P53、Her-2和Ki67在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其臨床意義*

賈巍，尹長(zhǎng)恒

（哈勵(lì)遜國(guó)際和平醫(yī)院，河北 衡水 053000）

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中最常見的病理類型，是最常見的甲狀腺上皮細(xì)胞來(lái)源的惡性腫瘤[1]。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，甲狀腺乳頭狀癌分子生物指標(biāo)的研究成為重點(diǎn)[2]。P53、Her-2和Ki67是惡性腫瘤的主要檢測(cè)指標(biāo)[3-4]。特異性腫瘤標(biāo)志物的確立，對(duì)提高確診率，改善甲狀腺乳頭狀癌的治療具有重要意義。本文采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)甲狀腺組織內(nèi)P53、Her-2、Ki67的表達(dá)，分析其在甲狀腺乳頭狀癌中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年3月-2016年3月哈勵(lì)遜國(guó)際和平醫(yī)院甲狀腺乳頭狀癌手術(shù)患者128例作為乳頭狀癌組，其中，男性52例，女性76例；年齡26～72歲。收集甲狀腺腺瘤手術(shù)患者56例作為腺瘤組，其中，男性21例，女性35例；年齡28～69歲；結(jié)節(jié)性甲狀腺腫21例，橋本甲狀腺炎35例。另收集正常甲狀腺組織9例作為對(duì)照組。所有病例資料完整。

1.2 免疫組織化學(xué)法

采用全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色儀進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)免疫組織化學(xué)SP法染色。標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，梯度酒精脫水，石蠟包埋組織，采用4μm連續(xù)切片，行蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE），鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判定

1.3.1 P53P53基因陽(yáng)性染色呈棕黃色顆粒狀，定位于細(xì)胞核。無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)計(jì)分：隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡（×400）視野，各計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%計(jì)0分，5%～25%計(jì)1分，25%～50%計(jì)2分，50%～75%計(jì)3分，≥75%計(jì)4分。上述2項(xiàng)結(jié)果的乘積為0分表示陰性（-），1～3分表示弱陽(yáng)性（+），4～6分表示陽(yáng)性（++），＞6分表示強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.3.2 Her-2Her-2陽(yáng)性產(chǎn)物位于細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒。每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野（×400）進(jìn)行觀察，參照FDA推薦的Hercep Test評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)判：（-）（+）為陰性；（++）為弱陽(yáng)性，需進(jìn)一步用FISH法證實(shí)；（+++）為陽(yáng)性。無(wú)癌細(xì)胞膜著色或≤10%癌細(xì)胞膜染色為陰性（-）；＞10%癌細(xì)胞膜弱染色，但染色間斷，未環(huán)繞細(xì)胞膜為弱陽(yáng)性（+）；＞10%癌細(xì)胞膜弱到中等程度染色，染色連續(xù)，環(huán)繞整個(gè)胞膜為陽(yáng)性（++）；＞10%癌細(xì)胞膜強(qiáng)染色，染色連續(xù)，環(huán)繞整個(gè)胞膜為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。FISH結(jié)果判讀：首先在低倍鏡下觀察整張F(tuán)ISH切片，然后于高倍鏡下通過特異通道濾光片觀察Her-2和CSP17信號(hào)，進(jìn)行信號(hào)計(jì)數(shù)和比值計(jì)算。計(jì)數(shù)選擇細(xì)胞核無(wú)重疊、信號(hào)清晰的細(xì)胞，隨機(jī)計(jì)數(shù)≥30個(gè)癌細(xì)胞核中的雙色信號(hào)。判讀標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)/美國(guó)病理醫(yī)師學(xué)院檢測(cè)指南：Her-2信號(hào)成簇狀分布時(shí)可不計(jì)數(shù)，直接視為基因擴(kuò)增，Her-2信號(hào)成點(diǎn)狀分布時(shí)通過計(jì)數(shù)比值進(jìn)行判斷，Her-2/CSP17比值≤1.8為Her-2陰性，比值≥2.2為Her-2陽(yáng)性，比值在1.8～2.2為Her-2結(jié)果不確定，需要再計(jì)算30個(gè)細(xì)胞核中的信號(hào)。

1.3.3 Ki67Ki67陽(yáng)性標(biāo)志是細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒；陰性：＜14%腫瘤細(xì)胞胞核染色陽(yáng)性；低表達(dá)：14%～25%腫瘤細(xì)胞胞核染色陽(yáng)性；中表達(dá)：25%～50%腫瘤細(xì)胞胞核染色陽(yáng)性；高表達(dá)：＞50%腫瘤細(xì)胞胞核染色陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析釆用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P53、Her-2、Ki67在甲狀腺組織中的表達(dá)

2.1.1 P53正常甲狀腺組織中未見P53表達(dá)。P53在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為85.15%（109/128），陰性表達(dá)率為14.84%（19/128）；在甲狀腺腺瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)率為26.78%（15/56），陰性表達(dá)率為73.21%（41/56）；在正常組織中陽(yáng)性表達(dá)率為0.00%（0/9），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.933，P=0.000），甲狀腺乳頭狀癌組織中P53陽(yáng)性表達(dá)率高于甲狀腺腺瘤。見表1和圖1。

2.1.2 Her-2正常甲狀腺組織中未見Her-2表達(dá)。Her-2在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為40.62%（52/128），陰性表達(dá)率為59.37%（76/128）；在甲狀腺腺瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)率為16.07%（9/56），陰性表達(dá)率為83.92%（47/56）；在正常組織中陽(yáng)性表達(dá)率為0.00%（0/9），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.765，P=0.012），甲狀腺乳頭狀癌組織中Her-2陽(yáng)性表達(dá)率高于甲狀腺腺瘤。見表1和圖2。

2.1.3 Ki67正常甲狀腺組織中未見Ki67表達(dá)。Ki67在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為38.28%（49/128），陰性表達(dá)率為61.71%（79/128）；在甲狀腺腺瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)率為23.21%（13/56），陰性表達(dá)率為76.78%（43/56）；在正常組織中陽(yáng)性表達(dá)率為0.00%（0/9），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.815，P=0.375）。見表 1 和圖 3、4。

2.2 P53、Her-2、Ki67表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關(guān)系

圖1 P53在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽(yáng)性表達(dá) （SP×400）

圖2 Her-2在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽(yáng)性表達(dá)（SP×400）

在128例甲狀腺乳頭狀癌中，P53、Ki67的表達(dá)僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤(rùn)、組織學(xué)分型、分化程度無(wú)關(guān)（P＞0.05）。Her-2的表達(dá)與腫瘤大小、局部浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與年齡、性別、組織學(xué)分型、分化程度無(wú)關(guān)（P＞0.05）。見表 2。

表1 3組P53、Her-2、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率比較 例（%）

圖3 Ki67在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽(yáng)性表達(dá) （SP×400）

圖4 甲狀腺乳頭狀癌病理組織切片 （HE×400）

表2 甲狀腺乳頭狀癌患者不同臨床病理特征的P53、Her-2、Ki67陽(yáng)性率比較

續(xù)表2

3 討論

甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，占惡性腫瘤的1%～5%，總發(fā)病率在世界各地呈快速增長(zhǎng)趨勢(shì)[5-6]。目前，大多數(shù)甲狀腺腫瘤采用組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查能做出診斷，但由于乳頭狀增生的結(jié)節(jié)難以區(qū)分良、惡性，導(dǎo)致甲狀腺乳頭狀癌的診斷比較困難，在甲狀腺乳頭狀癌的預(yù)后指標(biāo)中，尚缺乏有效的特異分子標(biāo)志物[7]。

P53基因是比較重要的抑癌基因，其突變型是腫瘤發(fā)生的促進(jìn)因子，可以通過多種途徑參與細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的調(diào)控，并與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)。有研究表明，P53在甲狀腺乳頭狀癌中陽(yáng)性表達(dá)率為88.4%，診斷的準(zhǔn)確度為86.2%[8]。另有研究顯示，P53在甲狀腺乳頭狀癌中陽(yáng)性表達(dá)率為86.1%，且與患者的年齡、性別無(wú)關(guān)[9-10]。國(guó)外的報(bào)道中也表明，P53在甲狀腺乳頭狀癌的陽(yáng)性表達(dá)率為47.3%，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；P53在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與臨床病理特征無(wú)關(guān)[11]。本研究顯示，P53在甲狀腺乳頭狀癌中呈陽(yáng)性高表達(dá)，且與年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤(rùn)、組織學(xué)分型、分化程度無(wú)關(guān)，僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

Her-2基因被認(rèn)為是惡性腫瘤侵襲性生物學(xué)行為的有效標(biāo)志物?；虮磉_(dá)產(chǎn)物是一種具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白，在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要作用，主要參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的調(diào)節(jié)，促進(jìn)細(xì)胞分裂的增殖。有研究顯示，Her-2在乳腺癌、胃癌、甲狀腺癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中有重要作用[12]。國(guó)內(nèi)研究顯示，Her-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)46.6%，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、局部浸潤(rùn)程度有關(guān)[13]。國(guó)外研究顯示，Her-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽(yáng)性表達(dá)率為79.5%，該表達(dá)與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移程度有關(guān)[14]。本研究顯示，Her-2在甲狀腺乳頭狀癌中呈陽(yáng)性高表達(dá)，且與腫瘤大小、局部浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

Ki67是一種DNA結(jié)合蛋白，是反映組織細(xì)胞增殖活性的重要指標(biāo)。Ki67免疫組織化學(xué)法染色可將大部分G0期以外的細(xì)胞標(biāo)記，Ki67的陽(yáng)性率越高，說明處于增殖周期的細(xì)胞比例越高，腫瘤生長(zhǎng)越快。Ki67單克隆抗體可快速識(shí)別正在增殖分裂的細(xì)胞，是腫瘤免疫組織化學(xué)法最常見的標(biāo)志物，在惡性腫瘤中常過度表達(dá)，該指標(biāo)廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤增殖活性的檢測(cè)[15]。本研究顯示，Ki67的表達(dá)僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤(rùn)、組織學(xué)分型、分化程度無(wú)關(guān)，與相關(guān)研究結(jié)果一致[16]。

本研究中，甲狀腺乳頭狀癌組織中P53、Her-2陽(yáng)性表達(dá)率較甲狀腺腺瘤高，對(duì)臨床工作中評(píng)估甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有一定指導(dǎo)意義。Ki67對(duì)鑒別甲狀腺乳頭狀癌無(wú)明確臨床意義。

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