紅景天提取物對Lewis肺癌細胞增殖及凋亡的影響

馮秋紅

【摘 要】目的：探討紅景天提取物對Lewis肺癌細胞增殖及凋亡的積極影響。方法：分別體外培養(yǎng)的小鼠Lewis肺癌細胞株分別以5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml的紅景天提取物處理0-96h，采用Cell Counging Kit-8法檢測細胞相對存活率，于顯微鏡觀測細胞形態(tài)變化，檢測細胞凋亡率和增值情況。結(jié)果：紅景天提取物濃度越高，肺癌細胞活力抑制作用越明顯，抑制率分別為22.05%、25.65%、39.50%，顯著高于PBS（P<0.05），細胞凋亡率分別為（17.33±0.59）%，（22.30±0.25）%（33.25±0.45）%，與對照組比較差異顯著（P<0.05）。結(jié)論：紅景提取物可以明顯抑制細胞的增值和凋亡，對肺癌有很好的抑制作用。

【關(guān)鍵詞】Lewis肺癌；細胞增殖；凋亡；紅景天；成分提取

【中圖分類號】R575.6 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1005-0019（2018）22-00-01

肺癌是常見的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，疾病的發(fā)病率近年來也越來越高，臨床上治療該疾病的藥物耐藥性越來越低，疾病治療出現(xiàn)很大的挑戰(zhàn)和困難，必須盡快尋找新的藥物，提高肺癌疾病患者的臨床治療效果，改善患者的預(yù)后[1]。根據(jù)體外腫瘤研究指出，紅景天提取物能有效抑制腫瘤細胞的擴散和增值，促進腫瘤細胞的凋亡。但是，關(guān)于紅景天的真正作用和治療機制，目前研究并不多。本文以小鼠Lewis肺癌細胞LIC作為對象，觀察紅景天對肺癌細胞腫瘤的積極影響?？偨Y(jié)具體報告如下：

1 一般材料與儀器

1.1 材料 小鼠Lewis肺癌細胞株LIC，購自ATCC。

1.2 試劑和儀器 使用RPMI-1640培養(yǎng)液、胎牛血清、Anmxin-V-FITC凋亡檢測的試劑盒，Cell Counting Kit-8，恒溫培養(yǎng)箱，SUNRISE酶標(biāo)儀和FACSCalibur流失細胞儀。

2 方法

2.1 紅景天材料提取

取紅景天置于烘烤箱中粉碎，按進行超聲提取液冷卻，回收乙醇，加30倍量水洗脫，使用30%的乙醇洗脫，真空包裝壓縮，得到提取物，配置成0.5、1.0、2.0mg/ml不同濃度的樣本進行實驗。將LIC細胞用10%的胎牛血清、RPMI-1640培養(yǎng)液中，放置于溫度為37℃5%的二氧化碳飽和濕度的培養(yǎng)皿中，實驗時，取處于對數(shù)生長期的細胞。

2.3 增值抑制實驗

從樣本中選取對數(shù)生長期的細胞株LIC細胞，經(jīng)過胰蛋白酶消化，以體積4*103個大小接種于96號孔板中，母孔100μl，培養(yǎng)24h后，放棄原本的培養(yǎng)基，實驗組加入10%的胎牛血清的RPMI1640維持液稀釋，得到不同濃度的紅景天溶液；對照組加1640細胞，空白對照組不加細胞僅用1640維持液進行稀釋，每組都有3個復(fù)孔。培養(yǎng)24h后，分別加入100μlCCK-8液體中，置于5%的CO2條件下，在酶標(biāo)儀波長下測定吸光度、抑制率和增值率。

2.4 流式細胞術(shù)測凋亡率

采用AnnexinV/PI雙染色檢測LIC細胞凋亡率，收集處理后，冷卻脫洗2次，然后將細胞懸置在沖液上面，細胞計數(shù)后調(diào)整細胞濃度為1*106個/ml，吹打混合均勻后取100μl細胞懸液加入流失試管中，分別加入5μlPI-PE及5μlAnnexinV-FITC，混合后置于陰涼避光處5min，加入400IPRS，完成檢測。

2.5 接種與治療 大量培養(yǎng)肺癌細胞株LIC，取對數(shù)生長期的肺癌細胞，每只裸鼠隨機分為4組，其中3組分別注射低劑量、中等劑量和高劑量，1組僅接受PRS，于每天上午同一時間，腹腔給藥。

2.6 統(tǒng)計學(xué)方法

研究中涉及到的統(tǒng)計數(shù)據(jù)均納入SPSS 20.0進行處理，百分數(shù)占比為人數(shù)/總?cè)藬?shù)，比較使用卡方檢驗，平均年齡、病程數(shù)據(jù)比較采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示行t檢驗，當(dāng)P<0.05為比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 增值抑制率

劑量低、中、高三組不同濃度紅景天提取物作用于LIC腫瘤細胞，CCK-8細胞檢測結(jié)果證實，腫瘤細胞明顯時間-效應(yīng)依賴關(guān)系在24h內(nèi)達到最強；低、中、高濃度紅景天組24h的抑制率分別為22.05%、25.65%、39.50%，明顯高于PBS的12.80%，差異顯著（P<0.05），且隨著濃度升高，增值抑制率也出現(xiàn)升高。

3.2 細胞凋亡率

采用AnnexinV-FITC/PI進行雙染法檢測細胞凋亡，流失細胞儀檢測分析，計算凋亡細胞百分率，低中高濃度的紅景天提取物作用在24h后分別達到（17.33±0.59）%，（22.30±0.25）%（33.25±0.45）%，與PBS組相比，差異顯著（P<0.05）。

4 討論

進展期肺癌的患者對于常規(guī)的化療藥物的耐受性很低，患者癌細胞已經(jīng)出現(xiàn)了轉(zhuǎn)移和擴散。肺癌造成的死亡率近年來居高不下，成為嚴重威脅我國人們健康和生命安全的惡性腫瘤之一[2]，很多患者一旦確診就處于疾病晚期，手術(shù)治療已經(jīng)無法取得效果。臨床會首選化療進行治療，但是單純藥物進行化療治療，并不能取得很理想的效果。我國傳統(tǒng)的中草藥在治療肺癌疾病方面有著重要的積極作用[3]，且物資豐富，對機體毒副作用也非常小，患者的耐藥性也比較高，中草藥治療肺癌疾病已經(jīng)逐漸引起人們的重視。紅景天被稱為“高原人參”，具有增強免疫力的作用，能抗疲勞、防衰老，抗病毒和防輻射，減輕高原反應(yīng)等。通過本文研究發(fā)現(xiàn)，將紅景天提取物用于肺癌細胞，能使肺癌細胞間距變大，包漿中出現(xiàn)顆粒沉積，細胞增殖抑制實驗結(jié)果顯示，提取物進入后能抑制細胞增殖，并且濃度越大抑制增殖的效果就越好；紅景天對肺癌細胞的生長抑制方式也有很明顯的誘導(dǎo)凋亡作用，結(jié)果表示，能直接抑制生長。

綜上所述，紅景天抗腫瘤作用機制非常明顯，能抑制肺癌細胞的增值和凋亡，抑制細胞的增值率，隨著研究的不斷深入，能用于臨床治療腫瘤疾病中，為廣大癌癥患者帶來很大的福音。

參考文獻

周立江，潘玉真，殷東風(fēng). 肺積寧方影響Lewis肺癌細胞增殖和自噬的作用機制研究[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2016（7）：1739-1742.

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