芎歸六君子湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠冠心病的治療作用

鄭麗莉

(山東協(xié)和學(xué)院，濟(jì)南 250109)

心血管疾病在我國(guó)城市居民死因中位居前三位，而冠心病是心血管疾病的第一死因[1]。冠心病屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”范疇，其病位在心，廣泛存在氣虛痰濁血瘀的病機(jī)。六君子湯源于《醫(yī)學(xué)正傳》，主治脾胃氣虛兼痰濕證，癥見食少便溏，胸脘痞悶嘔逆者，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用于治療慢性胃炎、消化性潰瘍等屬于脾胃氣虛者。芎歸六君子湯在六君子湯基礎(chǔ)上，加味補(bǔ)血活血之當(dāng)歸、川芎組成，具有補(bǔ)氣健脾，化痰散瘀之效，是治療脾胃氣虛，痰瘀內(nèi)阻的常用方藥。本研究擬采用芎歸六君子湯治療大鼠冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，觀察該方對(duì)于冠心病的治療效果。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠60只，雄性，體重(200±20) g，山東省濟(jì)南市朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供 [SCXK (魯) 2014-0007]，[SYXK (魯) 2014-0008]。

1.2 主要試劑與儀器

1.2.1 中藥材

芎歸六君子湯由人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草、陳皮、姜半夏、川芎、當(dāng)歸組成，藥物購(gòu)于建聯(lián)藥店，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定。上述藥材按照比例3∶3∶3∶2∶1∶2∶3∶3稱取，加水浸泡2 h，常規(guī)煎煮3次，藥液混合，60℃水浴箱中濃縮至每毫升制劑相當(dāng)于生藥0.6 g。滅菌，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 對(duì)照藥

辛伐他丁，購(gòu)于江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H32020856。復(fù)方丹參滴丸，購(gòu)于天津天士力制藥股份有限公司，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20013423。

1.2.3 造模用藥

膽固醇(百靈威科技有限公司，批號(hào)LR600108)；丙硫氧嘧啶(上海朝暉藥業(yè)有限公司，批號(hào)1404F12)；脫氧膽酸鈉(北京奧博星生物制藥有限公司，批號(hào)20151028)；維生素D3(哈爾濱市華晟科技動(dòng)物藥品廠，獸藥字2015080511417)；垂體后葉素(南京新百藥業(yè)有限公司，批號(hào)100401)。脂肪乳的配比，每500 mL含10%膽固醇、20%豬油、1%丙硫氧嘧啶和2%脫氧膽酸鈉。

1.2.4 其他試劑

TC、TG、HDL-C、LDL-C試劑盒(南京建成生物有限公司，批號(hào)分別為20150311、20150327、20150328、20150403)；NO試劑盒(南京建成生物有限公司，20151216)，ET-1、PGI2、TXA2 ELISA試劑盒(武漢華美生物工程有限公司，CSB-E06979r、CSB-E13706r、CSB-E12689r)，血漿PAI-1、t-PA ELISA試劑盒(南京森貝伽生物科技有限公司，批號(hào)分別為SBJ-R0574、SBJ-R0585)，TNF-α、IL-1β、IL-6 ELISA試劑盒(深圳達(dá)科為生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為20151121、20151012、20150923)，hs-CRP ELISA試劑盒(武漢華美生物工程有限公司，批號(hào)D19018885)，MCP-1、ICAM-1 ELISA試劑盒(美國(guó)R&D公司，批號(hào)20150101A、20150211A)。

1.2.5 主要儀器

Synergy2酶標(biāo)儀 [美國(guó)伯騰儀器有限公司(Bio Tek)]；冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；LG-10A電熱恒溫水浴箱(北京科偉永鑫儀器廠，HH-S4)；MS-18型全自動(dòng)生化測(cè)定儀(奧普森公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組

將大鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、西藥對(duì)照組(辛伐他丁)、中藥對(duì)照組(復(fù)方丹參滴丸)、芎歸六君子湯組。

1.3.2 給藥方法

以等效劑量計(jì)算，于實(shí)驗(yàn)開始即口服灌胃給藥，每日一次，持續(xù)12周。其中，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組分別給予生理鹽水20 mL/kg；西藥對(duì)照組給予辛伐他丁2.1 mg/kg，中藥對(duì)照組給予復(fù)方丹參滴丸85 mg/kg；中藥組給予芎歸六君子湯6.3 g/kg。

1.3.3 模型制備

除空白對(duì)照組外，按每千克60萬(wàn)單位一次性腹腔注射維生素D3，同時(shí)每天灌服脂肪乳10 mL/kg，連續(xù)12周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前72 h，對(duì)照組腹腔注射生理鹽水1 mL/kg，其余各組腹腔注射垂體后葉素30 U/kg，連續(xù)3次，每次間隔24 h，誘發(fā)冠狀動(dòng)脈痙攣，制備冠心病模型[2-3]。記錄造模前和末次給藥后30 min心電圖。本文的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已通過(guò)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用與管理委員會(huì)批準(zhǔn)(編號(hào)：IACUC-2016-017)。

1.3.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法

于12周末，末次給藥后12 h，稱重，戊巴比妥麻醉，下腔靜脈取血，低溫離心10 min，轉(zhuǎn)速3000 r/min，分離血清或血漿。

(1)心電圖檢測(cè)：戊巴比妥麻醉，連接BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄造模前和末次造模后30 min標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖，以QRS波群的終點(diǎn)與ST段交接處的J點(diǎn)位移判斷心肌缺血發(fā)生與否，并以PR段為基線記錄J點(diǎn)位移，以J點(diǎn)上升或下降超過(guò)0.1 mV視為發(fā)生心肌缺血。

(2)血脂測(cè)定：采用酶學(xué)法，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清血脂(TC、TG、HDL-C、LDL-C)，具體操作按照試劑盒上說(shuō)明進(jìn)行。

(3)炎癥因子測(cè)定：ELISA法分別測(cè)定TNF-α、IL-1β、IL-6、hs-CRP、ICAM-1、MCP-1的濃度，實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照試劑盒步驟操作。

(4)血管內(nèi)皮活性物質(zhì)和纖溶系統(tǒng)檢測(cè)：硝酸還原酶法測(cè)定血清NO含量，ELISA法檢測(cè)血清ET-1、PGI2、TXA2和血漿PAI-1、t-PA的水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明完成操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠心電圖ST段變化的影響

造模前后，模型組ST段變化超過(guò)0.1 mV，與空白對(duì)照組相比，ST段變化差異有顯著性(P< 0.05)，說(shuō)明造模成功，出現(xiàn)冠脈痙攣，導(dǎo)致心肌缺血。與模型對(duì)照組相比，各給藥組ST水平改善，差異有顯著性(P< 0.05)。辛伐他丁組與丹參滴丸組差異無(wú)顯著性，芎歸六君子湯組效果優(yōu)于辛伐他丁與丹參滴丸組，差異有顯著性(P< 0.05)。

2.2 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠血脂的影響

與空白對(duì)照相比，模型對(duì)照組TC、TG、LDL-C顯著升高，HDL-C顯著降低(P< 0.01)，說(shuō)明模型對(duì)照組出現(xiàn)明顯高血脂，造模成功。與模型對(duì)照組相比，各給藥組血脂水平均改善，差異有顯著性，其中，辛伐他丁組與丹參滴丸組僅HDL-C差異有顯著性，TC、TG、LDL-C差異無(wú)顯著性，而芎歸六君子湯組效果優(yōu)于辛伐他丁與丹參滴丸組，差異有顯著性。

2.3 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠炎癥因子的影響

與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組TNF-α、IL-1、hs-CRP、MCP-1、ICAM-1顯著升高，說(shuō)明模型對(duì)照組出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)。與模型對(duì)照組相比，各給藥組炎癥因子均顯著降低，芎歸六君子湯組降低最為明顯，與辛伐他丁組和丹參滴丸組相比差異有顯著性。

2.4 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠血管內(nèi)皮活性物質(zhì)的影響

與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組ET-1、TXA2顯著升高，縮血管作用增強(qiáng)，NO、PGI2顯著降低，擴(kuò)血管作用減弱。各用藥組血管活性物質(zhì)的水平均有所改善，與模型對(duì)照組相比差異有顯著性，其中芎歸六君子湯組效果優(yōu)于辛伐他丁組及丹參滴丸組，而辛伐他丁組與丹參滴丸組相比差異無(wú)顯著性。

表1 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠心電圖ST段變化的影響

注：與空白對(duì)照組相比，*P< 0.05；與模型對(duì)照組相比，△P< 0.05；與辛伐他丁組相比，☆P< 0.05；與丹參滴丸組相比，●P< 0.05。下同。

Note. Compared with the blank control group,*P< 0.05. Compared with the model control group,△P< 0.05. Compared with the simvastatin group,☆P< 0.05. Compared with the Danshen dripping pill group,●P< 0.05. The same bellow.

表2 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠血脂的影響

表3 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠炎癥因子的影響

表4 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠血管內(nèi)皮活性物質(zhì)的影響

表5 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠纖溶系統(tǒng)的影響

2.5 芎歸六君子湯對(duì)冠心病大鼠纖溶系統(tǒng)的影響

與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組t-PA顯著降低，PAI-1顯著升高，說(shuō)明模型對(duì)照組纖溶功能降低，凝血功能增強(qiáng)。各給藥組t-PA升高，PAI-1降低，與模型對(duì)照組相比差異均有顯著性。芎歸六君子湯組改善最為明顯，優(yōu)于辛伐他丁組和丹參滴丸組。

3 討論

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種以脂質(zhì)沉積、纖維組織增生、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的累及全身大、中動(dòng)脈的慢性疾病，嚴(yán)重者導(dǎo)致急性心肌梗死或腦梗死等。脂質(zhì)代謝紊亂和炎性反應(yīng)貫穿于動(dòng)脈粥樣硬化病變過(guò)程始終。

高血脂是動(dòng)脈硬化的始動(dòng)因素和主要危險(xiǎn)因素，血清膽固醇和低密度脂蛋白水平升高與動(dòng)脈硬化發(fā)生呈正相關(guān)[4]。高密度脂蛋白可將膽固醇逆向運(yùn)至肝臟處理，降低機(jī)體膽固醇水平，且能抗氧化和抗炎，延緩動(dòng)脈硬化進(jìn)程。

炎癥是動(dòng)脈粥樣硬化的基本特征，炎癥導(dǎo)致血管局部中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，脂質(zhì)沉積，平滑肌細(xì)胞增殖遷移，細(xì)胞外基質(zhì)合成降解紊亂及新生血管增多。炎癥的活躍程度是鑒定不穩(wěn)定斑塊的指標(biāo)之一。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)可通過(guò)多種信號(hào)通路介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，在炎癥反應(yīng)中具有核心作用地位，其表達(dá)量在一定程度上反映動(dòng)脈粥樣硬化的程度，并與再發(fā)心肌梗死的危險(xiǎn)成正相關(guān)[5]。IL-6、IL-10被認(rèn)為是動(dòng)脈硬化的標(biāo)志物[6]。C-反應(yīng)蛋白(CRP)是冠心病發(fā)生事件的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，動(dòng)脈硬化不同階段CRP的水平隨之改變[7]。單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)對(duì)單核、巨噬細(xì)胞的遷移和激活起特異性調(diào)控作用，影響粥樣斑塊的增長(zhǎng)及穩(wěn)定性。ICAM-1是單核細(xì)胞遷移至血管內(nèi)膜過(guò)程的重要誘導(dǎo)劑[8]。

內(nèi)皮功能不全是動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵步驟，炎癥反應(yīng)與內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷密切相關(guān)。內(nèi)皮功能受損后，炎癥因子釋放增加，其他活性物質(zhì)的分泌與釋放也出現(xiàn)紊亂。內(nèi)皮素(ET)、一氧化氮(NO)、前列環(huán)素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)對(duì)血管舒縮功能、凝血系統(tǒng)及血小板聚集起平衡調(diào)節(jié)作用[9]。ET具有強(qiáng)烈的縮血管和促血管平滑肌細(xì)胞增殖作用。NO是能阻止動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的內(nèi)皮保護(hù)因子。PGI2是強(qiáng)烈的血管舒張劑和血小板聚集抑制劑，而TXA2作用正好與PGI2相拮抗。血管內(nèi)皮損傷時(shí)，ET-1、TXA2釋放增加，NO、PGI2減少，縮血管與凝血功能增強(qiáng)。

纖溶活性功能減低是急性冠脈綜合征的重要病理生理基礎(chǔ)。纖溶酶原激活物(t-PA/u-PA)能激活纖溶酶原，降解纖維蛋白。纖溶酶原激活物抑制物(PAI-1)能迅速與t-PA結(jié)合而使之失活，抑制纖維蛋白降解。PAI-1調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、遷移和增殖及凋亡等多個(gè)過(guò)程，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化。t-PA、PAI-1活性與冠心病的臨床類型和發(fā)展變化有關(guān)[10]，伴隨不穩(wěn)定型心絞痛病情進(jìn)展，血液纖溶功能紊亂加重，斑塊不穩(wěn)定狀態(tài)惡化。PAI-1活性與再發(fā)心肌梗死密切相關(guān)，是心肌梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

本研究通過(guò)芎歸六君子湯治療大鼠冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，結(jié)果顯示，冠心病大鼠血脂和心電圖ST段改善；炎癥因子顯著下降；血管內(nèi)皮活性物質(zhì)ET、TXA2降低，NO、PGI2增加；纖溶系統(tǒng)t-PA升高，PAI-1降低。說(shuō)明芎歸六君子湯對(duì)血管硬化和缺血心肌具有保護(hù)作用。

冠心病屬于中醫(yī)學(xué)胸痹范疇，病位在心。病機(jī)主要為心氣虧虛，但多兼有氣滯、痰濁和瘀血?！督饏T要略·胸痹心痛短氣病脈證治》曰：“胸痹，心中痞，氣結(jié)在胸，胸滿脅下逆搶心，枳實(shí)薤白桂枝湯主之，人參湯亦主之?！睆堉倬霸凇秱浼庇诮鹨健诽岢觯骸靶膭诓≌?，補(bǔ)脾以益之?！爆F(xiàn)代中醫(yī)名家鄧鐵濤教授認(rèn)為，脾胃氣虛，痰濕阻滯是冠心病的常見成因。沈紹功認(rèn)為，冠心病的治療應(yīng)從傳統(tǒng)的“補(bǔ)氣活血”轉(zhuǎn)到“補(bǔ)氣祛痰”上來(lái)。徐秋[11]認(rèn)為，心氣虛的根源是脾氣虛，臨證多補(bǔ)脾氣以促心氣。王振濤[12]提出，老年冠心病患者其體質(zhì)特點(diǎn)多為氣血不足、津血同虧、脾胃和腸道功能下降。因此氣血不足，痰瘀內(nèi)阻是冠心病的重要病機(jī)。

六君子湯源于《醫(yī)學(xué)正傳》，由人參、白術(shù)、茯苓、甘草、半夏、陳皮組成，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用于治療慢性胃炎、消化性潰瘍等屬于脾胃氣虛者。芎歸六君子湯在其基礎(chǔ)上，加味補(bǔ)血活血之當(dāng)歸、川芎，功能健脾益氣、化痰消脂、補(bǔ)血活血。本研究采用芎歸六君子湯治療冠心病，方中以人參、白術(shù)、茯苓和甘草增強(qiáng)脾胃功能，改善水谷運(yùn)化，一則促進(jìn)氣血化生，增加心肌供血；二則消除水濕痰飲，改善脂質(zhì)代謝；以半夏、陳皮化痰理氣，調(diào)節(jié)血脂，改善動(dòng)脈硬化；加之當(dāng)歸、川芎補(bǔ)血活血行氣，改善血液高凝，促進(jìn)纖溶；八藥合參，共同改善血管硬化和心肌供血，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，補(bǔ)氣健脾，化痰活血，能夠化生氣血，促進(jìn)心肌供血，改善脂質(zhì)代謝，緩解血液高凝，減輕血管硬化，對(duì)于冠心病治療大有裨益。關(guān)于其治療機(jī)制，尚有待下一步研究予以深入闡釋。

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