葛黃顆粒乙醇滲漉工藝研究

陳玉蘭+魏嵋+蒲清榮

摘要：目的優(yōu)選葛黃顆粒乙醇滲漉工藝。方法以乙醇提取物中有效成分鳶尾苷含量為指標(biāo)，通過(guò)單因素試驗(yàn)比較乙醇滲漉法、乙醇超聲法和乙醇回流法，確定葛黃顆粒中醇提藥材的提取方法；運(yùn)用高效液相色譜法，使用正交設(shè)計(jì)法，優(yōu)選葛黃顆粒乙醇提取工藝。結(jié)果采用乙醇滲漉法提取，最佳工藝為：8倍量60%乙醇，浸泡12h，流速為1mL·min-1。結(jié)論采用該滲漉工藝提取，葛黃顆粒乙醇提取物中鳶尾苷的收率較高且穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞：滲漉；正交設(shè)計(jì)；鳶尾苷；高效液相色譜法；葛黃顆粒

中圖分類號(hào)：R283文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2018）01-0069-03

【Abstract】Objective： To optimize the process of ethanol percolation in Gehuang Granule. Methods： By taking the content of tectoridin in the ethanol extract as an index and by single factor test， ethanol percolation method， ethanol ultrasonic method and ethanol reflux method were compared to determine the extraction method of alcohol extraction medicinal material in Gezhong granule. By using HPLC and orthogonal design method， the ethanol extraction process of Gezhong Granule was optimized . Results： The best extraction process was ethanol percolation method. The optimum conditions were as follows， 8 times the amount of 60% ethanol， soaking for 12 hours， with 1mL·min-1 of flow rate. Conclusion： According to the percolation process， the yield of tectoridin of ethanol percolation in Gehuang Granule is high and stable.

【Key words】percolation， orthogonal design， tectoridin， HPLC， Gehuang Granules

葛黃顆粒是本院自制的復(fù)方中藥制劑，具有醒酒解毒、健脾疏肝、清熱利濕之功效。處方中有葛花、丹參，主要成分為鳶尾苷、丹參酮ⅡA等脂溶性成分。現(xiàn)代藥理研究表明，葛花中所含的鳶尾苷等異黃酮類化合物具有解酒保肝的作用，可使血中乙醇、乙醛濃度下降，以及降低血尿素氮的升高，從而起到解酒作用。鳶尾苷等異黃酮類成分易溶于乙醇。為最大限度地提取方中有效成分，充分發(fā)揮解酒、保肝的功效，本實(shí)驗(yàn)以鳶尾苷含量為指標(biāo)，通過(guò)單因素試驗(yàn)比較乙醇滲漉法、乙醇超聲法和乙醇回流法對(duì)葛黃顆粒中有效成分含量的影響，篩選最佳提取方法，并通過(guò)正交設(shè)計(jì)優(yōu)選最佳乙醇滲漉工藝。

1材料

儀器與材料：HH—S8水浴鍋；JA203H天平；AUW120D精密天平；JPCT0328超聲機(jī)；LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司），SPD-20A紫外可見(jiàn)檢測(cè)器，LCsolution色譜工作站。鳶尾苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，供鑒別用，批號(hào)：111632-200602，供含量測(cè)定用）。葛花、丹參均購(gòu)于瀘州市寶光中藥飲片公司，經(jīng)西南醫(yī)科大學(xué)莊誠(chéng)教授鑒定，均符合《中國(guó)藥典》2015年版相關(guān)項(xiàng)下要求。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：Wonda Sil C18-WR（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸水（20∶80）；流速：1 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：265 nm，柱溫：40℃，理論塔板數(shù)按鳶尾苷計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取鳶尾苷對(duì)照品1.24 mg，置10 mL棕色量瓶中，加入甲醇超聲溶解并定容，即得對(duì)照品溶液。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備依次精密吸取鳶尾苷對(duì)照品溶液2.5、5、10、15、20 μL注入液相色譜儀，測(cè)定。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量（mg）為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：Y=4537.6X-5486，r=0.9998（n=5）。見(jiàn)表1和圖1～3。

2.4提取方法比較取葛花、丹參粉碎成粗顆粒（過(guò)20目篩），各精密稱取單倍處方量3份，混勻。

2.4.1乙醇滲漉法取1份粗顆粒，加適量60%乙醇浸潤(rùn)30 min，取脫脂棉一團(tuán)墊在滲漉筒底部鋪平，裝筒，加入20倍量60%乙醇，加蓋密閉24 h，以1～3 mL·min-1流速進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，減壓濃縮至適量，恒溫干燥，得提取物1。

2.4.2乙醇超聲法取1份粗顆粒，置燒瓶中，加入20倍量60%乙醇浸泡30 min，超聲提取2次，每次1 h，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至適量，恒溫干燥，得提取物2。

2.4.3乙醇回流法取1份粗顆粒，置磨口燒瓶中，加20倍量60%乙醇浸泡30 min，加熱回流提取2次，每次1 h，放冷，濾過(guò)，收集濾液減壓濃縮至適量，恒溫干燥，得提取物3。

2.5供試品溶液的制備分別取提取物各0.25 g，精密稱定，加入75%乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲提取40 min，取出，放冷，補(bǔ)足重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)0.45 μm濾膜，濾過(guò)，即得。endprint

2.6提取方法比較結(jié)果按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鳶尾苷提取量依次為15.10，13.22，10.06 mg·g-1，即乙醇滲漉法提取的鳶尾苷含量最高。

2.7正交試驗(yàn)樣品的制備選擇乙醇濃度、浸泡時(shí)間、乙醇用量、流速為因素，選用L9（34）因素水平表安排正交試驗(yàn)。各因素水平見(jiàn)表2。按單倍量處方藥材的配比，準(zhǔn)確稱取9份樣品，按表2中9種工藝條件組合進(jìn)行滲漉提取，提取液濃縮成稠膏備用。

2.9方法學(xué)考察

2.9.1精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD為1.59%（n=5）。表明該方法、該儀器測(cè)定鳶尾苷精密度符合要求。

2.9.2穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，分別在0，2，4，8，10h進(jìn)樣，測(cè)定各峰面積，其積分面積RSD為0.58%（n=5）。表明鳶尾苷用該方法在該儀器上10 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果較穩(wěn)定，符合要求。

2.9.3重現(xiàn)性試驗(yàn)取1號(hào)樣品干浸膏，依法重復(fù)提取并測(cè)定5次，結(jié)果1號(hào)浸膏的含量平均值為16.0304 mg·g-1，RSD為2.24%（n=5），表明該方法重現(xiàn)性試驗(yàn)符合要求。

2.9.4 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取1號(hào)樣品0.075g共6份，分別精密加入一定量的鳶尾苷對(duì)照品溶液（精密稱取鳶尾苷對(duì)照品10.20 mg于25 mL量瓶中，加75%乙醇超聲溶解并定容至刻度，搖勻，得濃度為0.408 mg·mL-1的對(duì)照品溶液）3 mL至樣品中，再精密吸取22 mL 75%乙醇，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，各取10 μL進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表3。鳶尾苷平均回收率為102.53 %，RSD為2.55 %，表明本方法準(zhǔn)確可靠。

2.10樣品的測(cè)定取正交試驗(yàn)干浸膏，按2.5項(xiàng)下制備供試品溶液。按上述色譜條件，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。根據(jù)各因素對(duì)提取工藝影響的貢獻(xiàn)大小給予不同的權(quán)重系數(shù)：干浸膏得率為20%，鳶尾苷含量為80%，再進(jìn)行加權(quán)求和：綜合評(píng)分=（干浸膏收率/干浸膏收率最大值）×20%+（鳶尾苷含量/鳶尾苷含量最大值）*80%。正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4及表5。

由表4和表5可以看出因素A，即乙醇濃度對(duì)鳶尾苷含量有顯著影響（P<0.05），影響因素大小順序?yàn)?A>D>B>C，及乙醇濃度>流速>浸泡時(shí)間>乙醇用量。優(yōu)選的工藝為 A2B1C3D1。乙醇用量影響不大，為節(jié)約成本，乙醇用量選擇為8倍量，即最佳提取工藝為：處方藥材加8 倍量60%乙醇，浸泡 12h，滲漉速度為 1 mL·min-1。

2.12驗(yàn)證試驗(yàn)由于葛黃顆粒醇提工藝的最佳方案沒(méi)有在正交試驗(yàn)因素表內(nèi)，因此課題組對(duì)最佳醇提工藝進(jìn)行了6次驗(yàn)證。結(jié)果見(jiàn)表6。根據(jù)藥材含量，計(jì)算鳶尾苷提取率為：71.4119%。

3討論

葛黃解酒顆粒處方來(lái)源于名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，該制劑藥味較多，葛花、丹參的主要有效成分為醇溶性成分，為配合工業(yè)化生產(chǎn)的需要，故采用乙醇提取。本文通過(guò)粗略比較3種不同的乙醇提取方法，結(jié)果滲漉法提取工藝既具有較高的提取率，又能為大生產(chǎn)節(jié)約生產(chǎn)成本。

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（收稿日期：2017-10-10）endprint