青香茅黃酮對大鼠離體胸主動脈舒張作用的研究

劉婧怡， 王 瑩， 耿 直， 郝宇薇， 蘭 衛(wèi)

(新疆醫(yī)科大學1中醫(yī)學院， 烏魯木齊 830011； 2附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學部， 烏魯木齊 830002)

青香茅為禾本科植物香茅屬(Cymbopogon)多年生草本植物，性味辛、溫，具有發(fā)表退熱、祛瘀通絡的功效，臨床多用于治療感冒頭痛，胃痛、泄瀉、風濕痹痛等病癥[1]。青香茅中主要含有揮發(fā)油(如檸檬醛、香茅醛)，黃酮(香茅素、木犀草素、異葒草素)等化學成分[2]。生物類黃酮是植物的一種次生代謝產(chǎn)物，廣泛分布于自然界中。青香茅黃酮提取物是從禾本科植物青香茅全草中提取出的總黃酮。本研究采用離體器官恒溫灌流系統(tǒng)和張力換能器，探究青香茅總黃酮提取物對大鼠離體主動脈環(huán)的舒張作用，報道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器離體器官恒溫灌流系統(tǒng)，張力換能器， BL-420型生物機能實驗系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)。

1.2試藥青香茅黃酮提取物(西安賽奧生物技術有限公司，批號20170112，黃酮含量>70%，CSF)，乙酰膽堿(美國sigma公司，批號20161222，Ach)，去甲腎上腺素(美國sigma公司，批號20161222，PE),Kreb-Henseleit(K-H)液(成分為NaCl 118 mmol/L，KCl 4.7 mmol/L，NaHCO325 mmol/L，KH2PO41.2 mmol/L，MgCl21.2 mmol/L,CaCl22.5 mmol/L，glucose 2 g/L， 調(diào)節(jié)pH=7.4并用雙蒸水定容至1 L)，試劑均為分析純。

1.3動物雄性SD大鼠體質(zhì)量(220±20)g，7只，由新疆醫(yī)科大學動物實驗中心提供，動物使用許可證號為SCXK(新)2011-0004。

2 方法

2.1溶液的制備將CSF用1%的DMSO溶液溶解，配制成CSF濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的溶液。將Ach溶于雙蒸水，配制成濃度分別為0.01、0.1、1.0、10 μmol/L的溶液。將PE均溶于雙蒸水，配制成濃度為1 μmol/L的溶液。

2.2血管環(huán)制備參考張洪平等[3-5]的實驗方法，大鼠脫頸處死后，打開胸腔，剪下胸主動脈，取出并放入已通過氧氣并置于冰袋上的K-H液中，去除血液和血管上附著的脂肪和結(jié)締組織，再將血管環(huán)剪成3 mm長的血管環(huán)，備用。

2.3血管環(huán)的分組隨機取一部分大鼠胸主動脈血管環(huán)，用牙簽去除內(nèi)皮細胞為內(nèi)皮去除組；未去除內(nèi)皮細胞的為內(nèi)皮完整組。用60 mmol/L的KCl對血管環(huán)進行收縮再用K-H液沖洗2次，用2個三角形不銹鋼金屬絲將血管環(huán)掛起，并置于37℃的恒溫浴槽中，持續(xù)通入95%的氧氣和5%的CO2的混合氣體，主動脈環(huán)一端固定在張力換能器上，另一端固定在浴槽中，調(diào)整動脈環(huán)靜息負荷2 g，用BL-420型生物機能實驗系統(tǒng)測定血管張力。

2.4血管內(nèi)皮功能的檢測方法用Ach檢驗血管內(nèi)皮的活性，用PE(1 μmol/L)誘導血管環(huán)進行收縮，待收縮達到穩(wěn)定，用不同濃度的Ach(0.01、0.1、1.0、10 μmol/L)累積加藥來使血管舒張，用最大收縮狀態(tài)10 μmol/L的Ach作為100%的對照檢驗，舒張50%及以上的為有效內(nèi)皮完整組，不舒張甚至繼續(xù)收縮的為有效內(nèi)皮去除組。

2.5青香茅黃酮對主動脈環(huán)的舒張作用將血管環(huán)于K-H液中平衡45 min(每15 min換液1次)，再加入PE(1 μmol/L)誘導血管進行收縮，待收縮穩(wěn)定后，逐步累積加入不同濃度CSF(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL)，當前1個劑量達到平衡后再給下1個劑量，最后加入1 μmol/L的forskolin至血管最大舒張。

3 結(jié)果

3.1Ach對大鼠離體胸主動脈血管環(huán)內(nèi)皮功能的檢測分別按0.01、0.10、1.00、10.00 μmol/L 4個濃度的Ach給藥，內(nèi)皮完整組大鼠離體胸主動脈的最大舒張效應為(17.28%±5.46%)～(78.45%±13.58%)，內(nèi)皮去除組大鼠離體胸主動脈的最大舒張效應為(-1.96%±2.88%)～(2.40%±9.73%)，兩組間比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3.2CSF對大鼠離體胸主動脈血管環(huán)的舒張作用內(nèi)皮完整組和內(nèi)皮去除組大鼠離體胸主動脈的舒張作用隨CSF濃度的升高而增強，當CSF濃度為(1.0 mg/mL)時，內(nèi)皮完整組和內(nèi)皮去除組大鼠離體胸主動脈的最大舒張效應分別為(70.80%±20.97%)和(65.90%±17.96%)，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，表明CSF對大鼠離體胸主動脈的最大舒張作用與血管上內(nèi)皮細胞無關。當CSF濃度為(0.4、0.6 mg/mL)時，內(nèi)皮完整組大鼠離體胸主動脈的最大舒張效應大于內(nèi)皮去除組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

4 討論

血管平滑肌的收縮狀態(tài)決定血管腔的大小，血管平滑肌的緊張程度異常增強可以參與血管性疾病的發(fā)生，因此，具有舒張血管作用的化合物或中藥提取物對心腦血管等疾病具有一定的作用。我們已經(jīng)知道，血管內(nèi)皮細胞對血管平滑肌的舒張起著重要的作用，當血管內(nèi)皮細胞釋放一氧化氮(NO)、前列腺素、超極化因子(EDHF)等從而使血管達到舒張的作用[6]。而PE誘導的血管收縮作用在α-腎上腺受體，從而激活磷脂酶C，產(chǎn)生三磷酸肌醇，刺激平滑肌細胞內(nèi)貯鈣的釋放，同時也可激活細胞膜上的操縱性鈣通道(ROC)和磷酸化電壓依賴性鈣通道使細胞外鈣內(nèi)流而達到血管舒張的作用[7]。青香茅黃酮類化合物是植物的次生代謝產(chǎn)物，以游離態(tài)或與糖結(jié)合成苷的形式存在，廣泛存在于植物中，具有抗菌、抗氧化、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、降血壓以及調(diào)節(jié)機體免疫。據(jù)報導，黃酮類化合物的舒血管作用是通過抑制細胞外鈣離子的內(nèi)流和和細胞內(nèi)鈣離子的釋放來實現(xiàn)的[8]。有研究表明黃酮類化合物可以表現(xiàn)出內(nèi)皮依賴性舒張作用，當去除內(nèi)皮時其舒張作用降低,但不影響其最大舒張作用[9,10]。本研究發(fā)現(xiàn)低濃度的CSF對血管的舒張具有內(nèi)皮依賴作用，當去除內(nèi)皮時，血管的舒張作用明顯弱于內(nèi)皮完整的血管，說明低濃度的CSF可能對刺激內(nèi)皮依賴性的舒張因子的釋放有關,但高濃度的CSF對血管的舒張卻不具有內(nèi)皮依賴作用?？梢娗嘞忝S酮提取物具有良好是舒張血管的作用，其機制可能同時作用于血管內(nèi)皮細胞和血管平滑肌上，為其進一步的機制研究奠定了實驗依據(jù)。

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