應(yīng)用體外全仿生模型初步分析2 種富硒產(chǎn)品中硒形態(tài)及生物可給性

陳尚龍，劉恩岐，陳安徽，劉 輝，巫永華，秦 旭

（1.徐州工程學(xué)院食品（生物）工程學(xué)院，江蘇 徐州 221018；2.徐州工程學(xué)院 江蘇省食品資源開發(fā)與質(zhì)量安全重點建設(shè)實驗室，江蘇 徐州 221018）

硒是人體必需微量營養(yǎng)元素[1]，但不是人體內(nèi)合成的元素，需要通過食物從外界攝入，人體內(nèi)硒水平的高低主要取決于其膳食結(jié)構(gòu)、食物中的含硒量及其化學(xué)形態(tài)。為了滿足人體正常硒需要，適量補充一些富硒產(chǎn)品是一種有效途徑[2-3]。之前，對富硒產(chǎn)品中硒分析多限于總量測定[4]。近年來，隨著對微量元素研究的深入，已有很多硒形態(tài)分析研究報道[5-9]。Mei Tie等[5]利用高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)[10-14]發(fā)現(xiàn)金針菇水溶性蛋白中至少含有6 種含硒蛋白，約占總可溶性硒的7.0%；李紅衛(wèi)等[6]利用4-氯-3,5-二硝基三氟甲苯柱前衍生，建立高效液相色譜法測定富硒米曲霉中有機硒形態(tài)的分析方法，取得了良好的效果；王欣等[7]建立了高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定富硒食品中6 種硒形態(tài)的方法，并應(yīng)用其測定了富硒大米、富硒酵母、富硒茶葉、富硒靈芝孢子粉等多種含硒功能食品中的硒形態(tài)。但這些研究都局限于產(chǎn)品中硒的形態(tài)分析，并沒有考慮到人體復(fù)雜的消化系統(tǒng)對其形態(tài)轉(zhuǎn)化的影響。

實驗動物模型可以較好的模擬人體消化和吸收的過程，但其成本高、耗時、耗力。本實驗以實驗室研制的富硒蛹蟲草和富硒酵母為研究對象，采用體外全仿生消化（含消化酶）技術(shù)[15-17]，依據(jù)化學(xué)仿生（人工胃、腸）與醫(yī)學(xué)仿生（酶的作用）原理，模擬富硒產(chǎn)品經(jīng)胃腸環(huán)境的轉(zhuǎn)運機制，研究胃、腸所含的無機物、有機物及消化酶對富硒產(chǎn)品中硒形態(tài)和生物可給性的影響。正辛醇在結(jié)構(gòu)上與人體內(nèi)的碳水化合物和脂肪類似[18]，實驗以正辛醇為細胞膜，建立正辛醇吸收模型，模擬富硒產(chǎn)品中硒在人體胃、腸中的分配行為；鑒于消化管和血管間的生物膜為類脂質(zhì)膜[19]，實驗以單層脂質(zhì)體為細胞膜，建立單層脂質(zhì)體吸收模型，模擬富硒產(chǎn)品中硒在人體胃、腸中的分配行為。采用微波消解作為前處理方式，使用微波消解-高分辨-連續(xù)光源石墨爐原子吸收光譜（high resolution-continuum source graphite furnace atomic absorption spectrophotometry，HR-CS GFAAS）法[20-24]測定各形態(tài)硒的含量，為進一步研究富硒產(chǎn)品的功能和硒的生物有效性提供初步參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

富硒蛹蟲草和富硒酵母為實驗室研發(fā)產(chǎn)品。

高峰α-淀粉酶、胃蛋白酶、胰酶、脂肪酶、豬膽粉、氨基葡萄糖鹽酸鹽、尿酸、黏蛋白、牛血清白蛋白、葡萄糖醛酸、尿素、硫氰酸鉀、卵磷脂（均為分析純）上海源葉生物科技有限公司；硒標準溶液（1 g/L） 國家化學(xué)試劑質(zhì)檢中心；濃硝酸、NH4H2PO4、Mg(NO3)2、Pd(NO3)2、NH4NO3、質(zhì)量分數(shù)30% H2O2（均為優(yōu)級純），其他化學(xué)試劑均為分析純 國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ContrAA 700高分辨-連續(xù)光源原子吸收光譜儀（配有MPE60自動進樣器） 德國Analytik Jena公司；XT-9900型智能微波消解儀、XT-9800多用預(yù)處理加熱儀 上海新拓微波溶樣測試技術(shù)有限公司；CascadaTM實驗室超純水系統(tǒng) 美國Pall公司；3-30K臺式高速冷凍離心機德國Sigma公司；L550臺式低速離心機 湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 儀器工作參數(shù)

HR-CS GFAAS測定硒工作參數(shù)：分析譜線為196.026 7 nm，載氣為高純氬氣，基體改進劑為1 g/L Pd(NO3)2和0.5 g/L Mg(NO3)2混合溶液且添加體積為5 μL，進樣體積為20 μL，灰化溫度為1 100 ℃，原子化溫度為2 200 ℃，原子化升溫速率為1 500 ℃/s。

1.3.2 基體改進劑溶液的配制

用0.075 mol/L硝酸溶液溶解1.00 g NH4H2PO4后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，再用體積分數(shù)0.5%硝酸定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為10 g/L NH4H2PO4。同理，配制成質(zhì)量濃度為1 g/L Mg(NO3)2、1 g/L Pd(NO3)2、1 g/L NH4NO3、1 g/L Pd(NO3)2和0.5 g/L Mg(NO3)2混合溶液。

1.3.3 標準工作曲線的配制

用0.075 mol/L硝酸溶液將硒標準溶液（1 g/L）逐級稀釋至0.60 mg/L硒標準使用液，再通過MPE自動進樣器實現(xiàn)標準曲線質(zhì)量濃度梯度為0.03、0.09、0.15、0.30、0.45、0.60 mg/L。

1.3.4 樣品前處理及其硒的測定

將樣品（固體為0.3～0.5 g，液體為5～10 g，精確至0.1 mg）、濃硝酸（5～10 mL）和質(zhì)量分數(shù)30% H2O2（2～5 mL）一起置于微波消解罐中，在多用預(yù)處理加熱儀上進行預(yù)處理0.5～1 h，溫度由室溫逐級上升至120 ℃。再加入2 mL質(zhì)量分數(shù)30% H2O2，按表1中步驟進行微波消解，結(jié)束后將溶液轉(zhuǎn)移至50 mL燒杯中加熱至近干，用0.075 mol/L硝酸溶液多次沖洗燒杯中的樣液，并將沖洗液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用0.075 mol/L硝酸溶液定容至刻度，搖勻備用，同時以同樣方法做空白對照[25]。根據(jù)硒濃度的高低，用0.075 mol/L硝酸溶液對其進行適當(dāng)倍數(shù)的稀釋，然后再用HR-CS GFAAS進行測定。

表1 微波消解條件Table1 Microwave digestion conditions

1.3.5 胃、腸全仿生消化液的制備

表2 唾液、胃液、十二指腸液、膽汁組成成分[19,26]Table2 Ingredients of simulated saliva, gastric juice,duodenal juice and bile

根據(jù)表2，分別加入唾液、胃液、十二指腸液和膽汁中所含的有機物和無機物，利用HCl和NaHCO3調(diào)節(jié)pH值，再用超純水定容至500 mL，置于4 ℃冷藏保存?zhèn)溆?，使用前在此基礎(chǔ)上分別加入相應(yīng)的消化酶。

1.3.6 胃全仿生提取液的制備

準確稱取1.9～2.1 g（精確至1 mg）富硒產(chǎn)品（富硒蛹蟲草或富硒酵母）置于250 mL三角瓶中，加入5.00 mL唾液，在37 ℃條件下恒溫振蕩5 min后（振蕩速率為60 r/min），再加入75.0 mL胃液，在37 ℃條件下恒溫振蕩2 h（振蕩速率為60 r/min），結(jié)束后離心20 min（離心速率為4 200 r/min）達到固液分離，得上清液（胃全仿生提取液），并稱質(zhì)量，置于4 ℃冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.7 腸全仿生提取液的制備

準確稱取1.9～2.1 g（精確至1 mg）富硒產(chǎn)品（富硒蛹蟲草或富硒酵母）置于250 mL三角瓶中，加入5.00 mL唾液，在37 ℃條件下恒溫振蕩5 min后（振蕩速率為60 r/min），加入75.0 mL胃液，在37 ℃條件下恒溫振蕩2 h（振蕩速率為60 r/min），再加入100.0 mL十二指腸液和40.0 mL膽汁，在37 ℃條件下恒溫振蕩7 h（振蕩速率為60 r/min），結(jié)束后離心20 min（離心速率為4 200 r/min）達到固液分離，得上清液（腸全仿生提取液），并稱質(zhì)量，置于4 ℃冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.8 可溶態(tài)與懸浮態(tài)的分離和測定

準確稱取40 g（精確至0.01 g）全仿生提取液置于50 mL離心管中，離心10 min（離心速率為11 000 r/min）后取上清液，再過0.45 μm濾膜，得可溶態(tài)溶液[27]，并稱量質(zhì)量。按1.3.4節(jié)方法對可溶態(tài)溶液進行消解和測定，測定結(jié)果為可溶態(tài)硒含量，再將剩余可溶態(tài)溶液置于4 ℃冷藏保存?zhèn)溆谩腋B(tài)硒含量=硒總量-可溶態(tài)硒含量。

1.3.9 可溶態(tài)中有機態(tài)和無機態(tài)的分離和測定

準確稱取10 g（精確至0.01 g）可溶態(tài)溶液，過D101大孔吸附樹脂（用2 倍左右體積的無水乙醇浸泡24 h左右，去離子水沖至中性），用0.15 mol/L硝酸溶液以2.0 mL/min的流速洗滌樹脂，收集250 mL洗出液，按1.3.4節(jié)方法對洗出液進行消解和測定[27]，測定結(jié)果為可溶態(tài)中無機態(tài)硒含量。可溶態(tài)中有機態(tài)硒含量=可溶態(tài)硒含量-可溶態(tài)中無機態(tài)硒含量。

1.3.10 有機態(tài)中蛋白結(jié)合態(tài)的分離和測定

準確移取2.00 mL可溶態(tài)溶液置于50 mL離心管中，再加入18.00 mL丙酮，混合均勻后離心10 min（離心速率為6 000 r/min），去除上清液，按1.3.4節(jié)方法對所得沉淀進行消解和測定[27]，測定結(jié)果為有機態(tài)中蛋白結(jié)合態(tài)硒含量。

1.3.11 有機態(tài)中多糖結(jié)合態(tài)的分離和測定

準確移取2.00 mL可溶態(tài)溶液置于50 mL離心管中，再加入14.00 mL無水乙醇，混合均勻后離心10 min（離心速率為6 000 r/min），去除上清液，按1.3.4節(jié)方法對所得沉淀進行消解和測定[27]，測定結(jié)果為有機態(tài)中多糖結(jié)合態(tài)硒含量。

1.3.12 正辛醇吸收模型制備及其體外吸收

取適量正辛醇與超純水以體積比1∶10進行混合，強力振蕩均勻后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，避光靜置12 h后待其分層，上層為被水飽和的正辛醇，下層為被正辛醇飽和的水，避光保存，備用。

準確移取1.00 mL可溶態(tài)溶液置于50 mL離心管中，加入1.00 mL被水飽和的正辛醇和20.00 mL被正辛醇飽和的水，在37 ℃條件下恒溫振蕩5 h（振蕩速率為250 r/min）后，在4 ℃條件下恒溫離心10 min（離心速率為11 000 r/min），結(jié)束后用膠頭滴管吸去離心管上層正辛醇相，最后用超純水將剩余溶液定容至25 mL，按1.3.4節(jié)方法對上述溶液進行消解和測定，測定結(jié)果為正辛醇吸收模型中水溶態(tài)硒含量。正辛醇醇溶態(tài)硒含量=可溶態(tài)硒含量-正辛醇吸收模型中水溶態(tài)硒含量。

正辛醇吸收模型中分配系數(shù)Kow值為正辛醇吸收模型中醇溶態(tài)硒含量和水溶態(tài)硒含量的比值[28]。

1.3.13 單層脂質(zhì)體吸收模型制備及其體外吸收

準確稱取0.001 g（精確至0.1 mg）蛋黃卵磷脂溶于10.00 mL氯仿，溶解后將其轉(zhuǎn)移至具塞圓底燒瓶中，然后置于37 ℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至形成均勻的多層脂質(zhì)體膜。

準確移取5.00 mL可溶態(tài)溶液置于50 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度后，全部轉(zhuǎn)移至上述圓底燒瓶中，充氮氣后蓋好涂有凡士林的塞子，在37 ℃條件下恒溫振蕩1 h（振蕩速率為100 r/min），使脂質(zhì)體膜全部進入溶液中。然后將全部溶液轉(zhuǎn)移至100 mL塑料管中，在超低溫冰箱（-80 ℃）中冷凍20 min后取出，置于37 ℃水浴中融化，重復(fù)凍融3 次，促進可溶態(tài)在單層脂質(zhì)體-水體系中的分配。由于單層脂質(zhì)體粒徑為0.3～0.35 μm，用0.22 μm濾膜抽濾上述凍融液，收集濾液[19]，按1.3.4節(jié)方法對濾液進行消解和測定，測定結(jié)果為單層脂質(zhì)體吸收模型中水溶態(tài)硒含量。單層脂質(zhì)體親和態(tài)硒含量=可溶態(tài)硒含量-單層脂質(zhì)體吸收模型中水溶態(tài)硒含量。

單層脂質(zhì)體吸收模型中分配系數(shù)DMW值為單層脂質(zhì)體親和態(tài)硒含量和單層脂質(zhì)體吸收模型中水溶態(tài)硒含量的比值。

1.3.14 硒生物可給性的計算

富硒產(chǎn)品胃、腸全仿生提取液中硒生物可給性按下式計算：

式中：TK為富硒產(chǎn)品胃、腸全仿生提取液中可溶態(tài)硒含量/（μg/g）；TZ為富硒產(chǎn)品中硒總量/（μg/g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 分析譜線的選擇

在HR-CS AAS（采用高壓短弧Xe燈）分析中，選擇196.026 7 nm作為硒分析譜線時，附近有1 個強吸收峰和3 個弱吸附峰。為了選擇適合硒分析的譜線，實驗比較了質(zhì)量濃度為0.03、0.09、0.15、0.30、0.45、0.60 mg/L這6 種標樣在波長196.026 7 nm附近的吸附光譜圖，如圖1所示。

圖1 波長196.026 7 nm附近吸收光譜圖Fig. 1 Absorption spectra at 196.026 7 nm wavelength

由圖1可知，波長196.026 7nm處吸附峰的峰高隨硒質(zhì)量濃度的增加而增加，而附近其他4 個吸附峰的峰高隨硒質(zhì)量濃度的增加基本不變，因此可以判斷這4 個吸附峰為干擾峰，不能作為硒的分析譜線，HRCS AAS的分光系統(tǒng)是由1 個棱鏡和1 個中階梯光柵組成的高分辨單色器，通過此單色器可以獲得較高的分辨率（最高可達到0.002 nm），完全可以將196.026 7 nm處吸附峰與附近其他4 個吸附峰分開。因此，實驗選擇196.026 7 nm作為硒分析譜線，通過HR-CS AAS的分光系統(tǒng)完全可以消除196.026 7 nm附近其他4 種干擾峰對硒測定的影響。

2.2 基體改進劑種類的選擇

圖2 基體改進劑對吸光度的影響Fig. 2 Effect of matrix modifiers on absorbance

在石墨爐原子吸收光譜法測定硒過程中，添加適合的基體改進劑可以使待測樣品中基體更容易揮發(fā)，同時可以防止硒在灰化過程中揮發(fā)。實驗選擇NH4H2PO4、Mg(NO3)2、Pd(NO3)2、NH4NO3、Pd(NO3)2和Mg(NO3)2混合溶液作為基體改進劑[29-30]，研究其對吸光度和吸收峰峰形的影響，如圖2所示。以1 g/L NH4NO3作為基體改進劑，硒的吸光度增加不明顯；而添加其他4 種基體改進劑，硒的吸光度增加明顯，特別是1 g/L Pd(NO3)2和0.5 g/L Mg(NO3)2混合溶液，以此混合溶液作為基體改進劑不僅能提高硒的吸光度，而且還能改善硒的吸附峰峰形。因此，實驗選擇1 g/L Pd(NO3)2和0.5 g/L Mg(NO3)2混合溶液作為測定硒的基體改進劑。

2.3 基體改進劑添加體積的優(yōu)化

圖3 基體改進劑的添加體積對吸光度的影響Fig. 3 Effect of matrix modifier volume on absorbance

基體改進劑的添加體積是影響硒吸光度的因素之一，為了最大限度地消除基體干擾，提高硒的吸光度。實驗在固定其他參數(shù)條件下，只改變1 g/L Pd(NO3)2和0.5 g/L Mg(NO3)2混合溶液的添加體積，測定硒的吸光度，結(jié)果如圖3所示。以1 g/L Pd(NO3)2和0.5 g/L Mg(NO3)2混合溶液為基體改進劑能顯著地提高硒的吸光度，這是由于不添加基體改進劑時，過高的灰化溫度會導(dǎo)致硒揮發(fā)損失，使硒的吸光度降低。當(dāng)添加體積小于5 μL時，硒的吸光度隨著基體改進劑添加體積的增大而增大；當(dāng)體積不小于5 μL時，增加趨勢趨于平緩。因此，實驗選擇添加1 g/L Pd(NO3)2和0.5 g/L Mg(NO3)2混合溶液的最佳體積為5 μL。

2.4 灰化溫度的優(yōu)化

圖4 灰化溫度對吸光度的影響Fig. 4 Effect of aching temperature on absorbance

灰化溫度是影響硒吸光度的因素之一，過低的灰化溫度無法使基體完全灰化，導(dǎo)致背景吸光度升高；過高的灰化溫度會導(dǎo)致硒揮發(fā)損失，使硒的吸光度降低，重復(fù)性變差。實驗在固定其他參數(shù)條件下，只改變灰化溫度，測定硒的吸光度，結(jié)果如圖4所示。當(dāng)灰化溫度小于1 100 ℃時，硒的吸光度隨著灰化溫度的增大而增大；當(dāng)灰化溫度不小于1 100 ℃時，硒的吸光度開始下降。因此，實驗選擇最佳灰化溫度為1 100 ℃。

2.5 原子化溫度的優(yōu)化

圖5 原子化溫度對吸光度的影響Fig. 5 Effect of atomization temperature on absorbance

圖6 原子化溫度對硒吸收峰的影響Fig. 6 Effect of atomization temperature on selenium absorption peak

原子化溫度也是影響硒吸光度的因素之一，過低的原子化溫度無法使硒徹底原子化，導(dǎo)致其吸光度降低，吸附峰峰形變差；過高的原子化溫度會減少石墨管的使用次數(shù)。實驗在固定其他參數(shù)條件下，只改變原子化溫度，測定硒的吸光度，如圖5所示。不同原子化溫度條件下，硒的吸收峰峰形如圖6所示。由圖5可知，當(dāng)原子化溫度小于2 200 ℃時，硒的吸光度隨著原子化溫度的升高而增大；當(dāng)原子化溫度不小于2 200 ℃時，硒的吸光度趨于穩(wěn)定。由圖6可知，當(dāng)原子化溫度為2 000 ℃和2 100 ℃時，硒的吸收峰峰形較差，拖尾現(xiàn)象明顯；當(dāng)原子化溫度為2 200 ℃和2 300 ℃時，硒的吸收峰峰形較好，無明顯拖尾現(xiàn)象。因此，實驗選擇最佳原子化溫度為2 200 ℃。

2.6 標準工作曲線

通過ASpect CS軟件設(shè)置硒的檢測方法，將0.60 mg/L硒標準使用液、1 g/L Pd(NO3)2和0.5 g/L Mg(NO3)2混合溶液、空白溶液和待測樣品溶液放入MPE自動進樣器的對應(yīng)位置，建立相應(yīng)的測定序列，使用HR-CS GFAAS進行順序測定。以硒的質(zhì)量濃度（c）為橫坐標、硒的吸光度（A）為縱坐標，經(jīng)ASpect CS軟件繪制非線性標準工作曲線，所得方程為A=（0.037 312 5＋0.917 625 5c）/（1＋0.304 683 9c），相關(guān)系數(shù)為0.999 2，特征質(zhì)量濃度為0.004 8 mg/L，表明在0～0.60 mg/L范圍內(nèi)，硒的質(zhì)量濃度與吸光度呈現(xiàn)良好的關(guān)系。

2.7 富硒蛹蟲草胃、腸全仿生提取液中硒的形態(tài)分析及生物可給性

按1.3.4～1.3.13節(jié)方法對富硒蛹蟲草進行處理，根據(jù)硒的標準工作曲線計算出各形態(tài)硒含量，結(jié)果見表3。

表3 富硒蛹蟲草胃、腸全仿生提取液中各形態(tài)硒含量及生物可給性Table3 Speciation analysis and bioavailability assessment of Se in the gastric and intestinal digests of selenium-enriched Cordyceps militaris

由表3可知，富硒蛹蟲草含有豐富的硒，達到2.129 μg/g；在胃全仿生提取液中可溶態(tài)硒為0.277 μg/g，其中有機態(tài)硒占總量的7.42%，蛋白結(jié)合態(tài)硒和多糖結(jié)合態(tài)硒分別占總量的0.52%和0.28%，正辛醇醇溶態(tài)硒和單層脂質(zhì)體結(jié)合態(tài)硒分別占總量的1.27%和4.74%，Kow值和DMW值分別為0.108和0.574，硒的生物可給性為13.01%；在腸全仿生提取液中可溶態(tài)硒為0.358 μg/g，其中有機態(tài)硒占總量的9.49%，蛋白結(jié)合態(tài)硒和多糖結(jié)合態(tài)硒分別占總量的2.35%和0.75%，正辛醇醇溶態(tài)硒和單層脂質(zhì)體結(jié)合態(tài)硒分別占總量的4.37%和7.52%，Kow值和DMW值分別為0.351和0.808，硒的生物可給性為16.82%。

除了懸浮態(tài)硒，富硒蛹蟲草腸全仿生提取液中可溶態(tài)硒、無機態(tài)硒、有機態(tài)硒、蛋白結(jié)合態(tài)硒、多糖結(jié)合態(tài)硒、正辛醇吸收模型中水溶態(tài)硒、正辛醇醇溶態(tài)硒、單層脂質(zhì)體吸收模型中水溶態(tài)硒、單層脂質(zhì)體結(jié)合態(tài)硒的含量都高于胃全仿生提取液，這說明在腸消化階段一部分懸浮態(tài)富硒蛹蟲草被消化，轉(zhuǎn)化成可溶態(tài)，導(dǎo)致可溶態(tài)硒含量升高，生物可給性變大。從各形態(tài)硒含量、Kow值和DMW值的變化分析，懸浮態(tài)硒在消化過程中轉(zhuǎn)化成各形態(tài)硒，并不是僅轉(zhuǎn)化成有機態(tài)硒，在腸消化過程中產(chǎn)生的正辛醇醇溶態(tài)硒和單層脂質(zhì)體結(jié)合態(tài)硒的含量都高于各自水溶態(tài)硒，導(dǎo)致Kow值和DMW值變大，Kow值和DMW值越大，說明親脂性硒含量越高。

2.8 富硒酵母胃、腸全仿生提取液中硒的形態(tài)分析及生物可給性

按1.3.4～1.3.13節(jié)方法對富硒酵母進行處理，根據(jù)硒的標準工作曲線計算出各形態(tài)硒含量，計算結(jié)果見表4。

由表4可知，富硒酵母含有豐富的硒，高達27.75 μg/g；在胃全仿生提取液中可溶態(tài)硒為2.55 μg/g，其中有機態(tài)硒占總量的6.74%，蛋白結(jié)合態(tài)硒和多糖結(jié)合態(tài)硒分別占總量的0.43%和0.25%，正辛醇醇溶態(tài)硒和單層脂質(zhì)體結(jié)合態(tài)硒分別占總量的3.28%和3.57%，Kow值和DMW值分別為0.555和0.635，硒的生物可給性為9.19%；在腸全仿生提取液中可溶態(tài)硒為3.53 μg/g，其中有機態(tài)硒占總量的7.86%，蛋白結(jié)合態(tài)硒和多糖結(jié)合態(tài)硒分別占總量的1.80%和0.68%，正辛醇醇溶態(tài)硒和單層脂質(zhì)體結(jié)合態(tài)硒分別占總量的6.52%和6.81%，Kow值和DMW值分別為1.05和1.15，硒的生物可給性為12.72%。

除了懸浮態(tài)硒，富硒酵母腸全仿生提取液中可溶態(tài)硒、無機態(tài)硒、有機態(tài)硒、蛋白結(jié)合態(tài)硒、多糖結(jié)合態(tài)硒、正辛醇吸收模型中水溶態(tài)硒、正辛醇醇溶態(tài)硒、單層脂質(zhì)體吸收模型中水溶態(tài)硒、單層脂質(zhì)體結(jié)合態(tài)硒的含量都高于胃全仿生提取液，這說明在腸消化階段一部分懸浮態(tài)富硒酵母被消化，轉(zhuǎn)化成可溶態(tài)，導(dǎo)致可溶態(tài)硒含量升高，生物可給性變大。從各形態(tài)硒含量、Kow值和DMW值的變化分析，懸浮態(tài)硒在消化過程中轉(zhuǎn)化成各形態(tài)硒，并不是僅轉(zhuǎn)化成有機態(tài)硒，在腸消化過程中產(chǎn)生的正辛醇醇溶態(tài)硒和單層脂質(zhì)體結(jié)合態(tài)硒的含量都高于各自水溶態(tài)硒，導(dǎo)致Kow值和DMW值變大，Kow值和DMW值越大，說明親脂性硒含量越高。

3 結(jié) 論

通過單因素試驗，確定最佳測定條件：分析譜線為196.0267 nm，基體改進劑為1 g/L Pd(NO3)2和0.5 g/L Mg(NO3)2混合溶液，添加體積為5 μL，灰化溫度為1 100 ℃，原子化溫度為2 200 ℃。在此條件下，測定富硒蛹蟲草和富硒酵母中總硒分別為2.129 μg/g和27.75 μg/g。除了懸浮態(tài)硒，腸全仿生提取液中其他各形態(tài)硒的含量都高于胃全仿生提取液，這說明在腸消化階段一部分懸浮態(tài)被消化，轉(zhuǎn)化成可溶態(tài)，導(dǎo)致可溶態(tài)硒含量升高，生物可給性變大。從各形態(tài)硒含量、Kow值和DMW值的變化分析，懸浮態(tài)硒在消化過程中轉(zhuǎn)化成各形態(tài)硒，并不是僅轉(zhuǎn)化成有機態(tài)硒，在腸消化過程中產(chǎn)生的正辛醇醇溶態(tài)硒和單層脂質(zhì)體結(jié)合態(tài)硒的含量都高于各自水溶態(tài)硒，導(dǎo)致Kow值和DMW值變大，Kow值和DMW值越大，說明親脂性硒含量越高。

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