圓葉葡萄種子發(fā)育過程中多酚積累特性

魏 征，郭文鋒，黃 羽*，尹 玲，曲俊杰，張雅麗，盧 江,4,*

（1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083；2.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣西作物遺傳改良生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530007；3.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院葡萄與葡萄酒研究所，廣西 南寧 530007；4.上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，葡萄與葡萄酒研究中心，上海 200240）

圓葉葡萄起源于美國東南部地區(qū)，很少在美國以外的地方種植[1-2]。與真葡萄相比，因其具有較強(qiáng)的抗性（抗氧化、抗癌、抗菌和抗炎等），可耐高溫高濕環(huán)境，對(duì)根瘤蚜、霜霉病和白粉病等真菌類疾病免疫[3-6]，而備受葡萄育種學(xué)家的青睞。本實(shí)驗(yàn)室陸續(xù)從美國引進(jìn)多個(gè)圓葉葡萄品種，定植于廣西、云南和福建等地，可實(shí)現(xiàn)一年兩熟[7-8]。

多酚類化合物是葡萄果實(shí)中重要的次生代謝產(chǎn)物[3,9-10]。在葡萄屬植物中，目前只在圓葉葡萄中檢測到鞣花酸類化合物，包括鞣花酸衍生物和鞣花單寧，為圓葉葡萄中多酚的主要形式[10-12]。葡萄果實(shí)中的多酚大多分布在果皮和種子中，其中果皮中占28%～35%，種子中占60%～70%，果肉中不到10%[1,3,13-14]。本實(shí)驗(yàn)室前期針對(duì)圓葉葡萄中以鞣花酸為主的多酚化合物提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化[15]，隨后對(duì)比了廣西、云南和美國地區(qū)不同品種圓葉葡萄多酚積累差異，發(fā)現(xiàn)廣西地區(qū)圓葉葡萄含有更高的鞣花酸及前體物。其中，果皮中積累更高的鞣花酸衍生物，如鞣花酸和鞣花酸葡萄糖，種子中含有更高的鞣花酸生物合成前體物，如五-O-沒食子酰葡萄糖[12]。

在葡萄生長發(fā)育過程中，果實(shí)中多酚組成和含量發(fā)生著巨大的變化[16-17]。研究表明，葡萄中的多酚從幼果期開始逐步積累，但在轉(zhuǎn)色和成熟過程中，不同類別多酚變化有較大的差異。如歐亞種釀酒葡萄成熟過程中，酚酸和黃烷-3-醇的組成和含量在不同葡萄品種、不同年份之間顯著不同[18]。但對(duì)圓葉葡萄，較多研究分析了美國不同地區(qū)氣候因子和農(nóng)藝學(xué)措施對(duì)不同品種多酚積累的影響，而較少涉及生長發(fā)育期的積累變化[1,19-20]，尤其是當(dāng)圓葉葡萄被引種到我國后，相關(guān)營養(yǎng)品性分析不足。本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)圓葉葡萄果皮發(fā)育過程中的多酚特性進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)其果皮中積累最高比例的鞣花酸及前體物（主要是鞣花酸衍生物），在發(fā)育過程中具有顯著的品種特異性，而在其種子中的積累特性尚不明確。

本研究以栽培于廣西地區(qū)2 個(gè)圓葉葡萄‘Noble’和‘Carlos’和2 個(gè)真葡萄‘赤霞珠’和‘雷司令’為實(shí)驗(yàn)材料，深入分析圓葉葡萄種子發(fā)育過程中多酚積累和變化規(guī)律，為豐富我國葡萄種質(zhì)資源，也為圓葉葡萄營養(yǎng)品性分析、品質(zhì)調(diào)控和農(nóng)藝學(xué)措施改良提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

圓葉葡萄（紅色‘Noble’和白色‘Carlos’）及對(duì)照真葡萄（紅色‘赤霞珠’和白色‘雷司令’）于2013年和2014年連續(xù)兩年采收于廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院葡萄與葡萄酒研究所明陽雙季葡萄基地?！甆oble’和‘Carlos’從幼果期（盛花期后第21天）開始采樣，每兩周1 次至轉(zhuǎn)色，轉(zhuǎn)色后每一周1 次至完熟，共采收9 次；‘赤霞珠’和‘雷司令’在幼果期、轉(zhuǎn)色期和完熟期3 個(gè)時(shí)期采樣，共采收3 次。種子經(jīng)手工分離，預(yù)冷處理，真空冷凍48 h，-80 ℃保存?zhèn)溆?。此外，種子被分離時(shí)，記錄分離前后及冷凍干燥前后質(zhì)量差異，以確定種子干質(zhì)量占鮮質(zhì)量的百分比，結(jié)果以鮮質(zhì)量表示。

乙腈和甲醇（均為色譜純） 美國Thermo Fisher公司；甲酸（色譜純） 美國VWR公司；標(biāo)準(zhǔn)品鞣花酸、沒食子酸、槲皮素、山柰酚、楊梅酮、蘆丁、表兒茶素和咖啡酸（均為色譜純） 美國Sigma-Aldrich公司；五-O-沒食子酰葡萄糖、白藜蘆醇（均為色譜純）北京索萊寶科技有限公司。超純水使用德國Merck微孔協(xié)同水凈化系統(tǒng)獲得。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Triple TOF 4600 MS/MS型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Eksigent ultra LC 110液相系統(tǒng)，Duospray離子源和質(zhì)譜自動(dòng)校準(zhǔn)系統(tǒng)） 美國AB SCIEX公司；LGJ-18冷凍干燥機(jī) 北京四環(huán)科技儀器有限公司；Milli-Q Advantage A10型微孔協(xié)同水凈化系統(tǒng) 德國Merck集團(tuán)；RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；FW-135中草藥粉碎機(jī)（30～200 目） 天津泰斯特有限公司；HMQLVORTEX-5旋渦混合儀 海門市其林貝爾儀器制造有限公司；SB-5200超聲波清洗機(jī) 寧波新芝生物科技有限公司；Allegra X-30R離心機(jī) 美國Beckman Coulter公司；-80 ℃超低溫冰箱 美國Thermo Fisher公司。

1.3 方法

1.3.1 提取預(yù)處理

對(duì)凍干后的葡萄種子，參考文獻(xiàn)[15,21-22]的方法進(jìn)行脫脂處理。葡萄種子凍干后，經(jīng)粉碎機(jī)粉粹，按料液比1∶20（g/mL）加入石油醚，室溫條件下避光浸提12 h，分離上清液，重復(fù)2 次，將殘?jiān)戒佊谂囵B(yǎng)皿上，避光蒸去石油醚。加入砂漿，液氮磨細(xì)，過60 目篩（0.25 mm），-80 ℃保存。

1.3.2 圓葉葡萄多酚的提取

圓葉葡萄種子中多酚提取參考文獻(xiàn)[15,21-22]的方法。稱取0.500 0 g葡萄種子（已脫脂）干樣于50 mL離心管中，按料液比1∶30（g/mL）加入丙酮提取液（丙酮-水-鹽酸，70∶29∶1，V/V），旋渦30 s，置于超聲波清洗機(jī)中，25 ℃、616 W條件下超聲提取28 min，7 600 r/min離心20 min，殘?jiān)貜?fù)提取2 次，合并上清液，35 ℃真空旋蒸除去溶劑，色譜純甲醇（含1%甲酸）定容至5 mL，-80 ℃保存。樣品先經(jīng)0.22 μm纖維素膜過濾，再上超高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（ultra performance liquid chromatography tandem triple quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC Triple TOF-MS/MS）檢測。所有提取及檢測均平行測定3 次。

1.3.3 UPLC-Triple TOF-MS/MS的測定

UPLC-Triple TOF-MS/MS分析條件參考文獻(xiàn)[12]的方法。

色譜條件：ZORBAX SB-C18窄徑柱（2.1 mm×150 mm，5 μm）；柱溫35 ℃；流動(dòng)相A為0.5%甲酸溶液，流動(dòng)相B為乙腈。洗脫梯度：0～1 min，5% B；1～20 min，5%～60% B；20～21 min，60%～95% B；21～30 min，柱子沖洗平衡。流速300 μL/min，進(jìn)樣量10 μL。

質(zhì)譜條件：離子源載氣1和2（空氣）壓力55 psi；幕簾氣（氮?dú)猓毫?0 psi；離子源溫度550 ℃；離子源噴霧電壓-4.5 kV；碰撞能量（-40±10）eV；質(zhì)量掃描范圍100～2 000 Da。

1.3.4 定性及定量分析

定性及定量分析參考文獻(xiàn)[12]的方法。

定性分析：使用Peak View 2.0和Marker View 1.2.1軟件進(jìn)行離線自建多酚數(shù)據(jù)庫及在線Chemspider、Mass Bank和Phenol-Explorer三大數(shù)據(jù)庫檢索、比對(duì)。通過總離子流圖、保留時(shí)間、精確分子質(zhì)量、Triple TOF MS/MS同位素峰及特征碎片離子信息確認(rèn)多酚化合物組成。

定量分析：使用Multi Quant 3.0軟件進(jìn)行定量分析。鞣花酸、五-O-沒食子酰葡萄糖、沒食子酸、表兒茶素、槲皮素、山柰酚、楊梅酮、咖啡酸、蘆丁和白藜蘆醇分別使用各自標(biāo)準(zhǔn)品定量，其他鞣花酸及前體物、黃烷-3-醇、黃酮醇、羥基苯甲酸、羥基肉桂酸和芪類分別以沒食子酸當(dāng)量（gallic acid equivalent，GAE）、（-）表兒茶素當(dāng)量（(－)-epicatechin equivalent，EE）、蘆丁當(dāng)量（rutin equivalent，RE）、GAE、咖啡酸當(dāng)量（caffeic acid equivalent，CAE）和白藜蘆醇當(dāng)量（resveratrol equivalent，REE）定量。樣品運(yùn)行時(shí)每隔5 h運(yùn)行一次質(zhì)譜自動(dòng)校準(zhǔn)，每天重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（線性范圍0～5、0～10 mg/L或5～50 mg/L，R2≥0.999）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

圓葉葡萄中主要多酚化合物前期已有報(bào)道，但其多酚組成尚未被完全闡明，在不同報(bào)道中亦有較大差異[1,10-11,14,23]。整體上來說，圓葉葡萄中多酚根據(jù)其結(jié)構(gòu)被分為不同的類別，從簡單的酚酸（羥基苯甲酸和羥基肉桂酸）到復(fù)雜的單寧（水解和縮合單寧）[10]。在2 個(gè)圓葉葡萄‘Noble’和‘Carlos’及2 個(gè)真葡萄‘赤霞珠’和‘雷司令’發(fā)育期的種子中共檢測到106 種多酚化合物，包括48 種鞣花酸及前體物、24 種黃酮醇、20 種羥基苯甲酸、9 種黃烷-3-醇、3 種芪類和2 種羥基肉桂酸[24]。

2.1 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中鞣花酸及前體物組分分析

圖1 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中總量（A）和各類別（B～D）鞣花酸及前體物分布Fig. 1 Total ellagic acids (A) and different categories (B-D) of ellagic acids and distribution of their precursors in muscadine seeds during berry development

鞣花酸及前體物是圓葉葡萄種子中最豐富的多酚類別，在2 個(gè)品種發(fā)育期樣品中共檢測到48 種，包括13 種鞣花酸衍生物，22 種鞣花單寧和13 種鞣花酸生物合成前體物。而在真葡萄中未檢測到鞣花酸類化合物，僅檢測到5 種鞣花酸生物合成前體物[24]，與前期研究所認(rèn)為的鞣花酸類化合物為圓葉葡萄中特有多酚，非圓葉葡萄果實(shí)中不含鞣花酸類化合物相一致[1,3,11,14,23]。如圖1所示，與真葡萄相比，圓葉葡萄種子中鞣花酸及前體物含量更高[25-26]，其在2013年‘Noble’和‘赤霞珠’中分別為4 518.55～7 835.90 mg GAE/kg和86.53～94.05 mg GAE/kg，前者平均是后者的74.8 倍（圖1A）。此外，其含量具有顯著的年份差異，如紅色‘Noble’和‘赤霞珠’中的鞣花酸及前體物在2013年顯著高于2014年，而在白色‘Carlos’和‘雷司令’中則在兩年間無顯著性差異。

圖2 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中總量（A）和5 種（B～F）沒食子酰葡萄糖分布Fig. 2 Distribution profiles of total (A) galloyl-glucoses and five categories(B-F) of galloyl-glucoses in muscadine seeds during berry development

就組成類別分析，圓葉葡萄種子中鞣花酸生物合成前體物最為豐富，如在2014年‘Carlos’中達(dá)到3 524.67～7 183.30 mg GAE/kg，占鞣花酸及前體物總量的80.6%～94.8%，而鞣花酸類化合物所占比例相對(duì)較低，如鞣花酸衍生物和鞣花單寧分別占3.7%～17.8%和1.2%～1.7%（圖1B～D），與前期研究相一致[12]。五-O-沒食子酰葡萄糖是圓葉葡萄中最主要的鞣花酸生物合成前體物，其次為沒食子酸甲酯、沒食子酸和四-O-沒食子酰葡萄糖；而真葡萄中檢測到的少量鞣花酸生物合成前體物，主要是沒食子酸和沒食子酸甲酯[24]。同時(shí)，圓葉葡萄種子中檢測到5 種沒食子酰葡萄糖（從單-到五-O-）的積累，且隨著沒食子酰數(shù)目的增多，相應(yīng)的沒食子酰葡萄糖含量顯著增加，只有少數(shù)例外，如圖2所示。Pastrana-Bonilla等[1]發(fā)現(xiàn)種植于美國佐治亞州南部的10 個(gè)圓葉葡萄種子中沒食子酸含量平均為69 mg/kg，本實(shí)驗(yàn)測定含量均比其高，可能是因?yàn)槠贩N、地區(qū)和生長發(fā)育期的共同影響。另外，在不同年份間，兩圓葉葡萄種子中鞣花酸生物合成前體物和五-O-沒食子酰葡萄糖平均含量均在2013年大于2014年，而沒食子酸和沒食子酸甲酯則與之相反，在2013年小于2014年；真葡萄‘赤霞珠’中的鞣花酸生物合成前體物、沒食子酸和沒食子酸甲酯在2013年大于2014年，而在‘雷司令’中兩年間無顯著性差異。

多酚化合物的組成和濃度既受遺傳因素影響，在不同成熟期也表現(xiàn)出明顯的差異[17]。前人研究認(rèn)為，種子中鞣花酸生物合成前體物在漿果發(fā)育期顯著增加，轉(zhuǎn)色以后逐漸降低[20,27]。本研究發(fā)現(xiàn)，鞣花酸及前體物含量在不同色澤圓葉葡萄發(fā)育期種子中有較大差異，如在紅色‘Noble’幼果期較高，隨后至轉(zhuǎn)色期逐漸下降，完全轉(zhuǎn)色后再次上升，并至果實(shí)完熟無顯著性差異；而白色‘Carlos’則從幼果期到完全膨大期無顯著性差異，隨后至果實(shí)完熟略有下降，兩年的規(guī)律相同（圖1A）。就鞣花酸及前體物組成來說，兩圓葉葡萄種子中的鞣花酸生物合成前體物、5 種沒食子酰葡萄糖總量及五-O-沒食子酰葡萄糖均與其鞣花酸及前體物的變化趨勢相同，而兩年的鞣花酸衍生物和2014年‘Noble’的鞣花單寧含量則隨著漿果成熟顯著增加，至果實(shí)完熟時(shí)達(dá)到最高（圖1B～D、圖2）。同時(shí)，兩真葡萄種子中的鞣花酸生物合成前體物亦隨著漿果發(fā)育顯著上升，2013年‘赤霞珠’是個(gè)例外，其在漿果發(fā)育過程中無顯著性差異。

2.2 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中黃烷-3-醇組分分析

黃烷-3-醇是圓葉葡萄種子中第二大豐富的多酚化合物，尤其是在白色品種中，如圖3所示。在2014年‘Carlos’中達(dá)到661.73～6 237.34 mg EE/kg；而黃烷-3-醇卻是真葡萄種子中含量最豐富的多酚，亦在白色品種中含量更高，如在2013年‘雷司令’中為605.63～827.49 mg EE/kg，但僅為‘Carlos’中的7.2%（圖3A）。這與Narduzzi等[26]的發(fā)現(xiàn)不同，其認(rèn)為白色真葡萄中由于B環(huán)沒有3′,4′,5′-取代黃酮醇而無法積累黃烷-3-醇，而紅色品種則可以積累黃烷-3-醇，進(jìn)而認(rèn)為在黃烷-3-醇積累上，色澤差異遠(yuǎn)大于品種。就年份來說，圓葉葡萄種子中的黃烷-3-醇在兩年間無顯著性差異，而真葡萄則在2014年顯著低于2013年。此外，圓葉葡萄種子中的黃烷-3-醇，從幼果期開始顯著增加，在轉(zhuǎn)色期時(shí)達(dá)到最高，隨后至果實(shí)完熟時(shí)顯著下降；真葡萄‘雷司令’在2013年的變化情況與圓葉葡萄相似，2014年不受發(fā)育期的影響，而‘赤霞珠’則分別在2013年幼果期和2014年果實(shí)完熟時(shí)含量最高。

真葡萄中的黃烷-3-醇，包括單體，也包括聚合體（二聚體和三聚體）[26]，其在果皮和種子中的顯著差異在于種子中的黃烷-3-醇平均聚合度更低（＜8），同時(shí)含有較高的沒食子?；w[28-30]。在2 個(gè)品種圓葉葡萄種子中共檢測到9種黃烷-3-醇，包括3 種沒食子酰化體、3 種二聚體、1 種單體、1 種糖基化體和1 種三聚體；而在2 個(gè)真葡萄中共檢測到8 種，比圓葉葡萄少1 種二聚體[24]。在這些類別中，圓葉葡萄以單體為主，其次為沒食子酰化體，如在2014年‘Noble’中平均分別占總黃烷-3-醇含量的50.5%和40.1%，而真葡萄中主要是沒食子?；w，其次為單體（圖3B～F）。另外，糖基化體未在紅色‘Noble’中檢測到，三聚體僅在白色品種中檢測到，包括‘Carlos’和‘雷司令’。就年份來說，圓葉葡萄中的沒食子?；w和二聚體在2014年顯著大于2013年，而在真葡萄中則2014年顯著小于2013年，同時(shí)，‘赤霞珠’中的單體也在2014年小于2013年。此外，在果實(shí)發(fā)育過程中，除2013年‘Carlos’種子中糖基化體在果實(shí)完熟時(shí)含量顯著最高外，圓葉葡萄中其他類別黃烷-3-醇與總黃烷-3-醇的變化情況類似，均在轉(zhuǎn)色時(shí)含量最高。

就個(gè)體黃烷-3-醇而言，真葡萄種子中只存在原花青素類（亞基為兒茶素和表兒茶素）[28-30]。本研究發(fā)現(xiàn)圓葉葡萄種子中的黃烷-3-醇同時(shí)包括原花青素和原花翠素類（亞基為表沒食子兒茶素），其中表兒茶酸最為豐富，其次為表兒茶酰-3-O-沒食子酸和4-甲基-表沒食子兒茶素沒食子酸酯[24]。Pastrana-Bonilla等[1]發(fā)現(xiàn)美國佐治亞州南部地區(qū)成熟的圓葉葡萄‘Carlos’種子中的表兒茶素含量為11 892 mg/kg mf，而在廣西南寧地區(qū)兩年平均為2 831.20 mg/kg mf，表明其含量具有顯著的地區(qū)差異。

圖3 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中總（A）和各類別（B～F）黃烷-3-醇分布Fig. 3 Distribution profiles of total flavan-3-ols (A) and different categories(B-F) of flavan-3-ols in muscadine seeds during berry development

2.3 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中黃酮醇組分分析

黃酮醇如槲皮素、山柰酚和楊梅酮主要存在于圓葉葡萄果皮中[3,31]，但其含量與真葡萄相比較低[12,23,32]。如圖4所示，黃酮醇亦存在于圓葉葡萄種子中，但其含量與真葡萄種子相比無顯著性差異，如圖4A所示。同時(shí)，其含量表現(xiàn)出明顯的品種和年份差異性，如在白色品種‘Carlos’中2014年（81.12～473.40 mg RE/kg）顯著高于2013年（67.91～265.15 mg RE/kg），‘雷司令’的變化情況與‘Carlos’相同，而兩紅色品種則在兩年間無顯著性差異。在漿果發(fā)育過程中，圓葉葡萄種子中的黃酮醇含量在幼果期較低，完全膨大后顯著上升，轉(zhuǎn)色完全時(shí)達(dá)到最高，隨后至果實(shí)完熟顯著下降；真葡萄中則在果實(shí)完熟時(shí)含量最高（2013年‘赤霞珠’除外）。

在圓葉葡萄中檢測到23 種黃酮醇，有8 種槲皮素類、6 種楊梅酮類、6 種山柰酚類、2 種異鼠李素類和1 種丁香亭衍生物；真葡萄中共檢測到21 種，缺少1 種楊梅酮類（雙脫氫楊梅酮-3-O-鼠李糖苷）和1 種山柰酚衍生物（山柰酚-乙?；?己糖苷）。槲皮素衍生物（主要是槲皮素-3-O-半乳糖苷和雙脫氫槲皮素）均是圓葉葡萄和真葡萄種子中含量最豐富的類型，其在漿果發(fā)育過程中的變化與各自黃酮醇變化趨勢相同（圖4B～F）。其次，圓葉葡萄中為楊梅酮衍生物，且除2013年‘Noble’在幼果期顯著較高外，在其他發(fā)育期均無顯著性差異；而真葡萄中為山柰酚衍生物，且隨著漿果成熟含量顯著上升（2013年‘赤霞珠’除外）。此外，兩圓葉葡萄中楊梅酮衍生物在2013年幼果期顯著高于2014年，而山柰酚和異鼠李素衍生物則在2013年轉(zhuǎn)色至完熟時(shí)顯著低于2014年。

2.4 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中羥基苯甲酸組分分析

圖5 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中羥基苯甲酸分布Fig. 5 Distribution profiles of hydroxy benzoic acid in muscadine seeds during berry development

如圖5所示，圓葉葡萄種子中的羥基苯甲酸含量顯著高于其在真葡萄中的含量，如在2014年‘Noble’和‘赤霞珠’種子中分別為50.70～618.08 mg GAE/kg和7.16～17.48 mg GAE/kg。同時(shí)，羥基苯甲酸含量具有顯著的年份差異，如在圓葉葡萄中2014年顯著高于2013年，而真葡萄中則剛好相反。就羥基苯甲酸組成來說，短葉蘇木酚酸和雙羥基苯甲酸是圓葉葡萄種子中最主要的類型，而真葡萄種子中則主要為雙和單羥基苯甲酸[24]。此外，圓葉葡萄種子中的羥基苯甲酸在幼果期較低，漿果膨大后顯著升高，兩年的變化情況相同。真葡萄在2014年的變化情況與圓葉葡萄相同，而在2013年則主要積累在幼果期。

2.5 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中羥基肉桂酸組分分析

圓葉葡萄種子中的羥基肉桂酸含量較低，且主要積累在圓葉葡萄的幼果期，如圖6所示。在2014年盛花期第21天的‘Noble’和‘Carlos’中分別為3.48 mg CAE/kg和5.31 mg CAE/kg，而2013年更低，在兩品種中分別為1.89 mg CAE/kg和0 mg CAE/kg。此外，其在2014年轉(zhuǎn)色期前也有一定的積累，如在盛花期第70天時(shí)的‘Noble’和第77天時(shí)的‘Carlos’中含量分別為0.62 mg CAE/kg和2.15 mg CAE/kg。菊苣酸和對(duì)-香豆酰-4-O-葡萄糖是圓葉葡萄中僅有的類型，而在2 個(gè)真葡萄品種中均未檢測到[24]。

圖6 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中羥基肉桂酸分布Fig. 6 Distribution profiles of hydroxy cinnamic acid in muscadine seeds during berry development

2.6 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中芪類組分分析

圖7 圓葉葡萄種子發(fā)育過程中芪類分布Fig. 7 Distribution profiles of stilbene in muscadine seeds during berry development

如圖7所示，痕量和少量的芪類化合物僅在2013年圓葉葡萄種子中檢測到，其在‘Noble’和‘Carlos’中的含量分別為0～0.77 mg REE/kg和0～0.25 mg REE/kg。白藜蘆醇是種子中最主要的類型[24]。另外，2013年‘Noble’中的芪類化合物，隨著果實(shí)發(fā)育含量顯著增加。而在真葡萄種子中，未檢測到芪類化合物的積累。

3 結(jié) 論

本研究以栽培于廣西南寧地區(qū)的2 個(gè)圓葉葡萄‘Noble’和‘Carlos’和2 個(gè)真葡萄‘赤霞珠’和‘雷司令’為實(shí)驗(yàn)材料，分析了圓葉葡萄種子發(fā)育過程中多酚類化合物的組成和積累規(guī)律。

在4 個(gè)葡萄品種發(fā)育期的種子樣品中共檢測到106 種多酚，包括48 種鞣花酸及前體物、24 種黃酮醇、20 種羥基苯甲酸、9 種黃烷-3-醇、3 種芪類和2 種羥基肉桂酸。

鞣花酸及前體物（主要是前體物）和黃烷-3-醇（主要是沒食子?；w和單體）分別是圓葉葡萄和真葡萄種子中最主要的多酚類型，但在不同年份和不同品種間具有較大差異。

前體物在圓葉葡萄‘Noble’幼果期種子較高，然后逐漸下降，完全轉(zhuǎn)色后再次上升，‘Carlos’在轉(zhuǎn)色前種子中較高，隨后略有下降。黃烷-3-醇在真葡萄‘雷司令’種子中2013年隨著漿果發(fā)育顯著升高，轉(zhuǎn)色時(shí)含量達(dá)到最高，隨后有所下降，2014年不受發(fā)育期的影響；‘赤霞珠’則分別在2013年幼果期和2014年果實(shí)完熟時(shí)種子中含量最高。

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