犢牛致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

高祥軍

摘要：目的：為確診青海省民和縣某奶牛場致犢牛腹瀉病死的病原菌以及敏感藥物。方法：對病死犢牛進(jìn)行尸體剖檢，采集樣本進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定、生化試驗、藥物敏感性試驗。結(jié)果：在犢牛腸道內(nèi)檢測到一種溶血性大腸桿菌，藥敏實驗結(jié)果對頭孢類抗生素敏感。結(jié)論，XX地區(qū)奶牛養(yǎng)殖場引起犢牛病死的致病菌為大腸桿菌，對頭孢類藥物敏感，該牧場可用頭孢類藥物對致犢牛腹瀉類疾病進(jìn)行預(yù)防和治療。

關(guān)鍵詞：犢牛;致病性大腸桿菌;分離鑒定;藥敏試驗

中圖分類號：S858.23 ? 文獻(xiàn)識別碼：A

大腸桿菌作為一種革蘭氏陰性菌，廣泛的存在于環(huán)境中，在不同的條件下可以加引起疾病的發(fā)生。牛大腸桿菌可經(jīng)過消化道、生殖系統(tǒng)等方面感染，且對于犢牛傷害十分嚴(yán)重[1]。大腸桿菌主要表現(xiàn)為引起腹瀉、敗血癥、痢疾、腸毒血癥嚴(yán)重者幾小時或者1天內(nèi)死亡[2]。大腸桿菌對于成年牛傷害較小，不會引起很高的死亡率，主要表現(xiàn)為乳房炎，產(chǎn)奶量下降等癥狀。大腸桿菌作為腸道的常在菌，是各種原因綜合引起的疾病，所以在飼養(yǎng)的過程中要加強(qiáng)管理，發(fā)生疾病以后要盡快進(jìn)行相應(yīng)的處理，做到早發(fā)現(xiàn)、早預(yù)防、早治療，采取必要的措施[3]。2021年11月XX地區(qū)發(fā)生了犢牛腹瀉致死的情況，本試驗通過對病死犢牛進(jìn)行病原分離鑒定以及藥物敏感性試驗，為XX地區(qū)的養(yǎng)牛業(yè)更好的發(fā)展提供有力的保障。

1 材料和方法

1.1病料

病料采集于青海省民和縣地區(qū)某奶牛養(yǎng)殖場。

1.2 采樣

無菌環(huán)境下采集青海省民和縣地區(qū)某奶牛養(yǎng)殖場致死犢牛的肝、肺、脾、腸道。肝、肺、脾取病變與健康交界處的樣本，腸道進(jìn)行結(jié)扎保存，保存于無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，保存與4℃環(huán)境內(nèi)盡快進(jìn)行分離培養(yǎng)。

1.3 試驗材料

無菌培養(yǎng)皿、載玻片、血平板、藥敏片、革蘭氏染色劑、生化試驗試劑盒。

1.4 細(xì)菌培養(yǎng)

無菌環(huán)境下，用酒精棉對樣本表面進(jìn)行消毒，取出表皮后用剪刀切取1cm*1cm的組織塊，鑷子夾取組織塊均勻涂抹于血平板上，腸道樣本用接菌環(huán)蘸取樣本均勻的在血平板進(jìn)行劃線。倒置放于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16小時，觀察菌落形態(tài)。

1.5 細(xì)菌染色

無菌環(huán)境內(nèi)，用接菌環(huán)將菌落挑至滴有生理鹽水的載玻片上，酒精燈輕烤載玻片，固定完成后，即可進(jìn)行革蘭氏染色，分別草酸銨結(jié)晶紫染色1min，清水沖洗干凈后碘液染色1min，無水乙醇脫色30s，沙黃復(fù)染30秒后進(jìn)行鏡檢。

1.6 細(xì)菌鑒定

顯微鏡觀察染色后的菌體形態(tài)，對菌種進(jìn)行初步的判定。

1.7 生化試驗

根據(jù)鏡檢結(jié)果結(jié)合臨床經(jīng)驗，選擇適當(dāng)?shù)纳噭?7℃培養(yǎng)36h觀察生化管的變化。

1.8 藥敏試驗

將純化后的細(xì)菌均勻涂布于血平板上，貼藥敏片，37℃培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離結(jié)果

血平板培養(yǎng)的結(jié)果顯示，接種肝、肺、脾、腸道病料中，只有接種腸道內(nèi)容物的血平板觀察到長了溶血性的菌落，菌落形態(tài)為灰白色、四周光滑、像水珠狀，散發(fā)出特殊的氣味，鏡檢結(jié)果顯示染色后細(xì)菌為革蘭氏陰性菌，短桿狀，個別為球狀或長絲狀?？沙醪脚卸榇竽c桿菌。

2.2 生化試驗結(jié)果

將細(xì)菌接種于生化管內(nèi)可以觀察到該類細(xì)菌可以引起葡萄糖、乳酸、麥芽糖、甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，木糖、山梨醇、阿拉伯糖、硝酸鹽陽性產(chǎn)酸、其他幾類為陰性，對比生化試驗結(jié)果顯示該種細(xì)菌符合大腸桿菌生化特征。

2.3藥敏試驗

2.4 藥敏試驗結(jié)果

對分離出的大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗，結(jié)果顯示對頭孢噻肟、頭孢曲松敏感、對阿奇霉素、多西環(huán)素中度敏感，對環(huán)丙沙星、恩諾沙星 、鏈霉素耐藥。結(jié)果見表2

3 討論

致病性大腸桿菌對于犢牛的傷害十分的嚴(yán)重，且隨著疾病發(fā)生的增多，發(fā)生了很多耐藥的情況。2015年普紹林等[4]在云南分離到一株致犢牛腹瀉的大腸桿菌并進(jìn)行了藥敏試驗，結(jié)果顯示該細(xì)菌對小鼠具有很高得致病性，且對環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、頭孢噻肟、頭孢哌啶、頭孢吡啶、頭孢曲松鈉高度敏感。2016年劉少昆[5]對北京、天津部分地區(qū)的致牛腹瀉大腸桿菌進(jìn)行分離鑒定，并對其耐藥性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示天津、北京地區(qū)致病株對諾氟沙星耐藥率最高，分別達(dá)到100%和86.67%。2017年岳山[6]對于黑龍江部分地區(qū)肉牛大腸桿菌的耐藥性進(jìn)行調(diào)查結(jié)果顯示多重耐藥性較為普遍，對青霉素、氨芐西林、四環(huán)素、甲氧芐啶等藥物具有較強(qiáng)的耐藥。

本試驗檢測結(jié)果顯示該奶牛場引起犢牛腹瀉的主要致病菌為大腸桿菌，藥敏試驗顯示該細(xì)菌對頭孢噻肟、頭孢曲松具有較強(qiáng)的敏感、對環(huán)丙沙星、恩諾沙星、鏈霉素耐藥。該牧場可選用頭孢類藥物對該病進(jìn)行有效的防治。為了減少耐藥性的發(fā)生，希望大家能夠精準(zhǔn)用藥，避免濫用藥，高效的防治疾病的發(fā)生，為養(yǎng)牛事業(yè)的發(fā)展提供一份力量。

參考文獻(xiàn)：

[1]嚴(yán)勇，李新圃，武小虎，丁學(xué)智，嚴(yán)作廷，王勝義，李宏勝，王旭榮.牛源大腸桿菌研究進(jìn)展[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2020，39（05）：35-41.

[2]崔銀雪，敖日格樂，王純潔，斯木吉德，阿日查，何利娜，張劍，劉波，張晨.致病性大腸桿菌誘發(fā)腹瀉對犢牛早期腸道黏膜通透性及免疫功能的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2020（23）：16-19+27.

[3]趙玉印，姜茹.新生牛犢腹瀉大腸桿菌的分離和診治[J].養(yǎng)殖與飼料，2021，20（02）：69-70.

[4]普紹林，石於友，李美荃，宋聰，劉寧，楊榮麗，姚俊.致犢牛腹瀉大腸桿菌云南株的分離鑒定及藥敏試驗[J].云南畜牧獸醫(yī)，2015（03）：1-4.

[5]劉少昆. 京津部分地區(qū)犢牛腹瀉大腸桿菌分離鑒定及耐藥性分析[D].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.

[6]岳山. 黑龍江部分地區(qū)肉牛大腸桿菌耐藥基因與毒力基因檢測及耐藥性分析[D].黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，2017.