杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞生產性能、蛋品質、蛋黃膽固醇含量及血清抗氧化指標的影響

劉青翠 彭 翔 張俊平 唐守營 武書庚

(1.中國農業(yè)科學院飼料研究所，農業(yè)部飼料生物技術重點開放實驗室，生物飼料開發(fā)國家工程研究中心，北京 100081；2.北京挑戰(zhàn)牧業(yè)科技股份有限公司，北京 100081)

隨著我國經濟的發(fā)展，居民生活水平的提高，人們對綠色、安全、無抗雞蛋的需求日益增加。蛋雞養(yǎng)殖中，常因飼養(yǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)管理、營養(yǎng)水平差等導致蛋雞生產潛能得不到充分發(fā)揮，養(yǎng)殖戶往往忽視產蛋后期蛋雞生產性能及蛋品質；隨著蛋雞周齡的增加以及營養(yǎng)、環(huán)境、疾病等因子影響的積累，導致蛋殼破損嚴重，蛋殼表面殘留大量可見和不可見的糞污等，雞蛋易被微生物污染，蛋雞機體抗氧化能力及抗病力逐漸下降。

中草藥制劑能調整器官功能，使機體保持良好的抗病力，且無耐藥性。杜仲是一種天然草藥，資源豐富，已列入飼料添加劑目錄，其富含綠原酸、黃酮類化合物、多糖等，具有抑菌、抗應激、抗氧化、清除自由基、增加消化酶分泌、促進生長和改善肉質等功效。杜仲葉提取物具有天然、多功能、生物安全等特點。杜仲葉提取物中的綠原酸、京尼平苷可促進膽汁分泌；黃酮類化合物可促進成骨細胞增殖，加速成骨細胞分化和礦化[1-2]。杜仲葉中的皂苷、生物堿、多糖等可增強免疫細胞功能，活化免疫器官、免疫系統，促進抗體生成。研究發(fā)現，杜仲葉50%乙醇提取物顯著增強了小白鼠淋巴細胞轉化功能及巨噬細胞的吞噬能力，對正常小鼠脾臟抗體形成細胞無顯著影響[3]。針對蛋雞產蛋后期的生產性能下降和蛋品質差等問題，目前未見杜仲葉提取物的相關報道。因此，本試驗旨在研究飼糧中添加杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞生產性能、蛋品質、蛋黃膽固醇含量及血清抗氧化指標的影響，以期為產蛋后期蛋雞健康和配制蛋品質改善型蛋雞飼糧提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

杜仲葉提取物購自山東龍昌動物保健品有限公司，含綠原酸7.0%、杜仲黃酮15%、杜仲多糖40%、水溶性雜質38%。

1.2 試驗設計及飼糧

選取產蛋率、體重相近，健康狀態(tài)良好的420日齡海蘭褐蛋雞1 200只，隨機分為4組，每組6個重復，每個重復50只。對照組飼喂基礎飼糧，試驗組分別在基礎飼糧中添加100、200和300 g/t杜仲葉提取物。預試期1周，正試期8周。

參照NRC(1994)、我國《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)以及海蘭褐蛋雞飼養(yǎng)手冊配制基礎飼糧，不添加杜仲葉提取物?；A飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1)預混料為每千克飼糧提供 Premix provided the following per kg of the diet： VA 10 000 IU，VD33 000 IU，VE 20 IU，VK32 mg，硫胺素 thiamine 1 mg，核黃素 riboflavin 8 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 40 mg，煙酸 niacin 32.5 mg，吡哆醇 pyridoxine 8 mg，生物素 biotin 2 mg，葉酸 folic acid 1.5 mg，VB125 mg，膽堿 choline 500 mg，Mn 70 mg，I 1 mg，Fe 80 mg，Cu 8 mg，Zn 80 mg，Se 0.3 mg。

2)代謝能為計算值，其余為實測值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗期內，試驗雞只每天06:30、14:30各飼喂1次干拌料，有窗雞舍3層階梯式籠養(yǎng)，上層和中層每窩位4只雞，下層每窩位3只雞，自由采食與飲水，每日恒定光照16 h，飼養(yǎng)管理和免疫均按照試驗場原有程序進行。

1.4 指標測定及方法

1.4.1 生產性能

觀察每組雞只的健康狀況，試驗期以重復為單位，記錄每天喂料量、產蛋數、蛋重、破軟蛋數和死亡數，每7 d統計飼料消耗量。分別于試驗第28天和第56天，計算每重復產蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比、破軟蛋率和死淘率。

1.4.2 蛋品質

收集試驗第28天和第56天的雞蛋，每重復5枚，用蛋形指數測定儀(Egg Index Reader, Fujihira Industry Co., Ltd.)測量蛋形指數，用蛋殼厚度測定儀(Egg Shell Thickness Gauge, Orka Techology Ltd.)測定蛋殼厚度，用SONOVA蛋品質自動分析儀(Egg AnalyzerTM, Orka Technology Ltd.)測定蛋黃顏色、哈氏單位。

1.4.3 蛋黃膽固醇含量

收集試驗第28天和第56天的雞蛋，每重復5枚蛋，混合5枚蛋黃，稱取混合樣品0.05 g，經無水乙醇-氫氧化鉀溶液皂化，石油醚和無水乙醚混合溶液提取，甲醇溶液定量，用高效液相色譜儀測定。

1.4.4 血清抗氧化能力

試驗第56天早上，每重復隨機選取1只雞，空腹翅靜脈采血，3 600 r/min 離心10 min制備血清，分裝，-20 ℃保存，黃嘌呤氧化酶法測定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸法測定血清丙二醛(MDA)含量，比色法測定血清過氧化氫酶(CAT)活性。測定采用南京建成生物工程研究所試劑盒，按照試劑盒說明書操作。

1.5 數據統計與分析

采用Excel 2010對原始數據進行初步處理，用SPSS 19.0進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，多重比較用Duncan氏法，結果以平均值±標準誤表示。

2 結果與分析

2.1 杜仲葉提取物對蛋雞產蛋后期生產性能的影響

由表2可知，試驗第28天、第56天，飼糧添加杜仲葉提取物組平均蛋重均略高于對照組，但各組間差異不顯著(P>0.05)，300 g/t組平均蛋重均略高于其他各組。試驗第28天、第56天，飼糧添加杜仲葉提取物組平均日采食量略高于對照組，但各組間差異不顯著(P>0.05)，300 g/t組平均日

采食量略高于其他各組。試驗第28天、第56天，飼糧添加杜仲葉提取物組產蛋率均略高于對照組，但各組間差異不顯著(P>0.05)，300 g/t組產蛋率略高于其他各組。試驗第28天、第56天，飼糧添加杜仲葉提取物組料蛋比均略低于對照組，但各組間差異不顯著(P>0.05)，隨著杜仲葉提取物添加水平增加，料蛋比有降低的趨勢，300 g/t組料蛋比略低于其他各組。試驗第28天、第56天，300 g/t組破軟蛋率顯著低于對照組和100 g/t組(P<0.05)，100和200 g/t組破軟蛋率顯著低于對照組(P<0.05)，100和200 g/t組之間破軟蛋率差異不顯著(P>0.05)，在破軟蛋率方面300 g/t組效果最好。試驗第28天、第56天，300 g/t組死淘率顯著低于對照組和100、200 g/t組(P<0.05)，200 g/t組死淘率顯著低于對照組和100 g/t組(P<0.05)，100 g/t組死淘率顯著低于對照組(P<0.05)，在死淘率方面300 g/t組效果最好。

表2 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞生產性能的影響

續(xù)表2項目Items時間Time對照組Controlgroup杜仲葉提取物添加水平Eucommialeavesextractsupplementallevel/(g/t)100200300P值P?value死淘率Mortalityrate/%第28天The28thday0．76±0．15a0．59±0．21b0．51±0．14c0．21±0．07d0．028第56天The56thday1．02±0．22a0．96±0．09b0．41±0．09c0．24±0．03d0．025

同行數據肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞蛋品質的影響

由表3可知，試驗第28天、第56天，100、200、300 g/t組蛋白高度、蛋黃顏色、蛋形指數、蛋殼比例、蛋黃比例、蛋白比例與對照組相比均差異不顯著(P>0.05)。試驗第28天，300 g/t組哈氏單位顯著低于對照組(P<0.05)，100、200、300 g/t組之間差異不顯著(P>0.05)，100、200 g/t組和對照組之間哈氏單位差異不顯著(P>0.05)，在哈氏單位方面300 g/t組效果最好；試驗第56天，各組哈氏單位差異不顯著(P>0.05)。試驗第28天，各組間蛋殼厚度差異不顯著(P>0.05)；試驗第56天，100、200、300 g/t組蛋殼厚度顯著高于對照組(P<0.05)，100、200、300 g/t組之間差異不顯著(P>0.05)，在蛋殼厚度方面300 g/t組最好。試驗第28天，各組之間蛋殼強度差異不顯著(P>0.05)；試驗第56天，200、300 g/t組蛋殼強度顯著高于100 g/t組和對照組(P<0.05)，200、300 g/t組之間差異不顯著(P>0.05)，100 g/t組顯著高于對照組(P<0.05)。

表3 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞蛋品質的影響

續(xù)表3項目Items時間Time對照組Controlgroup杜仲葉提取物添加水平Eucommialeavesextractsupplementallevel/(g/t)100200300P值P?value蛋殼強度Eggshellstrength/(N/m2)第28天The28thday37．10±5．3837．49±4．2137．44±5．0339．09±5．380．754第56天The56thday32．55±3．27a36．10±3．53b37．75±3．47c38．17±3．67cd0．032蛋形指數Eggshapeindex第28天The28thday1．40±0．041．39±0．041．40±0．051．42±0．040．418第56天The56thday1．37±0．0531．40±0．0401．41±0．101．38±0．060．357蛋殼比例Eggshellpercentage/%第28天The28thday11．38±1．0611．63±0．8211．61±0．9311．59±1．180．925第56天The56thday10．79±0．9310．59±0．4110．42±0．5010．90±0．650．321蛋黃比例Yolkpercentage/%第28天The28thday26．10±2．1226．39±1．7426．55±2．4127．10±2．580．406第56天The56thday27．72±1．1828．18±2．2027．78±1．6627．01±2．030．584蛋白比例Albumenpercentage/%第28天The28thday62．51±2．5661．96±1．7261．82±2．4560．53±3．110．315第56天The56thday61．48±1．4061．22±2．0461．79±1．7762．09±2．220．785

2.3 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞蛋黃膽固醇含量的影響

由表4可知，試驗第28天，300 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于100、200 g/t組和對照組(P<0.01)，200 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于100 g/t組和對照組(P<0.01)，100 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于對照組(P<0.01)。試驗第56天，300 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于100 g/t組和對照組(P<0.01)，200 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于對照組(P<0.01)，100 g/t組蛋黃膽固醇含量極顯著低于對照組(P<0.01)。由此可見，飼糧中添加杜仲葉提取物可極顯著降低蛋黃的膽固醇的含量，試驗第28天300 g/t組蛋黃膽固醇的含量最低。

表4 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞蛋黃膽固醇含量的影響

2.4 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞血清抗氧化能力的影響

由表5可知，與對照組相比，飼糧添加杜仲葉提取物可極顯著提高血清SOD活性，300 g/t組極顯著高于100、200 g/t組和對照組(P<0.01)，200 g/t組極顯著高于100 g/t組和對照組(P<0.01)，100 g/t組極顯著高于對照組(P<0.01)；在改善血清SOD活性方面，300 g/t組效果最好。與對照組相比，飼糧添加杜仲葉提取物可極顯著降低血清MDA含量，300 g/t組極顯著低于100、200 g/t組和對照組(P<0.01)，200 g/t組極顯著低于100 g/t組和對照組(P<0.01)，100 g/t組極顯著低于對照組(P<0.01)；在改善血清MDA含量方面，300 g/t組效果最好。與對照組相比，飼糧添加杜仲葉提取物可極顯著提高血清CAT活性，300 g/t組極顯著高于100、200 g/t組和對照組(P<0.01)，200 g/t組極顯著高于100 g/t組和對照組(P<0.01)，100 g/t組極顯著高于對照組(P<0.01)；在改善血清CAT活性方面， 300 g/t組效果最好。

表5 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞血清抗氧化指標的影響

3 討 論

3.1 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞生產性能的影響

影響蛋雞生產性能的因素很多，包括個體差異、年齡、環(huán)境、活動量、繁殖階段、飼糧能量水平等[4-6]。本研究表明，飼糧中添加100、200、300 g/t的杜仲葉提取物對試驗期蛋雞的平均蛋重、平均日采食量、產蛋率、料蛋比無顯著影響，馬得瑩等[7]的研究表明，中草藥添加劑對蛋雛雞的體重及增重無顯著影響，這與本試驗結果相似，杜仲葉提取物中的黃酮類化合物能夠促進成骨細胞增殖，加速成骨細胞分化和礦化，并且能夠刺激胃腸道，增加消化酶的分泌，促進血液循環(huán)，提高機體消化率和吸收率，提高動物生產性能。但也有研究表明，杜仲葉提取物作為飼料添加劑可增強動物免疫力，提高畜禽生長性能，改善畜產品質量[8]。蛋雞產蛋后期機體氧化加速衰老，采食量增加，產蛋率下降，添加300 g/t的杜仲葉提取物有延緩蛋雞產蛋率下降的趨勢。本試驗期為8周，杜仲葉提取物作用緩慢，試驗期相對較短，可能未對蛋雞的平均蛋重、平均日采食量、產蛋率、料蛋比產生影響。飼糧中添加300 g/t的杜仲葉提取物可顯著改善破軟蛋率和死淘率，可能是杜仲葉提取物中的綠原酸具有抗菌、止血及增加白血球數量的作用。Okada等[9]研究表明，萜類化合物地芰普內酯是一種干擾T淋巴細胞的主要物質，具有免疫抑制活性，可以提高機體免疫力，可能與破軟蛋率和蛋雞死淘率下降有關。

3.2 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞蛋品質的影響

蛋雞產蛋后期蛋體變大，蛋殼變薄，蛋殼顏色不均一。影響蛋品質的因素較多，除遺傳因素外，還受飼糧、光照和雞體健康狀況影響。蛋形指數、蛋殼強度、蛋殼厚度是衡量蛋品質的重要指標，蛋殼主要是由94%～97%的無機物和3%～6%的有機物組成，無機物包括93%碳酸鈣、1%碳酸鎂和2.8%碳酸鈣與碳酸鎂混合物，還有銅、鐵、錳、鋅、硒等微量元素。本研究表明，飼糧中添加不同水平的杜仲葉提取物對蛋黃顏色、蛋形指數、蛋成分比例未產生顯著影響，但可提高哈氏單位，哈氏單位越高說明蛋白質越黏稠，蛋品質越好，雞蛋中含有許多活性蛋白質，如卵轉鐵蛋白、溶菌酶、卵球蛋白、卵黃磷脂蛋白、生物結合蛋白等，這些活性蛋白質具有多種生理作用，決定雞蛋的新鮮度，徐賢柱等[10]研究表明，杜仲多糖可以有效提高小鼠的免疫機能，其作用機理可能是刺激了脾臟增加，使其對免疫應答的能力加強；刺激T細胞等分泌更多的免疫因子，使一些處于休眠狀態(tài)的免疫細胞活化；增加免疫細胞的數量，提高機體免疫力，進一步提高活性蛋白質的活性，提高雞蛋哈氏單位。俞路等[11]研究表明，蛋殼鈣沉積過程與輸卵管、子宮部鈣結合蛋白(CaBP)表達量密切相關。第56天蛋殼厚度、蛋殼強度顯著增強，分析其原因可能是蛋殼膜形成過程中因飼糧中添加杜仲葉提取物產生變化，杜仲葉提取物中礦物質及有機酸可溶性強，能顯著增加血液中鈣、磷的含量，蛋殼形成過程杜仲葉提取物影響蛋雞輸卵管和子宮中CaBP表達量，決定蛋殼鈣沉積量，從而影響蛋殼質量。

3.3 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞蛋黃膽固醇含量的影響

家禽通過合成、轉運、降解3種途徑來維持體內膽固醇平衡，肝臟和卵巢是膽固醇的合成場所，膽固醇的合成通過類異戊二烯合成來實現，類異戊二烯以乙酰輔酶A(CoA)為原料，經過多種酶共同作用形成膽固醇，3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGR)為體內膽固醇合成代謝的關鍵限速酶，膽固醇7α羥化酶(CYP7α1)為膽固醇分解為膽汁酸的關鍵酶，HMGR在胞液中經蛋白激酶催化磷酸化喪失活性，鳥苷酸環(huán)化酶(GC)等通過第二信使環(huán)磷酸腺苷(cAMP)影響蛋白激酶，加速HMGR磷酸化失活從而抑制HMGR活性，減少膽固醇的合成，溫安詳等[12]研究表明，在飼糧中添加200、400 mg/kg綠原酸能顯著提高中華鱉裙邊和肌肉膠原蛋白的含量，并顯著降低肌肉膽固醇含量。本研究表明，飼糧中添加100、200和300 g/t杜仲葉提取物可極顯著降低蛋黃中膽固醇的含量，但杜仲葉提取物降低膽固醇含量的機理尚未完全清楚，可能的原因是杜仲葉提取物中綠原酸降低血清HMGR活性，同時提高血清GC、CYP7α1等活性，通過提高血清GC活性來抑制HMGR活性，以促進膽固醇向膽汁酸轉化，降低體內膽固醇含量，進而降低蛋黃中膽固醇的含量，這與賴玲林等[13]的研究結果一致。

3.4 杜仲葉提取物對產蛋后期蛋雞血清抗氧化指標的影響

4 結 論

對于產蛋后期蛋雞，飼糧中添加300 g/t杜仲葉提取物的效果最好，可改善哈氏單位、蛋殼強度和蛋殼厚度，極顯著降低蛋黃膽固醇含量，改善機體抗氧化能力。

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*Corresponding author, professor, E-mail: wushugeng@caas.cn