平臥菊三七各提取物抗痛風作用的實驗研究*

★ 許溪何鹿玲 王木蘭 龔琴 馮育林, 楊世林 李 俊,***

(1.中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心 南昌330006 ；2.江西中醫(yī)藥大學 南昌330004)

平臥菊三七(gynura procumbens)性平，味甘淡，為菊科(compositae)三七屬(gynura cass)多年生藥食兼可的獨特草本植物，又被稱為神仙草、續(xù)命草，據(jù)歷史記載：平臥菊三七具有通經(jīng)活絡、消炎止咳、散瘀消腫以及活血生肌等功效，主治跌打損傷、風濕關節(jié)痛和痛風[1]。

經(jīng)安全性評價研究表明，平臥菊三七是一種無毒級的優(yōu)質(zhì)特種保健蔬菜，根莖是中成藥上佳的原材料[2]；經(jīng)營養(yǎng)和化學分析發(fā)現(xiàn)，平臥菊三七富含有機鈣，是中老年人最佳的補鈣綠色食品[3]；平臥菊三七含有豐富的有機酸成分，如新氯原酸具有很好的抗病毒和增強人體免疫力功效，對酒精性肝病相關并發(fā)癥有顯著的作用[4-6]；有文獻報道，經(jīng)過多方面、長時間的考察研究，很多專家及學者發(fā)現(xiàn)該屬植物多含生物堿，黃酮，倍半萜類活性等成分，具有止血，調(diào)節(jié)血糖血壓、促進骨頭愈合、抗炎、抗腫瘤等功效[7-9]。查閱大量文獻發(fā)現(xiàn)，關于其具有抗痛風藥理作用并未見相關報道，故本實驗以平臥菊三七抗痛風作用為出發(fā)點，進行藥效學相關系列的研究，為其臨床應用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物 平臥菊三七水提物(批號：Z20161201，得率：22.27%)、醇提物(批號：Z20161202，得率：11.55%)、水提醇沉物(批號：W20161203，得率：0.82%)，由中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心保健品事業(yè)部提供；別嘌醇，上海信宜萬象藥業(yè)，批號：05150603；復方乙酰水楊酸(遠大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號：131006；吲哚美辛腸溶片，山西云鵬制藥有限公司，批號：A150201；臨用前用Millipore純水配置所需濃度。

1.2 動物 SPF級雄性昆明小鼠，16～18g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK(京)2012-0001。所有動物自由進食、飲水，適應性喂養(yǎng)一周后用于實驗。

1.3 試劑 羧甲基纖維素鈉300-800(CMC-Na)，上海展云化工有限公司，分析純，批號20150315，純水配制；氧嗪酸鉀，sigma，批號：BCBN6836V，用0.5%CMC-Na配制；生理鹽水(0.9%氯化鈉注射液)，江西科倫藥業(yè)有限公司，批號：A16010404-2；冰醋酸，廣東光華科技股份有限公司，分析純，批號：20150701，生理鹽水配制；二甲苯，天津市福晨化學試劑廠，分析純，批號：20131202；尿酸試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號：20161124。

1.4 儀器 多功能酶標儀，美谷分子儀器(上海)有限公司，型號：SpectraMax i3。

1.5 方法

1.5.1 對氧嗪酸鉀所致高尿酸血癥小鼠的影響[10-11]將90只雄性昆明小鼠隨機分為9組：正常組，模型組，別嘌醇組，平臥菊三七水提取高、低劑量組，平臥菊三七醇提高、低劑量組，平臥菊三七水提醇沉高、低劑量組(平臥菊三七各提取物高、低劑量組分別為8000、4000mg生藥/kg)，每組10只動物；所有動物按體重連續(xù)灌胃5d，每天灌胃1次，正常組和模型組動物灌胃生理鹽水，別嘌醇組動物灌胃16.67mg/kg的別嘌醇，平臥菊三七各提取物組動物灌胃各對應藥液，灌胃體積均為0.2mL/kg；末次給藥前1h，除正常組動物腹腔注射等體積的0.5%CMC-Na外，其余各動物均腹腔注射450mg/kg氧嗪酸鉀進行高尿酸血癥模型的建立，腹腔注射體積均為0.2mL/kg；給藥后1h，自小鼠眼眶后靜脈叢采血約0.5mL，室溫放置1h，3500r/min離心10min，取血清，按照南京建成尿酸試劑盒說明書中的方法對各動物血清尿酸(SUA)水平進行檢測。

1.5.2 對冰醋酸所致小鼠扭體反應的影響[11-12]將80只雄性昆明小鼠隨機分為8組：模型組，復方乙酰水楊酸組，平臥菊三七水提取高、低劑量組，平臥菊三七醇提高、低劑量組，平臥菊三七水提醇沉高、低劑量組(平臥菊三七各提取物高、低劑量組分別為8000、4000mg生藥/kg)，每組10只動物，所有動物按體重連續(xù)灌胃5d，每天灌胃1次，模型組動物灌胃生理鹽水，復方乙酰水楊酸組動物灌胃405mg/kg的復方乙酰水楊酸(僅在最后一天給藥1次，此前每天灌胃等體積的生理鹽水)，平臥菊三七各提取物組動物灌胃各對應藥液，灌胃體積均為0.2mL/kg；末次給藥前所有動物禁食16h(不禁水)，給藥后1h，腹腔注射0.6%冰醋酸(現(xiàn)配現(xiàn)用)，0.2mL/只，并立即記錄動物造模后20min內(nèi)扭體次數(shù)。

1.5.3 對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響[12]將80只雄性昆明小鼠隨機分為8組：模型組，吲哚美辛組，平臥菊三七水提取高、低劑量組，平臥菊三七醇提高、低劑量組，平臥菊三七水提醇沉高、低劑量組(平臥菊三七各提取物高、低劑量組分別為8000、4000mg生藥/kg)，每組10只動物，所有動物按體重連續(xù)灌胃5d，每天灌胃1次，模型組動物灌胃生理鹽水，吲哚美辛組動物灌胃20mg/kg的吲哚美辛(僅在最后一天給藥1次，此前每天灌胃等體積的生理鹽水)，平臥菊三七各提取物組動物灌胃各對應藥液，灌胃體積均為0.2mL/kg；末次給藥前所有動物禁食16h(不禁水)，給藥后1h，用移液槍精準吸取二甲苯，涂至小鼠右耳前后兩面進行造模，50μL/只；造模1h后將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基線將各動物左右兩耳剪下，選取靠近耳沿處的同一部位，用6mm打孔器分別打下圓耳片，稱重并記錄，計算各動物耳腫脹度(兩耳質(zhì)量之差)。

2 結果

2.1 對氧嗪酸鉀所致高尿酸血癥小鼠的影響 由表1可見，模型組動物血清尿酸與正常組比較顯著性升高(P<0.05)，表示小鼠高尿酸血癥模型制備成功；與模型組相比較，所有給藥組動物血清尿酸水平呈降低現(xiàn)象，且平臥菊三七醇提高、低劑量(8000mg生藥/kg，4000mg生藥/kg)及別嘌醇(16.67mg/kg)組動物尿酸水平呈顯著性降低(P<0.05)。

由表2可見，模型組動物血清尿酸與正常組比較顯著性升高(P<0.01)，表示小鼠高尿酸血癥模型制備成功；與模型組相比較，除平臥菊三七水提物低劑量(4000mg生藥/kg)外，其他給藥組動物血清尿酸水平呈降低現(xiàn)象，且平臥菊三七水提物高劑量(8000mg生藥/kg)、平臥菊三七醇提低劑量(4000mg生藥/kg)及別嘌醇(16.67mg/kg)組動物尿酸水平呈顯著性降低(P<0.05或P<0.01)。

綜上可得，4000mg生藥/kg的平臥菊三七醇提物具有顯著性降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸作用(P<0.05)，且藥效重現(xiàn)性好，結果詳見表1和表2。

表1 平臥菊三七各提取物對氧嗪酸鉀所致高尿酸血癥 小鼠血清尿酸的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2 對冰醋酸所致小鼠扭體反應的影響 由表3可知，4000mg生藥/kg平臥菊三七水提物、4000mg生藥/kg平臥菊三七醇提物、以及4000mg生藥/kg和8000mg生藥/kg平臥菊三七水提醇沉物能明顯減少由冰醋酸刺激所引起的小鼠扭體個數(shù)(P<0.01或P<0.05)，提示不同劑量的平臥菊三七各提取物對外周化學性刺激引起的疼痛均表現(xiàn)出不同程度的明顯的鎮(zhèn)痛作用。

表2 平臥菊三七各提取物對氧嗪酸鉀所致高尿酸血癥 小鼠血清尿酸的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表3 平臥菊三七各提取物對醋酸所致小鼠扭體 反應的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 對二甲苯誘導小鼠耳腫脹的影響 由表4可知，4000mg生藥/kg平臥菊三七水提物、8000mg生藥/kg和4000mg生藥/kg平臥菊三七醇提物、以及4000mg生藥/kg平臥菊三七水提醇沉物均能顯著性降低二甲苯所致小鼠耳腫脹度(P<0.05)，表現(xiàn)出一定的抗炎作用。

表4 平臥菊三七對二甲苯誘導小鼠 耳腫脹的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

近年來，隨著社會的飛速發(fā)展，人民生活水平也得到了火速般的提高，飲食結構也隨之發(fā)生了翻天覆地的改變，從過去的粗茶淡飯到如今的大魚大肉，生活越來越富裕了，健康問題卻越來越多了，脂肪、蛋白質(zhì)以及糖分等的過量攝入，導致人體代謝紊亂，人體機能朝著畸形的方向發(fā)展，肥胖癥、高脂血癥、高血壓病、糖尿病、動脈粥樣硬化等疾病比比皆是、隨處可見，而痛風(gout)正是一種由于長期嘌呤代謝紊亂、機體產(chǎn)生過多尿酸及(或)體內(nèi)尿酸排泄減少，并在體內(nèi)蓄積沉淀所致的代謝性疾病，并且有研究表明，高尿酸血癥及原發(fā)性痛風與肥胖癥、高脂血癥、高血壓病、糖尿病、動脈粥樣硬化等疾病呈顯著正相關[13-15]。故痛風(gout)及高尿酸血癥(hyperuricemia)患病率也呈逐年上升的趨勢[16]。

痛風的臨床特點是高尿酸血癥(hyperuricemia)、痛風性急性關節(jié)炎反復發(fā)作、痛風石沉積、特征性慢性關節(jié)炎和關節(jié)畸形，常累及腎臟引起慢性間質(zhì)性腎炎和形成腎尿酸結石等臨床癥狀[17]。高尿酸血癥是痛風的發(fā)病基礎，疼痛性關節(jié)炎是其特征表現(xiàn)，腎臟損傷是發(fā)展趨勢，因此，不難看出，要防治痛風的發(fā)作，主要還是應該從三方面著手：糾正高尿酸血癥、迅速緩解疼痛、處理痛風發(fā)作時的炎癥。

根據(jù)以上特點，本研究采用了腹腔注射尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀所致高尿酸血癥小鼠模型、腹腔注射冰醋酸所致小鼠扭體反應模型以及直接涂抹二甲苯所致小鼠耳腫脹模型來研究平臥菊三七抗痛風藥效學作用。實驗結果證明，4000mg生藥/kg的平臥菊三七醇提物對氧嗪酸鉀所致的高尿酸血癥小鼠血清尿酸具有明顯的降低作用，且藥效重現(xiàn)性好，提示其可從根本上防治痛風，此研究為首次報道平臥菊三七具有降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸的藥理作用。另外，4000mg生藥/kg平臥菊三七水提物、4000mg生藥/kg平臥菊三七醇提物、以及8000mg生藥/kg和4000mg生藥/kg平臥菊三七水提醇沉物能明顯可明顯減少醋酸致小鼠扭體個數(shù)，且4000mg生藥/kg平臥菊三七水提物、8000mg生藥/kg和4000mg生藥/kg平臥菊三七醇提物、以及4000mg生藥/kg平臥菊三七水提醇沉物對二甲苯致小鼠耳腫脹有顯著性抑制作用，表現(xiàn)出明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，提示其對痛風發(fā)作時的炎癥和疼痛反應有一定的改善作用。綜上，4000mg生藥/kg的平臥菊三七醇提物具有良好的抗痛風作用，可謂標本兼治，也為其在將來的臨床應用提供了有利的實驗基礎和科學依據(jù)。

痛風，可以說，是一種終身性疾病，一般情況下，如果無腎功能損害、或關節(jié)畸形者，經(jīng)過常規(guī)的有效治療后，都能維持正常生活和工作，也不會影響壽命。但如果治療不當，其急性關節(jié)炎的反復發(fā)作就可引起人體本身較大的痛苦，更有關節(jié)畸形和腎石病患者，生活質(zhì)量往往就受到一定的影響，況且，腎功能損害嚴重者，其預后一般情況下都較差，因此，對于這種嚴重危害人類健康的代謝性疾病，什么階段應該運用什么藥物來治療很關鍵，同時還應配合合理的飲食結構、適量運動。目前，可用于治療痛風的藥物有很多，但主要還是依賴于競爭性XO抑制劑別嘌醇、非競爭性XO抑制劑非布司他以及促尿酸排泄藥丙磺舒、苯溴馬隆等，這些藥物多為20世紀50年代研制的產(chǎn)品，且毒副作用大，特別是腎功能損害嚴重的痛風患者，常常不能耐受，所以在一定程度上限制了這些藥物的使用[18]。因此，在目前，尋找出一個具有高效低毒性質(zhì)的新型抗痛風藥物，是藥學研究的一個熱點，更是一項重任，綜觀歷史，我國用中草藥治療痛風病也是有悠久的歷史，其中很多藥物都有成熟的研究論證和臨床試驗總結報道，如加味四妙丸、復方威茯顆粒、茶樹根等等[19-21]，目前，本研究也初步證實了4000mg生藥/kg的平臥菊三七醇提物具有良好的抗痛風作用，而且安全無毒，但鑒于中藥作用的性質(zhì)為多途徑、多靶點、多環(huán)節(jié)，平臥菊三七抗痛風的具體作用機制及物質(zhì)基礎還有待進一步的深入研究和完善。

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