西紅康治療早期糖尿病腎病的實驗研究

玉山江?艾克木

【摘要】 目的：探討西紅康治療早期糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）的實驗研究。方法：62只大鼠中選取50只進行腎切除并一次性腹腔注射50 mg/kg鏈脲佐菌素（STZ）復(fù)制DN大鼠模型，48只造模成功并隨機分為模型組、西紅康組、開博通組、糖適平組，其余不做任何處理的為正常對照組，每組各12只，連續(xù)給藥4周，檢測并記錄大鼠血糖、24 h尿蛋白、腎重/體重、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、脂聯(lián)素及E-選擇素含量。結(jié)果：模型組24 h尿蛋白、腎重/體重、HbA1c、Scr、BUN、血糖、TC、TG、LDL-C、脂聯(lián)素及E-選擇素含量均較正常對照組升高（P<0.01），HDL-C含量較正常對照組降低（P<0.01）；西紅康組、開博通組、糖適平組的24 h尿蛋白、腎重/體重、HbA1c、Scr、BUN、血糖、TC、TG、LDL-C、脂聯(lián)素及E-選擇素含量均較模型組降低（P<0.01），HDL-C含量較模型組升高（P<0.01）。結(jié)論：西紅康能夠通過降低DN大鼠尿蛋白、血糖及血脂水平，減少脂聯(lián)素分泌及E-選擇素表達，進而延緩DN大鼠發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】 西紅康； 糖尿病腎??； 大鼠； 脂聯(lián)素； E-選擇素

【Abstract】 Objective：To explore experimental study on xihongkang in treatment of early diabetic nephropathy（diabetic nephropathy，DN）.Method：In 62 rats，50 rats were selected for nephrectomy and intraperitoneal injection of 50 mg/kg streptozotocin（STZ） to replicate the DN rat model，48 rats were randomly divided into model group，xihongkang group，captopril group，gliguidone group，the other without any treatment as normal control group，12 rats in each group，administered continuously for 4 weeks.The concentration of blood glucose，24 h urine protein，kidney weight/body weight，blood urea nitrogen（BUN），creatinine（Scr），glycosylated hemoglobin（HbA1c），total cholesterol（TC），triglyceride（TG），low density lipoprotein cholesterol（LDL-C），high density lipoprotein cholesterol（HDL-C），adiponectin and E-selectin was detected and recorded.Result：The contents of 24 h urine protein，kidney weight/body weight，HbA1c，Scr，BUN，blood glucose，TC，TG，LDL-C，adiponectin and E-selectin of model group were higher than those of normal control group（P<0.01），and HDL-C content was lower than that of normal control group（P<0.01）.The contents of 24 h urine protein，kidney weight/body weight，HbA1c，Scr，BUN，blood glucose，TC，TG，LDL-C，adiponectin and E-selectin of xihongkang group，captopril group，gliguidone group were lower than those of model group（P<0.01），and HDL-C content was higher than that of model group（P<0.01）.Conclusion：Xihongkang can reduce the DN rat urine protein，blood glucose and blood lipid levels，reduced adiponectin secretion and expression of E-selectin，and delay the development of DN rats.

【Key words】 Xihongkang； Diabetic nephropathy（DN）； Rats； Adiponectin； E-selectin

First-authors address：Affiliated Hospital of Chinese Medicine Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumqi 830000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.34.005

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病最為常見的微血管并發(fā)癥之一，是糖尿病患者死亡的首要原因，是進展為終末期腎病最為重要的原因[1-2]。近些來DN發(fā)病率呈上升趨勢，對患者身心健康造成嚴(yán)重影響，因此尋求對DN的早期診斷、治療將具有重要意義[3-5]。中醫(yī)認為DN屬于氣陰兩虛夾瘀證、脾腎兩虛證，根據(jù)此治療原則，本課題組經(jīng)過多年臨床研究獲得經(jīng)驗方-西紅康，此方具有益氣養(yǎng)陰，滋補肝腎，活血化瘀之功效，對DN患者有顯著治療作用[5-7]，但西紅康具體的作用機理尚未可知，因此本研究將復(fù)制DN大鼠模型，探討西紅康對DN大鼠血脂、血糖水平及脂聯(lián)素、E-選擇素含量的影響，為西紅康更深入的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。endprint

1 材料與方法

1.1 實驗動物 由新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供180～200 g的昆明雄性大鼠62只，在室溫（20±2）℃中分籠飼養(yǎng)。

1.2 主要試劑與儀器 西紅康（由黃芪、女貞子、水蛭、大黃、枸杞子、紅景天、西紅花組成）由中藥房提供，通過水煎并過濾濃縮成1 g/mL的生藥。卡托普利片（開博通）由中美上海施貴寶制藥廠提供；格列喹酮片（糖適平）由北京第六制藥廠提供；鏈脲佐菌素（STZ）購自美國sigma公司；大鼠脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒購自北京普爾生物科技有限公司；E-選擇素酶聯(lián)免疫吸附試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；FT-6自動計算機放射免疫測量儀購自北京核儀器廠；BECKMAN CX7全自動生化分析儀購自美國貝克曼公司；Sartorius精密電子天平購自北京賽多利斯天平有限公司；Accu-chek Advantage血糖儀購自德國羅氏公司。

1.3 模型的建立 采用10%水合氯醛麻醉大鼠后，將背部毛剪去，并消毒，做背部切口后在腹膜外切除右腎，左腎保留1/2。術(shù)后1周，按50 mg/kg的STZ腹腔注射大鼠造模，48 h取血，并留取24 h尿液。正常飼養(yǎng)2周后，測定血糖、尿蛋白、尿量，若血糖值>16.6 mmol/L、尿量>原尿量150%、尿蛋白排泄>30 mg/（kg·d），說明DN模型構(gòu)造成功，共有50只大鼠進行造模，其中48只造模成功并存活[8-10]。

1.4 分組及給藥 將造模成功的48只大鼠隨機分為模型組、西紅康組、開博通組、糖適平組，每組各12只。其中西紅康組大鼠每天給予藥粉1 g/kg；開博通組大鼠每天給予卡托普利片4.17 mg/kg；糖適平組每天給予格列喹酮片5 mg/kg；模型組每天給予等量生理鹽水；連續(xù)4周，每天灌胃1次。其余12只正常大鼠作為正常對照組，不做任何處理[10]。

1.5 標(biāo)本的制備及檢測 各組大鼠連續(xù)給藥4周，稱重后斷尾取血，室溫靜置1 h，3000 r/min離心10 min，取得上清液待測。采用全自動生化分析儀測定血清中尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。同時根據(jù)試劑盒說明書采用放射免疫法測定脂聯(lián)素含量，ELISA雙抗體夾心法測定可溶性E-選擇素含量；另外取腎組織，并稱重，計算腎組織與大鼠重量比值。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA）。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠生化指標(biāo)比較 模型組的24 h尿蛋白、腎重/體重、HbA1c、Scr及BUN含量均較正常對照組升高（P<0.01）；西紅康組、開博通組、糖適平組的腎24 h尿蛋白、腎重/體重、HbA1c、Scr及BUN含量均較模型組降低（P<0.01）。見表1。

2.2 各組大鼠血糖、血脂水平比較 模型組的血糖、TC、TG及LDL-C含量均較正常對照組升高（P<0.01），HDL-C含量較正常對照組降低（P<0.01）；西紅康組、開博通組、糖適平組的血糖、TC、TG及LDL-C含量均較模型組降低（P<0.01），HDL-C含量較模型組升高（P<0.01）。見表2。

2.3 各組大鼠血清中脂聯(lián)素及E-選擇素含量比較 模型組的脂聯(lián)素及E-選擇素含量均較正常對照組升高（P<0.01）；西紅康組、開博通組、糖適平組的脂聯(lián)素及E-選擇素含量均較模型組降低（P<0.01）。見表3。

3 討論

祖國醫(yī)學(xué)認為“本虛標(biāo)實”是DN的基本病機，應(yīng)從氣因兩虛論治，采用“益氣養(yǎng)陰”“滋陰補腎”“活血化瘀”等進行治療[5，11-12]，本課題組根據(jù)此原則并結(jié)合多年臨床經(jīng)驗擬定了西紅康方對DN患者進行治療，取得良好效果，能夠顯著提高患者生活質(zhì)量，為中醫(yī)治療DN開辟新思路和方法[5-7]，但具體機理未知，因此本研究將對此展開探討。本研究首先參考相關(guān)文獻[8-10]，將大鼠右腎切除并一次性注射STZ復(fù)制DN模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血糖值>16.6 mmol/L、尿量>原尿量150%、尿蛋白排泄>30 mg/（kg·d），說明DN模型構(gòu)造成功，且有48只大鼠存活，存活率高。接著探討西紅康對DN大鼠的治療作用，并選取開博通及糖適平作為陽性對照。研究結(jié)果顯示，模型組的24 h尿蛋白、腎重/體重、HbA1c、Scr及BUN含量均較正常對照組升高（P<0.01）；西紅康組、開博通組、糖適平組的腎24 h尿蛋白、腎重/體重、HbA1c、Scr及BUN含量均較模型組降低（P<0.01）。表明西紅康能顯著的降低24 h尿蛋白、腎重/體重、HbA1c、Scr及BUN含量，提示西紅康具有降低DN大鼠尿蛋白，改善腎功能的作用，與西紅康的臨床應(yīng)用效果一致[6-7]。另外DN伴隨著糖脂代謝的異常，高脂血癥加速了大血管動脈粥樣硬化的發(fā)生，促進了糖尿病腎小球的硬化[3-4]。血脂中高含量的TG、TC、LDH-C，低含量的HDL-C會導(dǎo)致機體凝血異常，產(chǎn)生血栓，形成動脈粥樣硬化，促進腎小球硬化，同時高糖條件下的糖基化終末產(chǎn)物的聚集也嚴(yán)重損害腎組織[3-4，13]。因此本研究進一步的探討西紅康對DN大鼠血糖及血脂水平的影響，結(jié)果顯示，模型組的血糖、TC、TG及LDL-C含量均較正常對照組升高（P<0.01），HDL-C含量較正常對照組降低（P<0.01）；西紅康組、開博通組、糖適平組的血糖、TC、TG及LDL-C含量均較模型組降低（P<0.01），HDL-C含量較模型組升高（P<0.01）。表明西紅康能顯著的降低血糖、TG、TC、LDH-C含量，升高HDL-C含量，提示西紅康能夠通過降糖、降血脂進而延緩DN大鼠的病情發(fā)展。endprint

脂聯(lián)素是1995年Scherer等從小鼠脂肪細胞中分離出來的一種活性因子，是脂肪組織在人體血漿中最為豐富的蛋白，是迄今為止當(dāng)脂肪容量增大而分泌量反而減少的脂肪因子。脂聯(lián)素位于染色體的3q27上，有2種受體，具有抗炎、抗動脈粥樣硬化、抗氧化、改善胰島素抵抗、調(diào)節(jié)血糖血脂等作用[14-15]。臨床研究證實，脂聯(lián)素水平與DN患者內(nèi)皮損傷程度、尿蛋白等病情進展密切相關(guān)，檢測DN血漿中脂聯(lián)素的表達，能一定程度的反映DN的病情[16-17]。因此本研究進一步的探討西紅康對DN大鼠血漿中脂聯(lián)素水平的影響，結(jié)果顯示，模型組的脂聯(lián)素含量較正常對照組升高（P<0.01）；西紅康組、開博通組、糖適平組的脂聯(lián)素含量均較模型組降低（P<0.01）。表明西紅康能顯著的降低DN大鼠血漿中脂聯(lián)素含量，提示西紅康可能通過抑制脂聯(lián)素分泌，提高胰島素抵抗，進而降低血糖、血脂，最終延緩DN的發(fā)展。

E-選擇素是選擇素家族的一員，是一種分子量107～115 kDa的細胞表面糖蛋白，是介導(dǎo)白細胞與內(nèi)皮細胞粘附最為主要的粘附分子。E-選擇素表達量的升高能夠直接錨定白細胞，使白細胞活化，向內(nèi)皮細胞表面滾動、附著及粘附等，進而使內(nèi)皮細胞活化，產(chǎn)生白介素、白三烯等炎癥因子，損傷內(nèi)皮細胞，并且使單核細胞、中性粒細胞等炎癥細胞浸潤腎小球、腎小管間質(zhì)，加速DN的發(fā)生發(fā)展[18-20]。因此E-選擇素作為促炎因子的一種，在DN的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，本研究將進一步探討西紅康對DN大鼠血清中E-選擇素含量的影響，結(jié)果顯示，模型組E-選擇素含量較正常對照組升高（P<0.01）；西紅康組、開博通組、糖適平組E-選擇素含量均較模型組降低（P<0.01）。表明西紅康能夠顯著降低DN大鼠血清中E-選擇素含量，提示西紅康可能通過降低E-選擇素含量，發(fā)揮抗炎作用，進而延緩DN大鼠的發(fā)展。

綜上所述，西紅康能夠通過降低DN大鼠尿蛋白、血糖及血脂水平，減少脂聯(lián)素分泌及E-選擇素表達，進而延緩DN大鼠發(fā)展。

參考文獻

[1] Tang H J，Tian Z G，Yang X，et al.Cell-based therapies for experimental diabetic nephropathy：a systematic review and meta-analysis[J].J Biol Regul Homeost Agents，2016，30（4）：1047-1051.

[2] Din U A A S E，Salem M M，Abdulazim D O.Diabetic nephropathy： Time to withhold development and progression-A review[J].J Adv Res，2017，8（4）：363-373.

[3]呂萌，胡高云，涂志軍，等.糖尿病腎病的發(fā)病機制及抗糖尿病腎病化合物的研究進展[J].中國新藥雜志，2014，23（10）：1139-1145.

[4]李敏州，高彥彬，馬鳴飛，等.糖尿病腎病發(fā)病機制研究進展[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18（22）：344-349.

[5]陳銳，聶海洋，陳錦英，等.糖尿病腎病機制的中西醫(yī)研究進展[J].中國老年學(xué)雜志，2014，34（22）：6515-6517.

[6]馮程程，玉山江.西紅康治療糖尿病腎病氣陰兩虛兼血瘀的療效觀察[J].臨床合理用藥雜志，2012，5（9）：73-74.

[7]玉山江·艾克木，哈麗達·木沙.西紅康對糖尿病腎病Ⅲ期患者同型半胱氨酸水平的影響[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2015，21（2）：189-191.

[8]陳曦，趙怡蕊.芪術(shù)膠囊對糖尿病腎病大鼠的影響研究[J].中國中醫(yī)急癥，2016，25（11）：2081-2082.

[9]馬旭，邵鳳明.替米沙坦對糖尿病大鼠腎臟表達E-選擇素的影響[J].中國老年學(xué)雜志，2013，33（6）：1344-1346.

[10]康靜蕊，玉山江·艾克木.西紅康對實驗性糖尿病腎病大鼠腎臟結(jié)構(gòu)和功能的影響[J].安徽醫(yī)藥，2015，19（1）：35-38.

[11]黎霧峰，路建饒，王新華，等.中醫(yī)辨治糖尿病腎病炎癥狀態(tài)的研究進展[J].上海中醫(yī)藥雜志，2014，48（2）：91-93.

[12]陸世龍，王龍龍，黃國東.中醫(yī)藥治療早期糖尿病腎病的研究進展[J].遼寧中醫(yī)雜志，2016，24（5）：1101-1103.

[13]姚藍，張雨潔，王健，等.高脂高糖與低劑量鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠模型的建立[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2017，14（17）：12-15.

[14] Nurnazahiah A，Lua P L，Shahril M R.Adiponectin，Leptin and Objectively Measured Physical Activity in Adults：A Narrative Review[J].Malays J Med Sci，2016，23（6）：7-24.

[15] Zhu J，Guo B，Gan X，et al.Association of circulating leptin and adiponectin with periodontitis：a systematic review and meta-analysis[J].BMC Oral Health，2017，17（1）：104.

[16]郭文榮，李興.糖尿病腎病與ADPN、TGF-β1、Collagen Ⅳ、ICAM-1關(guān)系的研究進展[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2015，44（6）：170-173.

[17]劉坤，高志敏，李興.脂聯(lián)素與2型糖尿病及其血管并發(fā)癥關(guān)系的研究進展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2012，18（1）：126-129.

[18] Navarro-González J F，Mora-Fernández C，Muros de Fuentes M，et al.Inflammatory molecules and pathways in the pathogenesis of diabetic nephropathy[J].Nat Rev Nephrol，2011，7（6）：327-340.

[19] Alkhalaf A，Kleefstra N，Groenier K H，et al.Effect of benfotiamine on advanced glycation endproducts and markers of endothelial dysfunction and inflammation in diabetic nephropathy[J].PLoS One，2012，7（7）：e4 0427.

[20]陳斌，陳峻，胡必成.DM2患者血清CysC、β2-m及sE-selectin檢測的臨床意義[J].放射免疫學(xué)雜志，2013，26（3）：360-361.

（收稿日期：2017-11-02） （本文編輯：董悅）endprint