表達(dá)（or=3.976，95%CI1.326～9.820，P＜0.05）、E-cad陽性表達(dá)（or=0.571，95%CI0.237～0.918，P＜0.05）、腫瘤分期（or=7.604，95%CI2.286～19.335，P＜0.05）、淋巴及腹腔轉(zhuǎn)移（or=4.625，95%CI1.389～12.517，P＜0.05）為卵巢上皮癌疾病進(jìn)展的獨立危險因素。

3 討論

卵巢癌的腫瘤血管生成包括血管生成、血管形成、血管生成擬態(tài)三種方式，腫瘤新生血管與其惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)。VM由侵襲性癌細(xì)胞圍成，癌細(xì)胞與血流之間僅隔有一層PAS陽性基底膜樣物，由于缺少血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障，癌細(xì)胞很容易在自身釋放的蛋白水解酶和血流沖擊下，穿透PAS陽性基底膜樣物進(jìn)入血液中，成為癌組織的功能性微循環(huán)，在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。相關(guān)研究顯示[5]，VM陽性表達(dá)卵巢上皮癌患者更容易發(fā)生血行轉(zhuǎn)移，且生存周期較VM陰性表達(dá)患者低。E-cad為鈣離子依賴性跨膜蛋白，基因定位于16q221，為上皮細(xì)胞標(biāo)志物及重要的黏附因子，在胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、形態(tài)學(xué)及維持上皮極性與完整性方面具有重要作用，其異常表達(dá)為分子離散的基礎(chǔ)，E-cad表達(dá)降低，細(xì)胞間黏附松散，細(xì)胞內(nèi)骨架的固定作用降低，有自身變形能力，促進(jìn)VM形成，是VM發(fā)生的重要機(jī)制之一[6]。本研究結(jié)果顯示，卵巢上皮癌組織中，VM具有較高的陽性表達(dá)率，E-cad具有較低的陽性表達(dá)率；在腫瘤分期越高，分化程度越低，有淋巴及腹腔轉(zhuǎn)移的情況下，VM陽性表達(dá)越高，E-cad陽性表達(dá)越低，且二者呈顯著負(fù)相關(guān)，有顯著性差異，P＜0.05；VM、E-cad陽性表達(dá)、腫瘤分期、淋巴及腹腔轉(zhuǎn)移為卵巢上皮癌疾病進(jìn)展的獨立危險因素。綜上所述，VM與E-cad在人卵巢上皮癌組織中存在明顯的異常表達(dá)，且與腫瘤分期、淋巴及腹腔轉(zhuǎn)移共為卵巢上皮癌疾病進(jìn)展的獨立危險因素，可作為預(yù)后判斷的客觀指標(biāo)。