飼料脂肪水平對大口黑鱸形體指標(biāo)、組織脂肪酸組成、血清生化指標(biāo)及肝臟抗氧化性能的影響

朱婷婷 金 敏 孫 蓬 李晨晨 馬紅娜 羅嘉翔 袁 野 周歧存

(寧波大學(xué)海洋學(xué)院魚類營養(yǎng)研究室，寧波 315211)

大口黑鱸(Micropterussalmoides)，屬鱸形目(Perciformes)，鱸亞目(Porcoidei)，太陽魚科(Cehtrachidae)，黑鱸屬(Micropterus)，原產(chǎn)于北美洲，是一種世界性的游釣魚類。大口黑鱸根據(jù)形態(tài)學(xué)和原產(chǎn)地的地理分布方面的不同，被分為2個亞種：大口黑鱸北方亞種(M.salmoidessalmoides)和大口黑鱸佛羅里達(dá)亞種(M.salmoidesfloridanus)[1]。大口黑鱸是一種生長快、抗病力強(qiáng)、肉質(zhì)鮮美、耐低溫、營養(yǎng)較為豐富的名貴肉食性魚類[2-3]，20世紀(jì)70年代末，我國臺灣省從國外引進(jìn)此魚，并在1983年成功進(jìn)行人工繁殖，同年引入廣東省，經(jīng)過多年的養(yǎng)殖發(fā)展，已成為國內(nèi)重要的淡水養(yǎng)殖品種之一[4]。近年來，我國大口黑鱸的年產(chǎn)量保持在10萬t以上，其中，大口黑鱸的主要養(yǎng)殖區(qū)域在廣東省，年產(chǎn)量是國內(nèi)總產(chǎn)量的75%[5]。

脂肪作為三大營養(yǎng)素之一，是魚類重要的能源物質(zhì)，對生長起著重要的作用[6-7]。飼料中缺乏脂肪或脂肪提供量不足，會引起必需脂肪酸和脂溶性維生素的缺乏，而魚類自身又不能合成必需脂肪酸，就會造成魚類生長緩慢、抗病力低[8-11]，還會使代謝紊亂，最終導(dǎo)致魚類消耗飼料蛋白質(zhì)作為生長所需的能量[8]。因此，飼料中添加適宜的脂肪可以起到促進(jìn)魚類生長、節(jié)約蛋白質(zhì)的作用。然而，飼料中脂肪水平過高也會使代謝系統(tǒng)紊亂、機(jī)體組織器官受損[12-13]、機(jī)體內(nèi)脂肪酸重新合成受到抑制，從而影響水產(chǎn)動物的發(fā)育和免疫應(yīng)答[14-15]。

脂類在魚體內(nèi)消化吸收后，會以甘油三酯的形式儲存在腸道、肌肉、肝臟等組織內(nèi)[16]。脂肪及脂肪酸的積累會對魚體內(nèi)的各組織器官產(chǎn)生不利影響，如作為脂肪代謝主要器官的肝臟，過量的脂肪積累會形成脂肪肝。一般情況下，飼料中含有的脂肪越多，在肝臟中積累的脂肪越多。

目前，大口黑鱸飼料在蛋白質(zhì)和氨基酸方面的研究[17-20]較多，而對脂肪及脂肪酸的研究較少?；诖?，本試驗在已有研究的基礎(chǔ)上，設(shè)計3個脂肪水平(5.76%、11.05%、17.65%)，研究飼料脂肪水平對大口黑鱸形態(tài)學(xué)、組織脂肪酸組成、血清生化指標(biāo)及肝臟抗氧化指標(biāo)的影響，從而為大口黑鱸資源節(jié)約型配合飼料的研制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

本試驗以白魚粉、豆粕、小麥蛋白粉、小麥粉為蛋白質(zhì)源，魚油、豆油、大豆卵磷脂為脂肪源，配制脂肪水平分別為5.76%、11.05%、17.65%的3種等氮試驗飼料，試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1，試驗飼料的脂肪酸組成見表2。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)礦物質(zhì)預(yù)混料和維生素預(yù)混料參照Mai等[21]配制。Mineral premix and vitamin premix were prepared according to Mai, et al[21].

2)總能為計算值，其他營養(yǎng)水平為實測值。Gross energy was a calculated value, while the other nutrient levels were measured values.

表2 試驗飼料脂肪酸組成(占總脂肪酸的百分比)

將所有原料粉碎后，過80目篩，按照表1的配方準(zhǔn)確稱重，并混合均勻，其中維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料等微量添加成分采取逐級稀釋法混合均勻，之后加入適量的水，用攪拌機(jī)均勻混合后，壓制成粒徑分別為1.5和2.0 mm的顆粒飼料。在烘箱中90 ℃熟化30 min，取出陰干至水分為10%左右，放入封口袋中，置于-20 ℃冰箱中保存。

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗用大口黑鱸幼苗購自湖州南潯和孚鴻浩水產(chǎn)家庭農(nóng)場，在寧波大學(xué)海洋學(xué)院魚類營養(yǎng)研究室養(yǎng)殖車間內(nèi)進(jìn)行養(yǎng)殖試驗。在試驗前，大口黑鱸幼苗用商業(yè)飼料馴化2周。暫養(yǎng)2周后，饑餓24 h，挑選個體大小一致、健康無病的初始體質(zhì)量為(4.12±0.02) g大口黑鱸幼魚270尾，隨機(jī)分在9個300 L的養(yǎng)殖桶里，每個桶30尾魚。每種飼料隨機(jī)投喂3個養(yǎng)殖桶，每天投喂2次，時間分別為08:00和18:00，每次投喂量為體質(zhì)量的3%～4%。每天換水量為50%，試驗中記錄投喂量和死亡情況，及時撈出死魚并稱重記錄。每2周稱1次體質(zhì)量，并根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整投餌量。養(yǎng)殖周期為8周，在此期間，水溫為22.2～31.0 ℃，溶解氧濃度在6.0 mg/L以上，pH為7.5～8.0。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，饑餓24 h，將試驗魚用丁香酚(1∶10 000)麻醉后，每個養(yǎng)殖桶隨機(jī)取3尾魚，測量其體質(zhì)量、體長，解剖取內(nèi)臟，分離肝臟和腹腔脂肪，分別稱重，用來計算肝體比(HSI)、臟體比(VSI)、脂體比(IPF)及肥滿度(CF)。每個養(yǎng)殖桶另隨機(jī)取6尾魚，從尾靜脈采血于1.5 mL離心管內(nèi)，于4 ℃冰箱中靜置過夜，3 500 r/min離心10 min制得上清液，放置在-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。將采過血的魚解剖，取其肝臟于2.0 mL離心管內(nèi)，用于抗氧化指標(biāo)及脂肪酸組成的測定；剝離其背部側(cè)線以上的肌肉于4.0 mL離心管內(nèi)，用于肌肉脂肪酸組成的測定。

1.4 測定方法

飼料常規(guī)營養(yǎng)成分分析：參照AOAC(1995)[22]方法，采用105 ℃恒干恒重法測定水分含量；采用脂肪測定儀(SX360)測定粗脂肪含量，其原理是索氏抽提法；采用蛋白質(zhì)測定儀(Leco FB-528)測定粗蛋白質(zhì)含量，其原理是熱導(dǎo)吸收法；采用馬弗爐550 ℃焚燒失重法測定粗灰分含量，個別方法有改進(jìn)。

血清指標(biāo)分析：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)的活性及葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、總蛋白(TP)的含量采用生化分析儀(Pro-M)測定。

脂肪酸組成分析：將肌肉和肝臟冷凍干燥48 h，在氯仿-甲醇溶液中抽提脂肪進(jìn)行前處理后，送到中國科學(xué)院寧波材料技術(shù)與工程研究所測試中心，使用氣相-質(zhì)譜儀(GCMS-QP2010 Plus，SHIMADZU)進(jìn)行脂肪酸的甲酯化，用面積歸一法求得各類脂肪酸的相對百分含量。

肝臟抗氧化指標(biāo)分析：谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、過氧化氫酶(CAT)、堿性磷酸酶(AKP)的活性以及丙二醛(MDA)的含量均采用南京建成工程生物研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測定。

1.5 計算公式

肥滿度(g/cm3)=100×W/L3；臟體比(%)=100×Wv/W；脂體比(%)=100×WI/W；肝體比(%)=100×Wh/W。

式中：W表示魚體質(zhì)量(g)；L表示魚體長(cm)；Wv表示內(nèi)臟重；WI表示腹腔脂肪重；Wh表示肝臟重(g)。

1.6 數(shù)據(jù)處理及分析

數(shù)據(jù)先用Excel 2007處理，然后采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析。試驗結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著時，用Turkey法多重檢驗分析組間差異顯著性，P<0.05為差異顯著。結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料脂肪水平對大口黑鱸形體指標(biāo)的影響

飼料脂肪水平對大口黑鱸形體指標(biāo)的影響見表3。飼料脂肪水平對大口黑鱸的肝體比和肥滿度沒有產(chǎn)生顯著影響(P>0.05)，其中肝體比有隨著飼料脂肪水平的升高而升高的趨勢，以17.65%脂肪組最高。脂體比隨著飼料脂肪水平的升高而上升，17.65%脂肪組顯著高于5.76%脂肪組(P<0.05)；臟體比隨著飼料脂肪水平的升高先升高后下降，以11.05%脂肪組最高，顯著高于5.76%和17.65%脂肪組(P<0.05)。

表3 飼料脂肪水平對大口黑鱸形體指標(biāo)的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values without letter or with the same small letter superscripts indicated no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts indicated significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 飼料脂肪水平對大口黑鱸組織脂肪酸組成的影響

飼料脂肪水平對大口黑鱸肌肉脂肪酸組成的影響見表4。相關(guān)性分析表明大口黑鱸肌肉脂肪酸的組成與飼料脂肪酸的組成存在正相關(guān)關(guān)系，肌肉中DHA的比例及n-3高不飽和脂肪酸(HUFA)/n-6 HUFA、C22∶6n-3(DHA)/C20∶5n-3(EPA)隨著飼料脂肪水平的升高而表現(xiàn)出下降的趨勢，與飼料中三者的變化趨勢相一致，均以5.76%脂肪組最高。隨著飼料脂肪水平的升高，肌肉中飽和脂肪酸(SFA)的比例下降，而多不飽和脂肪酸(PUFA)的比例上升。n-6 HUFA的比例隨著飼料脂肪水平的升高而顯著上升(P<0.05)，這也與飼料中n-6 HUFA比例的變化趨勢相一致。

表4 飼料脂肪水平對大口黑鱸肌肉脂肪酸組成的影響(占總脂肪酸的百分比)

續(xù)表4項目Items飼料脂肪水平Dietarylipidlevel/%5．7611．0517．65C22∶6n?3(DHA)15．90±0．41b15．45±0．88ab13．95±0．71a飽和脂肪酸SFA32．46±0．56b31．31±1．42ab29．36±0．84a單不飽和脂肪酸MUFA24．79±0．41b21．59±0．93a22．07±0．94a多不飽和脂肪酸PUFA42．50±0．73a47．11±1．31b48．85±0．41bn?3高不飽和脂肪酸n?3HUFA21．39±0．5621．31±1．0919．65±0．82n?6高不飽和脂肪酸n?6HUFA21．11±1．06a25．80±0．96b29．80±0．71cn?3高不飽和脂肪酸/n?6高不飽和脂肪酸n?3HUFA/n?6HUFA1．01±0．07c0．83±0．06b0．67±0．04aDHA/EPA9．63±0．49b8．34±0．14ab8．04±0．78a

飼料脂肪水平對大口黑鱸肝臟脂肪酸組成的影響見表5。相關(guān)性分析表明，大口黑鱸肝臟脂肪酸的組成與飼料、肌肉脂肪酸的組成存在正相關(guān)關(guān)系，肝臟中DHA比例及n-3 HUFA/n-6 HUFA、DHA/EPA隨著飼料脂肪水平的升高而下降，而n-6 HUFA的比例則隨著飼料脂肪水平的升高而顯著上升(P<0.05)，與飼料、肌肉中這四者的變化趨勢相一致，其中5.76%脂肪組中n-3 HUFA/n-6 HUFA顯著高于其他2組(P<0.05)。隨著飼料脂肪水平的升高，肝臟中SFA的比例下降，而PUFA的比例上升，這也同肌肉中這兩者的變化趨勢相一致。

表5 飼料脂肪水平對大口黑鱸肝臟脂肪酸組成的影響(占總脂肪酸的百分比)

續(xù)表5項目Items飼料脂肪水平Dietarylipidlevel/%5．7611．0517．65多不飽和脂肪酸PUFA48．08±1．6548．74±0．7351．11±0．48n?3高不飽和脂肪酸n?3HUFA32．49±1．68b30．54±0．94ab28．14±2．02an?6高不飽和脂肪酸n?6HUFA15．60±0．44a18．20±0．21b22．98±1．53cn?3高不飽和脂肪酸/n?6高不飽和脂肪酸n?3HUFA/n?6HUFA2．08±0．13c1．68±0．07b1．23±0．17aDHA/EPA17．90±1．8617．43±4．6315．17±5．50

2.3 飼料脂肪水平對大口黑鱸血清生化指標(biāo)的影響

飼料脂肪水平對大口黑鱸血清生化指標(biāo)的影響見表6。飼料脂肪水平對大口黑鱸血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶活性及葡萄糖、總蛋白含量沒有產(chǎn)生顯著影響(P>0.05)，其中，谷草轉(zhuǎn)氨酶活性和葡萄糖含量有隨飼料脂肪水平的升高呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，而總蛋白含量的變化趨勢則是相反的。飼料脂肪水平由5.76%升高到11.05%或17.65%，大

口黑鱸血清中堿性磷酸酶活性以及總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量均顯著升高(P<0.05)，而谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性則顯著下降(P<0.05)，但上述指標(biāo)在11.05%和17.65%脂肪組之間均沒有顯著差異(P>0.05)。大口黑鱸血清中甘油三酯含量隨著飼料脂肪水平的升高表現(xiàn)為先上升再下降的趨勢，11.05%脂肪組顯著高于5.76%和17.65%脂肪組(P<0.05)。

表6 飼料脂肪水平對大口黑鱸血清生化指標(biāo)的影響

2.4 飼料脂肪水平對大口黑鱸肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

飼料脂肪水平對大口黑鱸肝臟抗氧化指標(biāo)的影響見表7。飼料脂肪水平對大口黑鱸肝臟SOD、GSH-Px、AKP、ALT活性及MDA含量均沒有產(chǎn)生顯著影響(P>0.05)，其中，GSH-Px活性和MDA含均隨著飼料脂肪水平的升高而下降，且均以17.65%脂肪組最低，而AKP、ALT活性則隨著飼料脂肪水平的升高先下降再升高。大口黑鱸肝臟CAT活性以11.05%脂肪組最高，顯著高于5.76%和17.65%脂肪組(P<0.05)。大口黑鱸肝臟AST活性以17.65%脂肪組最高，顯著高于5.76%和11.05%脂肪組(P<0.05)。

3 討 論

3.1 飼料脂肪水平對大口黑鱸形體指標(biāo)的影響

脂肪作為魚類必需的營養(yǎng)物質(zhì)，是能量的主要來源之一，對其生命活動有著重要的作用[23]，肉食性魚類對脂肪的需求大于草食性魚類，冷水性魚類大于暖水性魚類[24]。在飼料中添加適宜的脂肪對蛋白質(zhì)具有明顯的節(jié)約作用[8,25]。一般而言，隨著飼料脂肪水平的升高，肝臟脂肪含量也會相應(yīng)增加，這是因為飼料中的高脂可以促進(jìn)肝臟脂肪數(shù)量的增多[26]，使脂肪細(xì)胞的體積變大[27]，從而使更多的脂肪被肝臟容納[28]，最終使肝體比變大。本研究結(jié)果表明，飼料脂肪水平對大口黑鱸的肥滿度和肝體比沒有顯著影響，而脂體比隨飼

料脂肪水平的升高而顯著升高，這與上述結(jié)論不同，但與黑線鱈[29](MelanogrammusaeglefinusL.)、瓦氏黃顙魚[30](Pelteobaggrusvachelli)、大西洋庸鰈[28](Atlanticsalmon)等魚類的研究結(jié)果相符，說明大口黑鱸可能將肝臟中過量的脂肪儲存在腹腔中[6]，減少肝臟細(xì)胞脂肪的儲存量。

表7 飼料脂肪水平對大口黑鱸肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

3.2 飼料脂肪水平對大口黑鱸組織脂肪酸組成的影響

有研究表明，魚類可以合成單不飽和脂肪酸(MUFA)和SFA，但是亞麻酸(C18∶3n-3)和亞油酸(C18∶2n-6)作為淡水魚類的必需脂肪酸，不能被合成，只能通過食物來攝取[31]，MUFA能使低密度脂蛋白含量下降[32]。目前，在鱸魚(Atractoscionnobilis)[33]、雜交羅非魚[34]的研究中報道，魚類攝食飼料中的脂肪酸組成會影響魚類本身的脂肪酸組成。本試驗結(jié)果表明，大口黑鱸肌肉和肝臟脂肪酸組成受飼料脂肪酸組成的影響，隨著飼料脂肪水平的升高，肌肉和肝臟中SFA的比例為下降趨勢，PUFA的比例為升高趨勢，這與飼料中對應(yīng)脂肪酸的變化規(guī)律有較高的一致性。魚體脂肪酸中n-3 HUFA/n-6 HUFA是決定水產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣的重要因素之一，WHO/FAO的推薦值是在0.1～0.2[35]，在大口黑鱸的試驗中，肌肉n-3 HUFA/n-6 HUFA大于WHO/FAO推薦值，因此大口黑鱸的肌肉營養(yǎng)價值比較高。

大多數(shù)研究報告顯示，比起EPA，魚體能積累更多的DHA[28,36-37]。這與本試驗所得結(jié)果一致，即大口黑鱸肌肉DHA的比例要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于EPA的比例。DHA和EPA對魚類的生長起著重要的作用，Trushenski等[38]指出，軍曹魚需要依靠補充DHA才能滿足長鏈n-3 PUFA的需求，在石斑魚細(xì)胞防御機(jī)制中，DHA比EPA更加關(guān)鍵[39]。因此，在大口黑鱸肌肉中DHA的積累量高于EPA有著非常重要的意義。

3.3 飼料脂肪水平對大口黑鱸血清生化指標(biāo)的影響

魚類血液生理生化指標(biāo)與自身的營養(yǎng)狀況、代謝及疾病有著緊密關(guān)系，當(dāng)外界環(huán)境發(fā)生變化時，魚體受到影響，魚類在環(huán)境應(yīng)激下的健康狀態(tài)都會通過血液的生理生化指標(biāo)反映出來[40]。膽固醇代謝是脂質(zhì)代謝的重要部分之一，膽固醇主要由肝臟產(chǎn)生，要和脂蛋白結(jié)合才能運輸[41]，肝臟中的總膽固醇含量升高會影響肝臟細(xì)胞的功能。脂蛋白分為高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，高密度脂蛋白能將肝臟外的膽固醇送到肝臟分解，而低密度脂蛋白的作用正好相反，將肝臟內(nèi)的膽固醇輸送到各個組織中[42]。在大菱鲆[16](Psettamaxima)和團(tuán)頭魴[43](Megalobramaamblycephala)的研究中發(fā)現(xiàn)，血液中甘油三酯含量隨飼料脂肪水平的升高而升高，說明魚體為應(yīng)對高脂飼料，提高了對脂肪的吸收及運輸能力。在本試驗中，血清中甘油三酯含量隨飼料脂肪水平的升高表現(xiàn)出先升高后下降的趨勢，這與向梟等[14]在白甲魚和趙巧娥等[44]在鳡幼魚上所得結(jié)果一致。王興強(qiáng)等[45]認(rèn)為，魚類能夠吸收飼料中的脂肪并轉(zhuǎn)化為游離脂肪酸，最后進(jìn)入肝臟中。因此，當(dāng)飼料脂肪水平低于11.05%時，大口黑鱸攝食的脂肪量隨飼料脂肪水平的升高而變大，使肝臟中游離氨基酸變多，從而使肝臟中合成及向外輸送更多的甘油三酯，最終使血清中的甘油三酯含量增多；而飼料脂肪水平高于17.65%時，大口黑鱸提高了對脂肪的吸收及運輸能力，血清中甘油三酯的含量會減少[46]。本試驗中，當(dāng)飼料脂肪水平高于11.05%時，大口黑鱸肝臟脂肪積累增多，導(dǎo)致肝細(xì)胞受損，減弱了肝臟合成甘油三酯的能力。

在動物體內(nèi)，堿性磷酸酶直接參與磷酸基團(tuán)的代謝和轉(zhuǎn)移，與脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等代謝有關(guān)，同時受到機(jī)體生長階段、營養(yǎng)狀況和環(huán)境變化及疾病的影響[47]。當(dāng)動物肝臟受損時，血清的堿性磷酸酶活性會顯著升高[48]。本試驗中，隨著飼料脂肪水平的升高，血清中堿性磷酸酶活性表現(xiàn)為升高的趨勢，這與在奧尼羅非魚[48]上的研究結(jié)果基本一致。

3.4 飼料脂肪水平對大口黑鱸肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

SOD和CAT作為生物抗氧化酶的重要組成酶類，可以保護(hù)細(xì)胞，使其免受過氧化損傷。GSH-Px作為機(jī)體中重要的過氧化物分解酶，能把有害的過氧化物還原成無害的羥基化合物，起到保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能的作用[32]。MDA作為油脂氧化酸敗的終產(chǎn)物之一，可以直接用來評價機(jī)體的氧化損傷程度[49]。本試驗中，肝臟中SOD和CAT的活性隨飼料脂肪水平的升高而表現(xiàn)為先升高后下降的趨勢，表明一定的飼料脂肪水平可以提高大口黑鱸肝臟中抗氧化酶的活性，從而提高大口黑鱸的抗氧化能力，但是過高的脂肪水平會使肝臟的抗氧化能力減弱。隨著飼料脂肪水平的升高時，肝臟中GSH-Px的活性及MDA的含量均表現(xiàn)為下降趨勢，這與施兆鴻等[50]在褐菖鲉上的研究結(jié)果一致,分析原因可能是由于大口黑鱸在高脂飼料下肝臟中積累了大量的脂肪，導(dǎo)致MDA含量上升，使肝臟細(xì)胞受到損傷。

4 結(jié) 論

飼料脂肪水平能夠影響大口黑鱸的脂肪沉積，改變大口黑鱸組織脂肪酸組成，并且通過影響血清中高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的含量，改變大口黑鱸對脂肪的轉(zhuǎn)運和利用能力，且當(dāng)飼料脂肪水平超過11.05%時，容易使大口黑鱸的肝功能受損。

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*Corresponding author, professor, E-mail: zhouqicun@nbu.edu.cn