茴香提取液對(duì)酒精中毒小鼠的解酒及腦組織抗氧化作用的研究

韓光順+梁華益+焦雯

【摘要】 目的：探究茴香提取液對(duì)酒精中毒小鼠的解酒及腦組織抗氧化的作用。方法：采用56度白酒按0.15 mL/10 g體重給予一次性灌胃法建立小鼠醉酒模型，取50只小鼠，每組10只為清醉解酒藥組、模型組、茴香低劑量組、茴香中劑量組和茴香高劑量組，以茴香高、中、低三種劑量分別進(jìn)行預(yù)防性干預(yù)和治療性干預(yù)，分別觀察茴香對(duì)小鼠醉酒時(shí)間和醒酒時(shí)間的影響；另取50只小鼠，按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、茴香低劑量組、茴香中劑量組和茴香高劑量組，每組10只，除正常組外，各組采用56度白酒按0.13 mL/（10 g·d）體重灌胃，并給予相應(yīng)的藥物干預(yù)，30 d后，取腦組織勻漿，測(cè)腦組織谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）的活性。結(jié)果：與正常組相比，模型組腦指數(shù)、MDA水平明顯升高，SOD活性、GSH含量均明顯降低（P<0.01）；與模型組相比，茴香中、高劑量組MDA水平明顯降低，茴香高劑量組腦指數(shù)、SOD活性、GSH水平均明顯升高（P<0.05或0.01）；在預(yù)防醉酒實(shí)驗(yàn)中茴香高劑量組和清醉解酒藥組醉酒時(shí)間明顯延長(zhǎng)，醒酒時(shí)間明顯縮短，在治療醉酒實(shí)驗(yàn)中茴香高劑量組和清醉解酒藥組醒酒時(shí)間均明顯縮短（P<0.05或0.01）。結(jié)論：茴香提取液具有一定的解酒促醒作用及降低酒精中毒小鼠腦組織氧化應(yīng)激損傷。

【關(guān)鍵詞】 茴香； 酒精中毒； 腦組織； 氧化應(yīng)激； 小鼠

【Abstract】 Objective：To explore the effect of Fennel on sober-up and anti-oxidation of brain tissue in alcoholism mice.Method：The mice model of drunkenness were established with 56° alcohol were single gavaged according to 0.15 mL/10 g.50 mice were divided into the Qingzui drug group，the model group，the high-dose Fennel group，the medium-dose Fennel group，the low-dose Fennel group according to the weight of 50 mice，preventive intervention and therapeutic intervention were taken in high，medium and low three doses，respectively observed the effect of Fennel on drunkenness and sober-up time.Another 50 mice were divided into the normal control group，the model group，the high-dose Fennel group，the medium-dose Fennel group，the low-dose Fennel group according to the weight of 50 mice，10 mice in each group，each group mice were given 56° alcohol[0.13 mL/（10 g·d）] except for the normal control group，and corresponding drugs were given，brain tissue were collected，homogenate，and determined the contents of malondialdehyde（MDA） and glutathione（GSH），superoxide dismutase（SOD） activity after 30 d.Result：Compared with the normal control group，brain index，MDA level increased apparently in the model group，SOD activity and GSH content decreased apparently（P<0.01）.Compared with the model group，MDA level decreased apparently in the medium-dose Fennel group and the high-dose Fennel group，brain index，SOD activity，GSH level apparently increased in the high-dose Fennel group（P<0.05 or 0.01）.The drunkenness time of the high-dose Fennel group and the sober-up drug group apparently prolonged，sleeping time of the high-dose Fennel group and the sober-up drug group apparently shortened in drunkenness prevention experiment，sleeping time of the high-dose Fennel group and the sober-up drug group apparently shortened in drunkenness treatment experiment（P<0.05 or 0.01）.Conclusion：Fennel certainly has the effect of sober-up and wake-promoting and can relieve oxidative stress injury in alcoholism mice brain tissue.endprint

【Key words】 Fennel； Alcoholism； Brain tissue； Oxidative stress； Mice

First-authors address：Youjiang Medical College for Nationalities，Baise 533000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.02.010

由酒精中毒和酒精依賴形成所引發(fā)的社會(huì)公共衛(wèi)生問(wèn)題和人體健康問(wèn)題已經(jīng)成為僅次于心腦血管疾病和腫瘤的第三大危險(xiǎn)因素，對(duì)人體重要臟器都有所損害，但由于腦組織有很強(qiáng)的氧化代謝速率，酒精在腦組織引起的氧化應(yīng)激損傷比較明顯，因此長(zhǎng)期大量的飲酒可能會(huì)改變腦組織結(jié)構(gòu)及形態(tài)，嚴(yán)重者可能引起神經(jīng)細(xì)胞變性[1-3]。茴香是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，主要成分含有黃酮、糖苷、甾醇及生物堿等多種類型的化合物[4-5]，具有胃理氣的功效，其果實(shí)、根、莖和葉均可供藥用，茴香具有抗氧化、抗肝纖維化及對(duì)肝損傷有保護(hù)作用[6-9]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，茴香可能通過(guò)提高肝組織對(duì)自由基的防御能力和提高乙醇脫氫酶活性加快乙醇代謝而減輕酒精對(duì)肝臟的損傷（另文發(fā)表），本研究旨在探討茴香提取液對(duì)酒精中毒小鼠的解酒及腦組織抗氧化的作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)雄性小白鼠100只（生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK桂2012-0003，生產(chǎn)批號(hào)0007545），體重（22±2）g，右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼養(yǎng)環(huán)境溫度26～27 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，自由飲食。

1.2 試劑與藥品 56度北京紅星二鍋頭（北京紅星股份有限公司，20161010），谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所（批號(hào)分別為20161107，20161112，20161109），清醉解酒藥（江西博誠(chéng)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，20161006），茴香為莖葉部分（廣西百色市出售，曬干備用）。

1.3 主要儀器 722型可見(jiàn)光分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 茴香提取液的提取 茴香莖葉粉碎，取茴香100 g，加蒸餾水400 mL，浸泡40 min，分次放入微波爐微波處理，用1 000 mL水分兩次浸提，30 min/次，最后濃縮至含生藥1.0 g/mL。冰箱冷藏，按相應(yīng)濃度用原液1.0 g/mL及分別稀釋為0.5 g/mL和0.25 g/mL。

1.4.2 茴香對(duì)急性酒精中毒小鼠醉酒、醒酒時(shí)間的影響

1.4.2.1 茴香預(yù)防干預(yù)對(duì)急性酒精中毒小鼠醉酒時(shí)間、醒酒時(shí)間的影響 取健康雄性小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。模型組（蒸餾水）、清醉解酒組（200 mg/kg清醉解酒藥）、茴香低劑量組（2.5 g/kg）、茴香中劑量組（5 g/kg）、茴香高劑量組（10 g/kg）。模型組給予蒸餾水，其他各組給予相應(yīng)的藥物灌胃干預(yù)，30 min后，按0.15 mL/10 g體重給予56度北京紅星二鍋頭白酒灌胃，觀察醉酒時(shí)間和醒酒時(shí)間（醉酒時(shí)間：從灌胃白酒到翻正反射消失時(shí)間，以1 min內(nèi)翻正反射小于3次為醉酒；醒酒時(shí)間：翻正反射消失到翻正反射恢復(fù)）

1.4.2.2 茴香治療干預(yù)對(duì)急性酒精中毒小鼠醉酒時(shí)間、醒酒時(shí)間的影響 實(shí)驗(yàn)分組、藥物干預(yù)及觀察指標(biāo)同預(yù)防醉酒1.4.2.1，不同的是，給予白酒灌胃30 min后，再給予相應(yīng)的藥物干預(yù)治療。

1.4.3 茴香對(duì)酒精中毒小鼠腦組織抗氧化作用的影響

1.4.3.1 分組與造模 取雄性小鼠50只，按體重隨機(jī)分組（每組10只）：正常組、模型組、茴香低劑量組（2.5 g/kg茴香）、茴香中劑量組（5 g/kg茴香）和茴香高劑量組（10 g/kg茴香）。灌白酒前，正常組和模型組給予蒸餾水、其余各組給予相應(yīng)茴香劑量干預(yù)，1 h后，除正常組給予蒸餾水外，其余各組每天按0.13 mL/10 g給予56度白酒，分兩次灌胃，兩次給酒時(shí)間間隔4 h以上，藥物干預(yù)1次/d，共30 d。每周稱體重1次，以調(diào)整灌胃劑量。

1.4.3.2 指標(biāo)檢測(cè) 末次給藥12 h內(nèi)禁食，測(cè)小鼠體重、取腦組織稱重，計(jì)算腦指數(shù)，腦指數(shù)=（腦重量/小鼠體重）×100%。取腦組織制備成10%組織勻漿，取上清液，按試劑盒說(shuō)明書(shū)用分光光度計(jì)測(cè)定并計(jì)算腦組織MDA、GSH的含量和SOD活性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 茴香對(duì)酒精中毒小鼠腦指數(shù)的影響 與正常組相比，模型組腦指數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，0.01）；與模型組相比，茴香高劑量組腦指數(shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 茴香對(duì)急性酒精中毒小鼠醉酒時(shí)間、醒酒時(shí)間的影響 與模型組相比，在預(yù)防醉酒實(shí)驗(yàn)中茴香高劑量組和清醉解酒藥組醉酒時(shí)間均明顯延長(zhǎng)，醒酒時(shí)間明顯縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01）；在治療醉酒實(shí)驗(yàn)中，茴香高劑量組和清醉解酒藥組醒酒時(shí)間均明顯縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01）。見(jiàn)表2。

2.3 茴香對(duì)酒精中毒小鼠腦組織SOD、MDA、GSH的影響 與正常組相比，模型組GSH含量、SOD活性均顯著降低，MDA含量明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與模型組相比，茴香高劑量組SOD活性、GSH含量均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），茴香中、高劑量組MDA水平均明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01）。見(jiàn)表3。endprint

3 討論

有研究表明當(dāng)機(jī)體大量飲酒后，血中酒精濃度就會(huì)增加，而且酒精的脂溶性相對(duì)較大，易穿透血腦屏障，會(huì)隨血液進(jìn)入腦組織，腦組織酒精濃度的增高會(huì)刺激腦部邊緣系統(tǒng)、小腦、延髓等組織，從而使機(jī)體產(chǎn)生昏睡、記憶力下降等一系列神經(jīng)中樞受抑制的行為表現(xiàn)[10-12]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，茴香治療組小鼠腦指數(shù)明顯低于模型組，茴香預(yù)防性干預(yù)，可以明顯延長(zhǎng)小鼠醉酒潛伏期，減少小鼠的醒酒時(shí)間；茴香干預(yù)性治療，也能明顯縮短小鼠的醒酒時(shí)間，減輕酒精對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用。說(shuō)明茴香具有一定的解酒、醒酒作用，并能減輕酒精中毒小鼠腦水腫。

有研究表明，酒精導(dǎo)致腦損傷主要與乙醇及其代謝產(chǎn)物導(dǎo)致腦血流量減少進(jìn)而發(fā)生腦缺血、缺氧介導(dǎo)的腦組織發(fā)生氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)引起的自由基損害等有關(guān)[13-15]。腦組織中酒精濃度增高后，酒精在腦組織代謝產(chǎn)生的大量的氧自由基、活性氧等過(guò)氧化產(chǎn)物，同時(shí)還能促進(jìn)機(jī)體發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，進(jìn)一步對(duì)腦組織造成損害 [16-17]，機(jī)體腦組織過(guò)氧化產(chǎn)物主要有SOD、GSH、MDA等，GSH可以清除體內(nèi)過(guò)多的氧自由基等過(guò)氧化產(chǎn)物，是體內(nèi)一種抗氧化劑，而且可以和酒精的代謝產(chǎn)物乙醛相結(jié)合，當(dāng)酒精在腦組織代謝增加時(shí)，GSH含量就會(huì)相應(yīng)減少，進(jìn)一步加重腦組織的損傷。SOD是體內(nèi)一種超氧化物歧化酶，SOD活力的高低可以反映機(jī)體抗氧化水平的高低。MDA是體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化代謝產(chǎn)物，MDA含量的多少可以間接的反應(yīng)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度[18-20]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組MDA水平升高，SOD、GSH水平降低，而經(jīng)過(guò)茴香治療后，腦組織SOD、GSH水平升高，MDA水平降低，說(shuō)明茴香可以減輕酒精對(duì)腦組織的氧化應(yīng)激損傷，從而對(duì)腦組織進(jìn)行保護(hù)作用。

有研究表明，中草藥成分中的總黃酮類和異黃酮類化合物具有解酒和預(yù)防醉酒的功能，而茴香提取液中的主要成分就是總黃酮類和異黃酮類化合物[4]，由此推測(cè)，茴香中的總黃酮是茴香具有解酒和預(yù)防醉酒的主要物質(zhì)。另外由于腦組織中酒精含量減少，氧自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物生成減少[21]，從而降低酒精對(duì)腦組織的氧化應(yīng)激損傷。

綜上所述，茴香提取液可以通過(guò)增加腦組織超氧化物歧化酶活性，降低脂質(zhì)代謝反應(yīng)增加腦組織的抗氧化能力；茴香可能通過(guò)黃酮類物質(zhì)的直接解酒作用以及通過(guò)提高乙醇脫氫酶活性達(dá)到對(duì)酒精中毒小鼠解酒和預(yù)防醉酒的作用。

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（收稿日期：2017-10-10） （本文編輯：程旭然）endprint