緩釋載藥微球在慢性牙周炎中的應(yīng)用研究進(jìn)展

盧靜一 楊軍星 王 雷

慢性牙周炎是是以牙周結(jié)締組織破壞和牙槽骨吸收為特點的一種慢性炎癥性疾病，其發(fā)病率高達(dá)80%以上，是成人失牙的主要原因。雖然口腔衛(wèi)生指導(dǎo)、齦上潔治術(shù)、齦下刮治術(shù)和根面平整（scaling and root planing，SRP）等是牙周病最基本而有效的治療方法，但受到牙齒解剖條件如根分叉病變、牙周袋深度等影響[1，2]，單純SRP常不能徹底消除菌斑微生物，故局部藥物治療成為慢性牙周炎重要的輔助治療手段之一。為了使局部牙周袋內(nèi)藥物濃度始終穩(wěn)定保持在有效濃度范圍內(nèi)，且維持更長的作用時間，控釋給藥的方式較為理想。微球制劑是目前常用的控釋給藥方法，用于包載小分子藥物、多肽蛋白質(zhì)等生物大分子藥物以及疫苗等。藥物微球化后，能對藥物進(jìn)行控釋，提高藥物的穩(wěn)定性和利用率，降低副作用，且由醫(yī)師給藥，提高了患者依從性，減少給藥次數(shù)。作為一種新型的藥物載體，緩釋載藥微球具有極大的發(fā)展?jié)摿?，現(xiàn)就其在慢性牙周炎治療的應(yīng)用研究進(jìn)展綜述如下。

一、載藥微球材料

根據(jù)載藥微球材料的生物學(xué)性質(zhì)可分為兩類：非生物可降解的載體材料，如聚丙烯、乙基纖維素和聚苯乙烯等；生物可降解的載體材料，包括天然高分子材料如明膠、淀粉、白蛋類、殼聚糖、海藻酸鈉和合成高分子材料如聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物等。其中生物可降解的載體材料因其安全、無毒，在輔助治療慢性牙周炎中受到研究者的廣泛關(guān)注。

1.殼聚糖（chitosan）

殼聚糖是天然聚陽離子堿性多糖，是自然界廣泛存在的甲殼素脫乙?；漠a(chǎn)物。無毒，具有良好的生物相容性、生物可降解性和黏膜黏性，并具有抗菌消炎、促進(jìn)傷口愈合、抗酸、降血脂等多重作用，被廣泛應(yīng)用于藥物控釋系統(tǒng)、醫(yī)用敷料[3]、血液抗凝劑、軟骨和骨組織工程支架材料[4]等。殼聚糖不溶于水，但可溶于醋酸、酒石酸、檸檬酸的稀釋酸溶液，其基團(tuán)上的陽離子可與黏膜表面、牙菌斑生物膜表面的陰離子反應(yīng)，因此在牙周袋酸性環(huán)境中對黏膜、牙菌斑生物膜表面具有選擇依附性和電中和性[5]。另有學(xué)者體外研究發(fā)現(xiàn)5mg/ml殼聚糖抑制牙齦卟啉單胞菌和伴放線聚集桿菌的生長，50μg/ml殼聚糖通過影響C-Jun氨基末端激酶通路調(diào)節(jié)PE2水平，進(jìn)而表現(xiàn)出其抗炎特性[6]。

2.海藻酸鈉（alginate）

海藻酸鈉是從海帶或海藻中提取出的一種水溶性陰離子多聚糖，是由古洛糖醛酸（G段）與其立體異構(gòu)體甘露糖醛酸（M段）2種結(jié)構(gòu)單元以三種方式（MM段/GG段/MG段）通過α-（1，4）糖苷鍵鏈接而成的一種線性嵌段共聚物[7]。當(dāng)海藻酸鈉與水接觸時，能夠形成具有粘附性的溶液，由此可以用來制備微球[8]。由海藻酸鈉形成的凝膠具有PH敏感性，在酸性環(huán)境中幾乎不溶脹，而在弱堿環(huán)境下能夠發(fā)生溶脹，并且溶脹到最大溶脹比后開始溶解，這更有利于封裝在內(nèi)部的藥物釋放出來。

3.聚乳酸（polylactic acid，PLA）

PLA由植物發(fā)酵產(chǎn)物乳酸在特定條件下縮水聚合而成，易溶于氯仿、丙酮、乙腈等有機(jī)溶劑，在水、乙醇、乙酸乙酯及烷類溶劑中不溶。無毒無刺激性，具有良好的生物相容性、生物可降解性，在生物體內(nèi)經(jīng)過水解或酯解，最終形成二氧化碳和水。隨著科學(xué)不斷發(fā)展，發(fā)現(xiàn)盡管PLA有許多優(yōu)點，但降解速度慢，藥物釋放不易控制[9]，因此，研究其微球的制備方法以改善其性能也成為很熱門的課題。

4.聚乳酸 -羥乙酸共聚物（poly lactic-co-glycolic acid，PLGA）

PLGA由乳酸和羥乙酸聚合而來，可以通過改變兩單體的比例和聚合條件來調(diào)節(jié)聚合物在體內(nèi)的降解速度，從而控制所載藥物的釋放速度。PLGA具有如下優(yōu)良特性[10]：①生物相容性和生物可降解性；②易溶于三氯甲烷、二氯甲烷等有機(jī)溶劑，容易制備；③通過美國FDA檢查認(rèn)證，美國藥典將其收錄可以作藥用輔料；④緩控釋藥物；⑤易于調(diào)節(jié)表面特性，從而更好地與藥物結(jié)合；⑥有良好的熱塑性；⑦能夠靶向結(jié)合到特定的組織和細(xì)胞。采用PLGA作為骨架材料包載多肽、蛋白質(zhì)藥物制成藥物緩釋微球，成為制劑研究的熱點。

5.明膠（gelatin）

明膠是半透明、易碎、并且無色無味膠原蛋白，通常從魚、豬、牛的皮、骨骼或者結(jié)締組織中提取出來，作為膠凝劑廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥以及化妝品制造等領(lǐng)域。明膠不溶于冷水．加冷水后緩慢地吸水、膨脹、發(fā)生軟化，最多可吸收5倍甚至10倍重量的水；在熱水中溶解，冷卻后溶液即凝結(jié)成膠塊。明膠不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，但溶于乙酸和甘油，具有凝膠性、持水性、成膜性等特點，并且價格便宜，載藥量高，組織相容性良好，被廣泛用于生物醫(yī)學(xué)材料。

二、微球的制備

緩釋載藥微球的常用制備方法主要有四種：噴霧干燥法、乳化-溶劑揮發(fā)法、乳化交聯(lián)法、相分離法。

1.噴霧干燥法

噴霧干燥法是將藥物加入到載體材料中攪拌分散均勻，再通過霧化器將制成的分散液快速霧化并噴入干燥、高溫的惰性氣體中，有機(jī)溶劑在高溫下迅速蒸發(fā)，被霧化器分散的液滴快速凝固收縮、完成、干燥。制取微球時需要控制好溶劑與溶質(zhì)的比例、溶液粘度、噴霧和噴氣的速率、溫度等。

該方法具有操作簡單、包封率高、制得微球粒徑均勻、一步成球等特點，不需要使用大量有機(jī)試劑，受高聚物性質(zhì)影響小，微球包封率較高，批間重現(xiàn)性好。但是制備過程中所需的溫度較高（＞100℃），不適于多肽類等對溫度敏感的藥物[11]。

2.乳化交聯(lián)法

乳化交聯(lián)法是經(jīng)典制備殼聚糖微球的方法。藥物與高分子材料連續(xù)攪拌形成穩(wěn)定的乳液后，加入交聯(lián)劑制得微球，微球逐漸固化，經(jīng)過過濾、洗滌和干燥等操作得到最終的載藥微球。交聯(lián)劑中的活性基團(tuán)醛基可以和高分子材料的氨基或醇基發(fā)生縮合反應(yīng)，常見的交聯(lián)劑包括陰離子交聯(lián)劑、甲醛、戊二醛等。根據(jù)乳化和交聯(lián)方式不同可以將乳化交聯(lián)法分為乳化離子交聯(lián)法、乳化化學(xué)交聯(lián)法和復(fù)相乳化法。

該制備方法簡單，易于操作，缺點是藥物釋放率受交聯(lián)度影響很大[12]，且微球在體內(nèi)降解后釋放的少量交聯(lián)劑是否對人體有害仍受質(zhì)疑。

3.乳化-溶劑揮發(fā)法

乳化-溶劑揮發(fā)法是應(yīng)用最廣泛的微球制備方法，是將互不相溶的兩相通過攪拌或超聲制備成乳劑，再通過不斷攪拌使有機(jī)溶劑揮發(fā)，最終乳滴逐漸變硬制成微球的方法，此法是制備PLA、PLGA微球最常用的方法。其操作簡單，所制微球成球率高、球形圓整、表面光滑。乳化法可簡單分為單乳法（包括W/O乳化法、O/W乳化法）、復(fù)乳法（W/O/W乳化法）。

該法制備微球需要控制好以下幾點：聚合物濃度、溶劑的性質(zhì)、攪拌方式、攪拌速率、反應(yīng)時間、內(nèi)外分散相溶劑及體積比等。該方法可以避免過高溫度和可能引起相分離的凝聚劑，得到的微球粒徑可在納米范圍內(nèi)。但是由于溶劑蒸發(fā)可能導(dǎo)致藥物泄漏在外相中，所以會使包封率與實際包封率有較大誤差。

4.相分離法

相分離法是利用聚合物的物理化學(xué)性質(zhì)，在含有藥物和聚合物的混合液中加入對聚合物是非溶媒的液體，使聚合物的溶解度降低，聚合物包裹著藥物從混合液中凝聚出來，在混合液中產(chǎn)生一個新相（凝聚相）的過程。此法分為四類：單凝聚法、復(fù)凝聚法、溶劑-非溶劑法、溫度改變法。

相分離的過程是十分復(fù)雜的，投料比、攪拌方式、攪拌速率、絮凝劑的加入時間、加入量等均對微球的載藥量和形態(tài)產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響藥物的釋放特性[14]。該法操作簡單，易于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，制得微球球形圓整，缺點是載藥量低，微球較大，容易發(fā)生粘連。

三、緩釋載藥微球治療慢性牙周炎

慢性牙周炎是發(fā)生在口腔中最常見的疾病之一，菌斑中的細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物是牙周炎發(fā)病的始動因子，宿主對其釋放的毒力因子產(chǎn)生的急性炎癥反應(yīng)直接導(dǎo)致牙齦組織和牙槽骨的破壞?？紤]到牙周炎的病因和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，主要有三種不同的治療方法。①清除菌斑：是牙周炎治療的基礎(chǔ)；②調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)，其目的是抑制破壞性的炎癥反應(yīng)；③牙周組織再生治療。藥物治療是牙周病輔助治療的重要方面，可有效控制慢性牙周炎的進(jìn)展，近年來國內(nèi)外學(xué)者對載藥微球制劑治療慢性牙周炎進(jìn)行了大量研究。

1.載四環(huán)素族藥物微球

四環(huán)素族藥物是抑制牙周致病菌最重要的藥物之一。其在慢性牙周炎中的作用機(jī)制主要包括①抗菌作用；②抑制膠原酶及其他基質(zhì)金屬蛋白酶的活性，從而抑制牙周組織破壞；③促進(jìn)牙周膜細(xì)胞再生，促進(jìn)牙齦成纖維細(xì)胞和牙骨膜成纖維細(xì)胞中的蛋白、膠原合成。

Yao W[14]等采用復(fù)乳/溶劑揮發(fā)法制備載米諾環(huán)素的聚乙二醇-聚乳酸納米球（NP-MIN），粒徑大小98±12nm，載藥率和包封率分別為9.3%±0.2%和46.5%±0.9%。具有顯著的緩慢控釋特性，與鹽酸米諾環(huán)素軟膏（別名：派力奧）相比有效藥物濃度持續(xù)時間長達(dá)12天，顯著緩解了牙周炎的癥狀。許多學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)與單純SRP相比，應(yīng)用米諾環(huán)素微球作為輔助治療時，牙周袋探診深度（PPD）、探診出血（BOP）、附著水平（CAL）明顯改善，紅色微生物復(fù)合體數(shù)量明顯減少，效果優(yōu)于前者[15～19]。然而Killeen AC[20]實驗研究得出結(jié)論是米諾環(huán)素微球作為輔助治療，上述參數(shù)明顯改善，但與單純SRP治療相比無統(tǒng)計學(xué)差別，與Tabenski L[21]的研究結(jié)論相同。Oringer RJ[22]在研究米諾環(huán)素微球?qū)俏諛?biāo)記物的影響中指出，局部應(yīng)用米諾環(huán)素微球一個月后齦溝液中IL-1水平明顯下降，Killeen AC[20]亦得出此結(jié)論，但長期效果有待研究。

Moura LA[23]等通過復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備多西環(huán)素PLGA微球，獲得微球載藥量為16%，包封率達(dá)到80%，平均粒徑小于1μm，多西環(huán)素從該微球中緩慢穩(wěn)定釋放時間長達(dá)15天。Rao SK[24]研究多西環(huán)素微球藥效學(xué)實驗中指出，PPD從治療初期到6月減少大約2mm；CAL從治療初期到6月改善0.9mm，與對照組（單純SRP）相比臨床參數(shù)明顯改善，其差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。除1到3月以外的其余時間段，牙齦卟啉單胞菌數(shù)目明顯減少。

2.載硝基咪唑類藥物微球

甲硝唑是一種高效廉價的、能殺滅專性厭氧菌的藥物，可有效殺滅牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌、螺旋體及消化鏈球菌等，對由這些細(xì)菌引起的牙周炎具有良好的治療效果。Pichayakorn W以殼聚糖為載體用乳化交聯(lián)法制備甲硝唑微球，通過各種手段對不同制備條件下制得的微球包封率、粒徑大小、表面形態(tài)等性質(zhì)進(jìn)行評價，得出最佳組合為：5%戊二醛，30min交聯(lián)時間，投藥比1：1。所制備的微球球形圓整，有良好的黏膜粘性，平均粒徑大小為42.82μm，包封率為59.40%，具有明顯的緩釋作用，由該微球組成的凝膠其釋藥性能優(yōu)于纖維[25]。

奧硝唑和培氟沙星分別對厭氧菌和兼性厭氧菌抑菌效果明顯，兩者聯(lián)合使用可發(fā)揮高效抑菌效果。劉銳[26]采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法制備復(fù)方奧硝唑/培氟沙星PLGA微球，制出微球的成球形良好，光滑均勻，粒徑大小為21.60±6.41μm，奧硝唑和培氟沙星的包封率平均為68.15%±0.4%和64.07%±0.37%，載藥量分別為6.18%±0.15%和3.95%±0.21%。24h后奧硝唑在體外釋放率達(dá)25%左右，培氟沙星則達(dá)到35%左右，存在一定的“突釋效應(yīng)”。隨時間推移，微球釋放藥物速率基本保持穩(wěn)定，到20天藥物基本釋放完畢。有學(xué)者在PLGA材料外再包裹一層殼聚糖，在很大程度上抑制了“突釋效應(yīng)”，但這種符合載體材料不適合于注射劑型使用[27]?！巴会屝?yīng)”并不是沒有任何利用價值，適當(dāng)?shù)耐会寱鸬健笆讋┘颖丁钡淖饔?，一定程度上對?xì)菌的抑制效果產(chǎn)生了積極的促進(jìn)作用[28]。

3.載他汀類藥物微球

他汀類藥物是一類降脂藥物，具有抑制3-羥基-甲基戊二酰輔酶A還原酶的作用，主要應(yīng)用于高膽固醇的治療。此外還具有抗炎、抗氧化的特性，可通過增加骨細(xì)胞中BMp-2的表達(dá)刺激骨組織新生，故為牙周炎的治療提供了一個新的方向[29]。

Ho MH[30]采用o/w乳化法制備載洛伐他汀的PLGA微球，藥物/PLGA比為0.032時制備的微球3天后突釋70%，7天后藥物釋放量為97%。體外細(xì)胞實驗顯示應(yīng)用此微球，細(xì)胞的堿性磷酸酶（ALP）活性顯著增加，特別在第3、5、7、9天時。洛伐他?。?μg/ml時細(xì)胞ALP活性明顯下降甚至低于原來水平，用PLGA包載洛伐他汀則不會表現(xiàn)出此細(xì)胞毒性。盡管促進(jìn)骨再生的最適藥物濃度不確定，但該微球在骨缺損治療中有很大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

考慮到控制炎癥和促進(jìn)骨再生是治療牙周病的重要途徑，Lee BS[31]等人采用復(fù)乳法制備載洛伐他汀、四環(huán)素的PLGA-殼聚糖制成納米粒，平均粒徑為111.5nm，在投藥比為0.1%、0.3%、0.5%的微球中洛伐他汀的包封率分別為69.1±4.0%、69.8±4.6%、70.3±4.3%，四環(huán)素的包封率分別為10.6±2.7%、22.4±3.1%、32.1±2.6%，微球經(jīng)過起初的突釋后緩慢釋放藥物時間長達(dá)14天，洛伐他汀的控釋較四環(huán)素稍晚，可持續(xù)21天之久。利用微型CT對新生骨定量分析并測量其體積，結(jié)果表明該微球具有良好的骨再生潛能。

4.載多肽和蛋白質(zhì)類藥物微球

多肽和蛋白質(zhì)類藥物已逐漸成為一類十分重要的治療用藥，但是其存在不少缺陷：如生物半衰期短，易受到酶降解影響，難以通過生物屏障等。因此制備其緩控釋制劑對改善生物大分子的臨床應(yīng)用具有顯著優(yōu)勢。

（1）調(diào)節(jié)宿主免疫：研究表明 25（OH）D3可被不同的牙周細(xì)胞羥基化，通過與維生素D受體（VDR）結(jié)合行使生物功能。25（OH）D3可抑制炎癥相關(guān)信號通路NF-kB、STAT3的表達(dá)，從而抑制過度炎癥反應(yīng)和牙周破壞。Li H等[32]采用乳化溶劑揮發(fā)法制備出載25（OH）D3的PLA微球，微球粒徑為（42.3±5.8）μm，載藥量和包封率分別為（15.8±0.5）%和（79.2±1.9）%，藥物緩慢釋放持續(xù)時間長達(dá)70天。經(jīng)體外模擬糖尿病性牙周炎環(huán)境和小鼠模型研究，發(fā)現(xiàn)25（OH）D3-PLA微球能夠抑制糖尿病型牙周炎的炎癥反應(yīng)，為其提供了有效的治療手段。

Glowacki AJ[33]以 CCL22（趨化因子C-C-基元配體22）為藥劑制備了PLGA微球，體內(nèi)、體外研究表明該微球可有效促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）聚集，Treg細(xì)胞能影響免疫環(huán)境，維持內(nèi)環(huán)境平衡。微球緩慢釋放CCL22，有效的減少了牙周組織中促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生以及軟硬組織的破壞。

（2）促進(jìn)牙周組織再生：多種不同的生長因子可促進(jìn)牙周組織再生，例如骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMPs）、轉(zhuǎn)化生長因子、纖維母細(xì)胞生長因子等。Soran Z等[34]先用電子噴霧技術(shù)制備BMP-6的明膠微球，再通過冷凍干燥法在其外包裹一層殼聚糖支架，制得微球成球性良好，平均粒徑為360μm，控釋時間為6天。體外細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果表明由于BMPs的加入，骨髓源性大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨細(xì)胞分化功能明顯提高。

Chen FM等[35]采用乳化-交聯(lián)法制備載釉質(zhì)基質(zhì)蛋白-右旋糖酐PLGA微球（EMPs-dex-MPs），微球平均粒徑為25μm，EMPs載藥量為32.8±1.2%，包封率為78.9±1.0%，第20天釋放總藥量的80%。體外實驗研究表明該微球明顯提高人牙周膜細(xì)胞的分化和堿性磷酸酶活性，作用時間≥12日。

四、小結(jié)

近年來微球制劑已經(jīng)成為藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)和生產(chǎn)企業(yè)的熱點劑型，其載藥種類多樣，載藥方式各異，在牙周炎的抗炎治療及牙周組織再生治療中均能取得了一定的療效，但大多為體外模擬實驗研究?？偟膩碚f，作為口腔衛(wèi)生指導(dǎo)、齦上潔治、齦下刮治和根面平整術(shù)的輔助治療，局部應(yīng)用緩釋載藥微球比單純機(jī)械性菌斑控制效果更好。然而微球制備方法較復(fù)雜，其理化特性如成球性、包封率、載藥量等易受影響，并引發(fā)突釋效應(yīng)，牙周炎的治療效果易受影響。因此，今后還需逐步改良現(xiàn)有微球和研發(fā)新型微球，進(jìn)一步干預(yù)臨床試驗研究緩釋載藥微球長期治療效果，明確其在牙周炎治療中的應(yīng)用價值。

參考文獻(xiàn)

1 Moura LA，Ribeiro FV，Aiello TB，et al.Characterization of the release profile of doxycycline by PLGA microspheres adjunct to non-surgical periodontal therapy.J Biomater Sci Polym Ed，2015，26（10）：573-584.

2 Greenstein G，Rethman MP.Advantages and limitations of nonsurgical periodontal therapy in the management of chronic periodontitis.Alpha Omegan，2000，93（4）：34-42.

3 Hurler J，Skalko-Basnet N.Potentials of chitosan-based delivery systems in wound therapy：bioadhesion study.J Funct Biomater，2012，3（1）：37-48.

4 Kim IY，Seo SJ，Moon HS，et al.Chitosan and its derivatives for tissue engineering applications.Biotechnol Adv，2008，26（1）：1-21.

5 Ahmed TA，Aljaeid BM.Preparation，characterization，and potential application of chitosan，chitosan derivatives，and chitosan metal nanoparticles in pharmaceutical drug delivery.Drug Des Devel Ther，2016，10（1）：483-507.

6 Arancibia R，Maturana C，Silva D，et al.Effects of chitosan particles in periodontal pathogens and gingivalfibroblasts.J Dent Res，2013，92（8）：740-745.

7 Al-Qadi S，Grenha A，Carrión-Recio D，et al.Microencapsulated chitosan nanoparticles for pulmonary protein delivery：in vivo evaluation of insulin-loaded formulations.JControlRelease，2012，157（3）：383-390.

8 Fu S，Buckner IS，Block LH.Inter-grade and inter-batch variability of sodium alginate used in alginate-based matrix tablets.AAPS Pharm SciTech，2014，15（5）：1128-1137.

9 Kang J，de Brito Bezerra B，Pacios S，et al.Aggregatibacter antinomycetemcomitans infection enhances apoptosis in vivo through a caspase-3-dependentmechanism in experimental periodontitis.Infect Immun，2012，80（6）：2247-2256.

10 DanhierF， Ansorena E， Silva JM， etal.PLGA-based nanoparticles：An overview of biomedical applications.J Control Release，2012，161（2）：505-522.

11 姬振行，安靜，王德松，等.殼聚糖微球的制備與應(yīng)用.材料導(dǎo)報， 2010，24（13）：128-132.

12 Yuan Y， Chesnutt BM，Utturkar G，et al.The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release.Carbohydrate Polymers，2007，68（3）：561-567.

13 Park SJ，Kim SH.Preparation and characterization of biodegradable poly（l-lactide）/poly（ethylene glycol） microcapsules containing erythromycin by emulsion solvent evaporation technique.J Colloid Interface Sci，2004，271（2）：336-341.

14 Yao W，Xu P，Pang Z，et al.Local delivery of minocycline-loaded PEG-PLA nanoparticles for the enhanced treatment of periodontitis in dogs.IntJ Nanomedicine， 2014， 9（8）：3963-3970.

15 Bland PS，Goodson JM，Gunsolley JC，et al.Association of antimicrobialand clinicalefficacy：periodontitistherapy with minocycline microspheres.J Int Acad Periodontol， 2010， 12（1）：11-9.

16 Paquette DW.Minocycline microspheres：a complementary medical-mechanical model for the treatment of chronic periodontitis.Compend Contin Educ Dent， 2002， 23（5）：15-21.

17 Williams RC，Paquette DW，Offenbacher S，et al.Treatment of periodontitis by local administration of minocycline microspheres：a controlled trial.J Periodontol，2001，72（11）：1535-1544.

18 Goodson JM，Gunsolley JC，Grossi SG，et al.Minocycline HCl microspheres reduce red-complex bacteria in periodontal disease therapy.J Periodontol，2007，78（8）：1568-1579.

19 Greenstein G.The efficacy of minocycline microspheres in the treatment of chronic periodontitis：statistical vs clinical significance.Compend Contin Educ Dent， 2003， 24（2）：121-6，128，130 passim，quiz 133.

20 Killeen AC，Harn JA，Erickson LM，et al.Local minocycline effect on inflammation and clinical attachment during periodontal maintenance：randomized clinical trial.J Periodontol，2016，87（10）：1149-1157.

21 TabenskiL， ModerD， Cieplik F， etal.Antimicrobial photodynamic therapy vs.localminocycline in addition to non-surgical therapy of deep periodontal pockets：a controlled randomized clinical trial.Clin Oral Investig，2016 Dec 1.DOI：10.1007/s00784-016-2018-6.

22 Oringer RJ，Al-Shammari KF，Aldredge WA，et al.Effect of locally delivered minocycline microspheres on markers of bone resorption.J Periodontol，2002，73（8）：835-842.

23 Moura LA，Ribeiro FV，Aiello TB，et al.Characterization of the release profile of doxycycline by PLGA microspheres adjunct to non-surgical periodontal therapy.J Biomater Sci Polym Ed，2015，26（10）：573-584.

24 Rao SK，Setty S，Acharya AB，et al.Efficacy of locally-delivered doxycycline microspheres in chronic localized periodontitis and on Porphyromonas gingivalis.J Investig Clin Dent，2012，3（2）：128-134.

25 Pichayakorn W，Boonme P.Evaluation of cross-linked chitosan microparticles containing metronidazole for periodontitis treatment.Mater Sci Eng C Mater Biol Appl，2013， 33（3）：1197-1202.

26 劉銳.復(fù)方奧硝唑/培氟沙星PLGA緩釋微球的制備及對慢性牙周炎的藥效學(xué)研究.第三軍醫(yī)大學(xué)，2012.

27 Manca ML，Loy G，Zaru M，et al.Release of rifampicin from chitosan，PLGA and chitosan-coated PLGA microparticles.Colloids Surf B Biointerfaces，2008，67（2）：166-170.

28 Yoo JY，Kim JM，Khang G，et al.Effect of lactide/glycolide monomers on release behaviors ofgentamicin sulfate-loaded PLGA discs.Int J Pharm，2004，276（1-2）：1-9.

29 Prerna Kataria，Jasmine Kaur，Eram Parvez，et al.Statins：the paradigm shift in periodontal regeneration.SRM J Res Dent Sci，2014，5（1）：26-30.

30 Ho MH，Chiang CP，Liu YF，et al.Highly efficient release of lovastatin from poly （lactic-co-glycolic acid） nanoparticles enhances bone repair in rats.J Orthop Res，2011，29（10）：1504-1510.

31 Lee BS， Lee CC， Wang YP， et al.Controlled-release of tetracycline and lovastatin by poly（D，L-lactide-co-glycolide acid）-chitosan nanoparticles enhances periodontal regeneration in dogs.Int J Nanomedicine，2016，11（1）：285-297.

32 Li H，Li B， Wang Q，et al.Attenuation of inflammatory response by 25- hydroxyvitamin D3-loaded polylactic acid microspheres in treatment of periodontitis in diabetic rats.Chin J Dent Res，2014，17（2）：91-98.

33 Glowacki AJ，Yoshizawa S，Jhunjhunwala S，et al.Prevention ofinflammation-mediated bone lossin murine and canine periodontal disease via recruitment of regulatory lymphocytes.Proc Natl Acad Sci U S A，2013，110（46）：18525-18530.

34 Soran Z，Aydln RS，Gümüsderelio?lu M.Chitosan scaffolds with BMP-6 loaded alginate microspheres for periodontal tissue engineering.J Microencapsul，2012，29（8）：770-780.

35 Chen FM，Wu ZF，Jin Y，et al.Preparation of enamel matrix proteins controlled release microspheres and theirbiological effects on the proliferation and differentiation of human periodontal ligament cells in vitro.Hua Xi Kou Qiang Yi Xue Za Zhi，2005，23（6）：529-533.