豬傳染性胃腸炎病毒研究進(jìn)展

（山東省昌樂(lè)縣畜牧獸醫(yī)局，山東昌樂(lè) 262400）

豬傳染性胃腸炎病毒是豬傳染性胃腸炎（TGE）的致病菌，冬季和早春寒冷季節(jié)多發(fā)。最早發(fā)現(xiàn)TGE的國(guó)家是美國(guó)，之后在全球很多國(guó)家相繼發(fā)現(xiàn)了TGE，就目前來(lái)看，TGE已成為全球性的豬傳染病。豬傳染性胃腸炎是一種以嘔吐、水樣腹瀉和脫水為主要臨床癥狀的高度接觸性消化道傳染病，也是養(yǎng)豬場(chǎng)引起腹瀉的主要傳染性疾病。TGE屬于國(guó)際獸醫(yī)局（OIE）法典中B類(lèi)疫病中必檢的豬傳染病，可感染各年齡段，各品種的豬，但以兩周以內(nèi)的仔豬死亡率高，甚至達(dá)100%，在很多國(guó)家和地區(qū)，TGE都曾給養(yǎng)殖戶造成嚴(yán)重的損失。

1 形態(tài)學(xué)特征

在病原方面，豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）是引發(fā)TGE的主要因素，該病毒屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬。貓、狗等動(dòng)物也可以TGEV，雖然貓、狗等動(dòng)物不會(huì)發(fā)病，但豬是對(duì)該病毒最為易感的動(dòng)物，一旦貓、狗等動(dòng)物排毒，豬很容易被感染，進(jìn)而發(fā)病。TGEV顆粒具典型的冠狀病毒形態(tài)，有三種結(jié)構(gòu)多肽，即核衣殼蛋白（N），囊膜蛋白（M或E1）和纖突蛋白（S或E2），分子量分別為48K，28K及100K。其粒子形狀不規(guī)則，電鏡下觀察呈圓形、橢圓形或多邊形，直徑80～120nm，有囊膜，表面有棒狀纖突，長(zhǎng)約18～24nm。

2 基因組成、結(jié)構(gòu)與功能

（1）基因組結(jié)構(gòu)冠狀病毒的基因組為不分段的單正鏈RNA，TGEV的基因組全長(zhǎng)約28～30kb左右，分子量為9X106KDa，是目前已知基因組最大的RNA病毒。在其5‘端有一帽結(jié)構(gòu)。3’端有一共價(jià)結(jié)合的PolyA結(jié)構(gòu)。TGEV的5‘端約20 kb的序列編碼RNA依賴的RNA聚合酶，在3’端約8.4 kb序列含8個(gè)開(kāi)放讀碼框架（ORF），編碼亞墓因組RNA表達(dá)的全部mRNA基因組。所有mRNA都具有相同的3'polyA末端，5‘末端則長(zhǎng)短不一。除了mRNA8之外，所有mRNA都是多順?lè)醋咏Y(jié)構(gòu)，但只有在5’末端的單一序列才具有編碼功能，其編碼區(qū)位置接近，緊密包裝，無(wú)任何重疊。

（2）前導(dǎo)序列 TGEV 整個(gè)先導(dǎo)序列長(zhǎng)約90個(gè)核苷酸，轉(zhuǎn)錄中每個(gè)亞基因mRNA 和先導(dǎo)引物RNA 是連接的。充分游離的先導(dǎo)RNA 連接到相關(guān)識(shí)別序列，并作為引物轉(zhuǎn)錄mRNA。

（3）從結(jié)構(gòu)蛋白方面來(lái)看，TGEV結(jié)構(gòu)蛋白的組成部分主要是3種結(jié)構(gòu)蛋白，一為磷蛋白（N，即核蛋白），它包裹著基因組RNA；二為膜結(jié)合蛋白（M 或E1），主要包埋在脂質(zhì)囊膜中；三為大的糖蛋白（S 或E2），它形成病毒突起。這3 種蛋白結(jié)構(gòu)及其在病毒粒子中的功能各有其特點(diǎn)。

（4）非結(jié)構(gòu)蛋白根據(jù)TGEV基因組RNA的序列分析和復(fù)制過(guò)程中胞內(nèi)亞基因mRNA種類(lèi)和數(shù)量的確定，至少有4種非結(jié)構(gòu)蛋白。由2個(gè)較大的ORF1a和ORF1b組成的Pol或基因1，約占整個(gè)基因組長(zhǎng)度的60%，大約20kb，負(fù)責(zé)編碼病毒RNA依賴性RNA聚合酶和蛋白酶以及一些尚未確定的蛋白質(zhì)。

3 病毒的診斷

據(jù)流行病學(xué)、臨診癥狀和病變特征進(jìn)行綜合判定可做出診斷。當(dāng)不同年齡的豬于寒冷季節(jié)發(fā)生水樣腹瀉、嘔吐，2周以內(nèi)死亡率很高，疾病傳播迅速等現(xiàn)象，都是初步診斷的依據(jù)。但本病和豬呼吸道冠狀病毒病、豬流行性腹瀉病癥狀類(lèi)似，如需確診則依靠實(shí)驗(yàn)室診斷方可。

（1）病毒分離和鑒定

在對(duì)TGEV進(jìn)行分離鑒定時(shí)，目前主要有兩種方法，一種是細(xì)胞培養(yǎng)，另一種則是乳豬接種試驗(yàn)。其中乳豬接種試驗(yàn)對(duì)工作人員的技術(shù)水平要求較高，對(duì)環(huán)境也有很高的要求，并且成本較為昂貴，因此對(duì)TGEV進(jìn)行分離鑒定最常用的方法就是細(xì)胞培養(yǎng)，而在實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室比較常用的細(xì)胞為豬睪丸細(xì)胞（ST）以及豬腎細(xì)胞（PK15），應(yīng)當(dāng)注意的是，第一次接種細(xì)胞往往不會(huì)表現(xiàn)出較為顯著的細(xì)胞病變（CPE），通常是在幾代盲傳以后，細(xì)胞才會(huì)出現(xiàn)明顯的特征性病變。

（2）熒光抗體檢查抗原將感染豬的空腸做成冰凍切片，進(jìn)行熒光染色，后用緩沖甘油封裱，在熒光顯微鏡下檢查，若上皮細(xì)胞及沿著絨毛的胞漿膜上出現(xiàn)熒光，則為陽(yáng)性。但到絨毛再生時(shí)檢出率低，感染7天就不能檢出。

（3）多重RT-PCR檢測(cè)多重RT - PCR 可在一個(gè)反應(yīng)中用多對(duì)引物擴(kuò)增多種的靶序列，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳檢測(cè)，看是否擴(kuò)增出目的條帶，依此來(lái)判斷是否含有相應(yīng)的靶微生物。Kim O 等成功構(gòu)建了診斷豬流行性腹瀉病毒（PEDV）和傳染性胃腸炎病毒（TGEV）的多重RT-PCR方法[17，18，19]，他們選擇PEDV膜蛋白基因和TGEV 的核蛋白基因作為檢測(cè)對(duì)象。PEDV和TGEV相應(yīng)基因的PCR 產(chǎn)物分別有412 和612個(gè)堿基，用PEDV 的引物不能擴(kuò)增TGEV，同時(shí)TGEV 不能引物也不能擴(kuò)增PEDV，而且所選引物也不與豬的其他病毒發(fā)生反應(yīng)。用各自的引物多重RT - PCR 可檢測(cè)到數(shù)量為10 TCID50的PEDV/TGEV。

4 展望

（1）本文對(duì)豬傳染性胃腸炎的基因組成和結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行了分析，為從分子水平上診斷和防治疾病奠定了基礎(chǔ)。

（2）由于豬傳染性胃腸炎尚無(wú)特效藥治療且乳汁免疫不能從根本上解決豬群，特別是仔豬的免疫問(wèn)題，因此進(jìn)行TGEV 基因工程活載體疫苗研制，研制TGE 和豬流行性腹瀉（PED）基因工程多價(jià)疫苗及轉(zhuǎn)基因植物疫苗，必將有廣闊的應(yīng)用前景。