體外受精胚胎細(xì)胞數(shù)量和碎片率對(duì)囊胚形成的影響

李娜+韋靜

[摘要] 目的 探討體外受精胚胎細(xì)胞數(shù)量和碎片比例對(duì)囊胚形成的影響。 方法 選擇2016年1～10月柳州市工人醫(yī)院婦產(chǎn)科200例患者在體外受精后3 d得到的胚胎。根據(jù)囊胚數(shù)將其分為2～3c組（2～3個(gè)細(xì)胞），4c組（4個(gè)細(xì)胞），5c組（5個(gè)細(xì)胞），6c組（6個(gè)細(xì)胞），7c組（7個(gè)細(xì)胞），8c組（8個(gè)細(xì)胞），9c組（9個(gè)細(xì)胞），10c組（10個(gè)細(xì)胞），11c組（11個(gè)細(xì)胞），12c組（12個(gè)細(xì)胞），≥13c組（≥13個(gè)細(xì)胞）。分析胚胎移植時(shí)細(xì)胞數(shù)及碎片等級(jí)（碎片等級(jí)為1級(jí)，碎片率≤5%；2級(jí)：碎片率>5%～20%；3級(jí)：碎片率>20%～30%；4級(jí)：碎片率>30%）對(duì)囊胚質(zhì)量的影響。 結(jié)果 碎片等級(jí)1～2級(jí)的囊胚與3～4級(jí)的囊胚中，均為8 c組有效囊胚形成率與優(yōu)質(zhì)囊胚形成率最高（χ2=200.760、119.162、243.532、136.395，均P < 0.01）。 結(jié)論 在體外受精胚胎移植中，碎片等級(jí)1～2級(jí)與3～4級(jí)的均為8c組囊胚質(zhì)量最好，此結(jié)果對(duì)于指導(dǎo)選取高質(zhì)量胚胎具有參考價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 體外受精；胚胎細(xì)胞數(shù)量；碎片比例；囊胚形成

[中圖分類號(hào)] R711.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）12（c）-0093-05

[Abstract] Objective To investigate the effects of the number of in vitro fertilized embryos and the ratio of fragments on blastocyst formation. Methods From January to October 2016， 200 patients who underwent in vitro fertilization in Liuzhou Worker′s Hospital were given embryos 3 days after completion of fertilization， grouping of embryos according to the number of blastocysts， they were divided into 2-3c group （2-3 cells）， 4c group （4 cells）， 5c group （5 cells）， 6c group （6 cells）， 7c group （7 cells）， 8c group （8 cells）， 9c group （9 cells）， 10c group （10 cells）， 11c group （11 cells）， 12c group （12 cells）， more than 13c group （more than 13 cells）. Grading operations on fragments. The effect of cell number and fragmentation level （the fragmentation rate of grade 1 is less than 5%； the fragmentation rate of grade 2 is >5%-20%； the fragmentation rate of stage 3 is >20%-30%； and the fragmentation rate of grade 4 is higher than 30%.） on the quality of blastocysts during embryo transfer was analyzed. Results The effective blastocyst formation rate and the high quality blastocyst formation rate in 8c group were the highest， in the 1-2 grade fragment level of the blastula and the 3-4 fragment level of the blastula（χ2=200.760， 119.162， 243.532， 136.395， all P < 0.01）. Conclusion In in vitro fertilization embryo transfer， the level of grade 1-2 and grade 3-4 is all 8c group， and the quality of blastocyst is the best. This result has a reference value for guiding the selection of high-quality embryos.

[Key words] In vitro fertilization； Embryo cell number； Fragment ratio； Blastocyst formation

體外受精胚胎移植是精子與卵細(xì)胞在體外進(jìn)行受精，受精卵體外培養(yǎng)一段時(shí)間，將早期的胚胎移植到女性子宮內(nèi)繼續(xù)成長(zhǎng)發(fā)育，待胎兒發(fā)育成熟后正常分娩的輔助生殖技術(shù)[1-3]。臨床上多采取多個(gè)早期胚胎移植，但是提高移植成功率的同時(shí)導(dǎo)致多胎兒概率增加[4-5]。隨著生殖醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，體外受精胚胎移植技術(shù)也獲得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，如何保證移植胚胎的正常發(fā)育，有效避免多胎的發(fā)生是目前研究的重點(diǎn)[6-8]。如何有效檢測(cè)早期胚胎的質(zhì)量以及提高移植的成功率，是體外受精胚胎移植技術(shù)的主要問(wèn)題所在。近期的相關(guān)臨床研究發(fā)現(xiàn)，囊胚技術(shù)的應(yīng)用可以解決上述問(wèn)題，但是由于囊胚技術(shù)體外培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，如何有效檢測(cè)評(píng)估囊胚質(zhì)量，是胚胎移植成功的主要影響因素[9]。柳州市工人醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）婦產(chǎn)科通過(guò)測(cè)定胚胎的細(xì)胞數(shù)以及碎片數(shù)量對(duì)評(píng)估囊胚的發(fā)育潛能在臨床應(yīng)用中取得了較好臨床效果，筆者對(duì)我院婦產(chǎn)科200例體外受精胚胎移植患者的臨床資料進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下：endprint

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016年1～10月我院婦產(chǎn)科200例體外受精胚胎移植患者的臨床資料為研究對(duì)象，年齡21～34歲，平均年齡（27.51±5.52）歲，全部患者均簽訂我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)通過(guò)的科學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)象知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者年齡20～35歲，順利完成體外受精過(guò)程、受精卵在前3 d內(nèi)發(fā)育正常，觀察到有效囊胚形成的患者胚胎。排除標(biāo)準(zhǔn)：通過(guò)卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射技術(shù)（ICSI）進(jìn)行受精的胚胎；補(bǔ)救ICSI周期性的胚胎；第5日處于桑葚狀態(tài)即被移植或者冷凍的胚胎；受精成功胚胎未能良好發(fā)育的患者，移植胚胎超過(guò)卵裂期胚胎的患者；隨訪失敗或中途退出的患者。

1.2 研究方法

患者在月經(jīng)來(lái)潮的第2天在皮下注射激動(dòng)劑達(dá)必佳（Ferring GmbH，批號(hào)：H20140123）0.1 mg/d，在注射后第3天根據(jù)患者的年齡、基礎(chǔ)卵泡數(shù)量和基礎(chǔ)促卵泡激素水平給予促性腺激素，然后根據(jù)卵泡大小和激素水平調(diào)整用藥的劑量?；颊呃藐幍繠超對(duì)卵泡發(fā)育情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，當(dāng)有1～2個(gè)卵泡直徑超過(guò)18 mm時(shí)，給患者肌肉注射絨毛膜促性腺激素（HCG，麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司）10 000 U，在36 h之后經(jīng)超聲引導(dǎo)下行卵泡穿刺術(shù)，在直視顯微鏡下選取卵丘復(fù)合物，至于培養(yǎng)液中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)2～4 h后進(jìn)行體外受精，獲取受精卵后洗滌受精卵并至于G1培養(yǎng)液中，觀察受精卵分裂以及早期胚胎的發(fā)育情況，待第3天時(shí)胚胎不做移植或冷凍，所有胚胎均用于囊胚培養(yǎng)。

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)全部患者第3日胚胎移植時(shí)細(xì)胞數(shù)以及碎片數(shù)（碎片等級(jí)），對(duì)囊胚質(zhì)量分析。囊胚質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[10]。根據(jù)第3日時(shí)胚胎細(xì)胞數(shù)對(duì)所培養(yǎng)的囊胚進(jìn)行分組。胚胎細(xì)胞數(shù)2～3個(gè)細(xì)胞（2～3c組），4個(gè)細(xì)胞（4c組），5個(gè)細(xì)胞（5c組），6個(gè)細(xì)胞（6c組），7個(gè)細(xì)胞（7c組），8個(gè)細(xì)胞（8c組），9個(gè)細(xì)胞（9c組），10個(gè)細(xì)胞（10c組），11個(gè)細(xì)胞（11c組），12個(gè)細(xì)胞（12c組），≥13個(gè)細(xì)胞（≥13c組）。碎片等級(jí)[10]，1級(jí)：碎片率≤5%；2級(jí)：碎片率>5%～20%；3級(jí)：碎片率>20%～30%；4級(jí)：碎片率>30%。

1.4 質(zhì)量控制

所有的胚胎評(píng)估均由3名有經(jīng)驗(yàn)的胚胎工作者進(jìn)行同時(shí)評(píng)估，如果3人的意見(jiàn)不能統(tǒng)一，則利用無(wú)記名投票，少數(shù)服從多數(shù)的方式?jīng)Q定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 總體情況

在本次研究中共納入了3709個(gè)培養(yǎng)3 d的受精卵，其中碎片等級(jí)1～2級(jí)的為1788個(gè)，碎片等級(jí)3～4級(jí)的為1921個(gè)。

2.2 碎片等級(jí)1～2級(jí)的囊胚形成情況比較

碎片等級(jí)1～2級(jí)的囊胚質(zhì)量研究中，8c細(xì)胞組有效囊胚形成率（48.92%）、優(yōu)質(zhì)囊胚形成率較高（32.26%），其次分別為7c組、9c組早期胚胎，其囊胚質(zhì)量?jī)H次于8c組，也具有較好的有效囊胚形成率、優(yōu)質(zhì)囊胚形成率，各組之間的比較結(jié)果差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=200.760、119.162，均P < 0.01）。見(jiàn)表1～3。

2.3 碎片等級(jí)3～4級(jí)的囊胚形成情況

碎片等級(jí)3～4級(jí)的囊胚質(zhì)量研究中，8c細(xì)胞組有效囊胚形成率（52.43%）、優(yōu)質(zhì)囊胚形成率較高（34.59%），其次分別為9c組、10c組早期胚胎，其囊胚質(zhì)量?jī)H次于8c組，也具有較好的有效囊胚形成率、優(yōu)質(zhì)囊胚形成率，各組之間的比較結(jié)果差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=243.532、136.395，均P < 0.01）。見(jiàn)表4～6。

3 討論

輔助生殖技術(shù)的應(yīng)用中，如何有效地保證胎兒的健康以及正常發(fā)育，是目前研究重點(diǎn)，移植胚胎的質(zhì)量是保證輔助生殖成功的關(guān)鍵[11-13]。在大量的臨床報(bào)道中可以發(fā)現(xiàn)，輔助生殖技術(shù)失敗的受孕者，其主要原因是胚胎質(zhì)量較差。臨床上多采用檢測(cè)早期胚胎的細(xì)胞數(shù)以及碎片比例來(lái)選取健康、成功率高的胚胎進(jìn)行移植。

碎片是受精卵體外發(fā)育時(shí)的一種常見(jiàn)現(xiàn)象，可能是受精卵對(duì)外界環(huán)境刺激的毒性反應(yīng)，細(xì)胞凋亡的數(shù)量越多，導(dǎo)致碎片生成的比例越高[14]。因此，根據(jù)碎片的多少進(jìn)行分級(jí)，常用的為碎片比例四級(jí)分級(jí)，碎片比例高的胚胎活性低，植入后存活率低，而且導(dǎo)致的畸胎率也較高[15]。

在本次研究中筆者通過(guò)研究不同組別細(xì)胞數(shù)的早期胚胎囊胚發(fā)育情況后發(fā)現(xiàn)，在碎片等級(jí)為1～2級(jí)的胚胎中，8c細(xì)胞組的早期胚胎，其囊胚質(zhì)量好，有效囊胚形成率、優(yōu)質(zhì)囊胚形成率均較高，植入后的發(fā)育成功率應(yīng)該較高，其次在無(wú)8c數(shù)的胚胎時(shí)可以選取囊胚質(zhì)量次級(jí)的7c組胚胎。在對(duì)碎片等級(jí)3～4級(jí)的囊胚質(zhì)量研究中，本研究發(fā)現(xiàn)，8c細(xì)胞組的早期胚胎，仍然是有效囊胚形成率、優(yōu)質(zhì)囊胚形成率較高的早期胚胎，但是無(wú)8c組細(xì)胞時(shí)，其次選取組別為9c組早期胚胎，其囊胚質(zhì)量?jī)H次于8c組。

由于輔助生殖技術(shù)其技術(shù)含量較高，體外受精以及體外培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、培養(yǎng)過(guò)程復(fù)雜，在實(shí)際應(yīng)用中，各種因素均可能影響胚胎的發(fā)育以及囊胚的質(zhì)量[15-16]。為提高受孕成功率以及保證胎兒的安全，必須早期對(duì)植入胚胎進(jìn)行科學(xué)有效的評(píng)估。通過(guò)分析早期胚胎的細(xì)胞數(shù)以及胚胎碎片等級(jí)，作為常用的無(wú)創(chuàng)性胚胎質(zhì)量評(píng)估手段，在其應(yīng)用中可以對(duì)早期胚胎進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估[17]。本研究選取的研究對(duì)象數(shù)量有限，而且研究的時(shí)間就截止到受精卵培養(yǎng)后的3 d，在受精卵置入子宮后，是否成功妊娠以及妊娠的結(jié)局并沒(méi)有進(jìn)行跟蹤調(diào)查，所以本研究分析結(jié)果尚需要進(jìn)一步的驗(yàn)證完善，但對(duì)比既往類似研究可以發(fā)現(xiàn)本研究結(jié)果具有一定的科學(xué)性，在臨床中具有一定的參考意義。endprint

綜上所述，在體外受精胚胎移植技術(shù)中，通過(guò)分析檢測(cè)胚胎細(xì)胞數(shù)量以及碎片分級(jí)可以有效分析囊胚形成的質(zhì)量，細(xì)胞數(shù)量與有效胚囊形成率，優(yōu)質(zhì)胚囊形成率之間的數(shù)據(jù)具有相關(guān)性，其中碎片等級(jí)1～2級(jí)的以8c組囊胚質(zhì)量最好，其次為7c組，碎片等級(jí)3～4級(jí)的以8c組囊胚質(zhì)量最好，其次為9細(xì)胞組。

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（收稿日期：2017-09-30 本文編輯：任 念）endprint