丹紅注射液加臭氧對大鼠坐骨神經(jīng)損傷的修復(fù)作用觀察

董云鵬 呂朝暉 李偉舉

摘要：目的 活血中藥丹紅注射液加醫(yī)用臭氧對大鼠坐骨神經(jīng)卡壓損傷后的修復(fù)作用。方法 是將50只SD大鼠，雌雄各半，在每組雌雄數(shù)目相等的條件下，隨機(jī)將其分為4組，其中Ⅰ組作為模型對照組；Ⅱ組為中藥組，Ⅲ組為臭氧組，Ⅳ組為中藥+臭氧組。用Bennett方法制作坐骨神經(jīng)卡壓的大鼠模型，術(shù)后第7 d用注射器抽取40 μg/mL臭氧2mL注射至Ⅲ、Ⅳ組大鼠損傷坐骨神經(jīng)處，用注射器抽取丹紅注射液0.5 mL注射至Ⅱ、Ⅳ組大鼠損傷坐骨神經(jīng)處。用藥14 d后，測量大鼠足跡，計(jì)算坐骨神經(jīng)指數(shù)（SFI）。作坐骨神經(jīng)電生理檢測，觀察電針治療對大鼠坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)的作用機(jī)制。結(jié)果 術(shù)后第7 d，各組大鼠傷肢展爪反射消失，出現(xiàn)踝下垂，趾并攏不能分開，行走呈跛行步態(tài)，手術(shù)后肢拖地行走，說明造模成功。中藥組、臭氧組、中藥+臭氧組SFI值明顯高于模型對照組（P<0.01）；中藥+臭氧組SFI值明顯高于中藥組、臭氧組（P<0.01）；中藥組、臭氧組、中藥+臭氧組NCV值明顯高于模型對照組（P<0.01）；中藥+臭氧組NCV值明顯高于中藥組、臭氧組（P<0.01）。結(jié)論 活血中藥丹紅注射液加醫(yī)用臭氧能促進(jìn)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后的功能修復(fù)，值得臨床推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：丹紅注射液；坐骨神經(jīng)；神經(jīng)損傷；臭氧

中圖分類號：R745.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號：1007-2349（2018）10-0059-03

【Abstract】Objective：To observe the effect of Danhong injection plus medical ozone on the repair of rat sciatic nerve after compression injury. with activating blood. Methods：50 SD rats，half and half male and female，were randomly divided into 4 groups according to the equal number of males and females in each group. Group I was used as model control group，group II was Chinese medicine group，group III was ozone group，and group IV was Chinese medicine + ozone group. The rat model of sciatic nerve compression was made by Bennett method. On the 7th day after operation，40 mL of 40μg/mL ozone was injected into the injured sciatic nerve of rats in group III and IV，and 0.5 mL of Danhong injection injected into the injured sciatic nerve of rats in group II and IV. After 14-day treatment，the rat footprint was measured and the sciatic nerve index（SFI） was calculated. The electrophysiological test of sciatic nerve was performed to observe the mechanism of electroacupuncture treatment on the repair of sciatic nerve injury in rats. Results：On the 7th day after surgery，the reflexes of the injured limbs disappeared in each group. The ankles were drooping and the toes could not be separated. The walking was in a gait，and the hind limbs were dragged to the ground，indicating successful modeling. The SFI value of Chinese medicine group，ozone group and traditional Chinese medicine + ozone group was significantly higher than that of model control group（P

【Key words】Danhong injection，sciatic nerve，nerve injury，ozone

腰椎間盤突出癥是臨床常見疾病，常因椎間盤突出壓迫神經(jīng)，導(dǎo)致神經(jīng)損傷，而出現(xiàn)腰部疼痛，伴下肢放射痛、麻木等癥狀，甚至出現(xiàn)下肢乏力，肌力減退，嚴(yán)重影響患者生活治療[1]。目前對于壓迫性神經(jīng)損傷的治療缺乏規(guī)范有效的治療。研究證實(shí)活血中藥能改善神經(jīng)鞘膜血液循環(huán)，促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)的作用[2]。隨著國內(nèi)外臭氧治療的興起，臭氧的治療領(lǐng)域也逐漸拓寬，廣泛應(yīng)用于各種疼痛的療法坐骨神經(jīng)痛[3]。本研究的目的是將活血中藥丹紅注射液加醫(yī)用臭氧注射到坐骨神經(jīng)卡壓后的大鼠的坐骨神經(jīng)周圍，觀察丹紅注射液加醫(yī)用臭氧對造模大鼠的坐骨神經(jīng)損傷的修復(fù)作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 6月齡SD系SPF級大鼠48只，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號SCXK（粵）2013-0002.在每組雌雄數(shù)目相等的條件下，隨機(jī)將其分為4組，其中Ⅰ組作為模型對照組；Ⅱ組為中藥組，Ⅲ組為臭氧組，Ⅳ組為中藥+臭氧組。

1.2 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹苽?全部大鼠以300 mg/100 g劑量腹腔注射水合氯醛麻醉，麻醉成功后取側(cè)臥位。常規(guī)消毒鋪巾，于左后肢大腿中部頓性分離股二頭肌，暴露坐骨神經(jīng)干，用4.0鉻腸線環(huán)繞坐骨神經(jīng)結(jié)扎，造成坐骨神經(jīng)外膜輕度縮窄但不中斷神經(jīng)外膜表面血流以切口周圍肌肉產(chǎn)生一個(gè)小的短暫性的抽搐為度[4]。

1.3 給藥 在建模術(shù)后7 d（術(shù)后第7 d），用注射器抽取40 μg/mL臭氧2 mL注射至Ⅲ、Ⅳ組大鼠損傷坐骨神經(jīng)處，用注射器抽取丹紅注射液0.5 mL注射至Ⅱ、Ⅳ組大鼠損傷坐骨神經(jīng)處，用藥共14 d。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 坐骨神經(jīng)指數(shù)（SFI） 自制一長60 cm、寬10 cm、高10 cm的兩端開口木槽，將70 g白紙裁成與木槽等長等寬后鋪于槽底。大鼠雙后肢用顏料浸于雙踝關(guān)節(jié)著色后，將大鼠放于槽的一端，使其自行向槽的另一方行走，每側(cè)后肢各留下5～6個(gè)足印。選擇印跡清晰的足印分別測量正常足（N）和傷側(cè)足（E）的3個(gè)指標(biāo)：A、PL（足印長度）；B、TS（足趾寬度）；C、IT（中間足趾寬度）。將上述指數(shù)代入Bain公式，計(jì)算出坐骨神經(jīng)功能指數(shù)。Bain公式：SFI=109.5（ETS-NTS）/NTS-38.3（EPL-NPL）/NPL+13.3（EIT-NIT）/NIT-8.8。坐骨神經(jīng)功能指數(shù)SFI=0為正常，-100為完全損傷。

1.4.2 作坐骨神經(jīng)電生理檢測 采用近神經(jīng)刺激法記錄大鼠坐骨神經(jīng)的神經(jīng)傳導(dǎo)速度（NCV），顯露大鼠坐骨神經(jīng)及小腿三頭肌，將刺激電極、記錄電極分別鉤在坐骨神經(jīng)鉗央近端和遠(yuǎn)端，采用8通道Keypoint-2刑肌電圖儀檢測坐骨神經(jīng)NCV。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，2組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間差異顯著性檢驗(yàn)用方差分析，組間兩兩比較用Q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)后第7 d，各組大鼠傷肢展爪反射消失，出現(xiàn)踝下垂，趾并攏不能分開，行走呈跛行步態(tài)，手術(shù)后肢拖地行走，說明造模成功。

2.2 用藥后14 d，各組大鼠坐骨神經(jīng)指數(shù)（SFI）的比較 見表1。

4組SFI均數(shù)經(jīng)方差分析，F(xiàn)=57.55，P=0.00，故可認(rèn)為4組SFI值均數(shù)不相等。4組樣本均數(shù)兩兩比較的q檢驗(yàn)中，中藥組、臭氧組、中藥+臭氧組SFI值明顯高于模型對照組（P0.05）；中藥+臭氧組SFI值明顯高于中藥組（P<0.01）；中藥+臭氧組SFI值明顯高于臭氧組（P<0.01）。

2.3 用藥后14 d，各組大鼠坐骨神經(jīng)NCV比較 見表2。

4組SFI均數(shù)經(jīng)方差分析，F(xiàn)=67.32，P=0.00，故可認(rèn)為四組NCV值均數(shù)不相等。4組樣本均數(shù)兩兩比較的q檢驗(yàn)中，中藥組、臭氧組、中藥+臭氧組NCV值明顯高于模型對照組（P0.05）；中藥+臭氧組NCV值明顯高于中藥組（P<0.01）；中藥+臭氧組NCV值明顯高于臭氧組（P<0.01）。

3 討論

坐骨神經(jīng)痛主要由L4-L5神經(jīng)及S1-S3神經(jīng)組成，主要支配下肢運(yùn)動(dòng)及感覺。臨床上坐骨神經(jīng)損傷常由于腰椎間盤突出癥及梨狀肌綜合征引起，其病理特點(diǎn)是坐骨神經(jīng)受壓，神經(jīng)鞘膜缺血、炎癥水腫，導(dǎo)致神經(jīng)傳導(dǎo)異常，從而引起下肢感覺、運(yùn)動(dòng)異常。坐骨神經(jīng)損傷常屬于機(jī)械性神經(jīng)損傷，根據(jù)Sedden分類法按損傷程度不同分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度，Ⅰ度為神經(jīng)失用，II度為軸突離斷傷，Ⅲ度為神經(jīng)離斷傷。本實(shí)驗(yàn)大鼠模型通過用4.0鉻腸線環(huán)繞坐骨神經(jīng)結(jié)扎，造成坐骨神經(jīng)外膜輕度縮窄但不中斷神經(jīng)外膜表面血流以切口周圍肌肉產(chǎn)生一個(gè)小的短暫性的抽搐為度。所造成的坐骨神經(jīng)損傷屬于Ⅱ度損傷，其軸突及髓鞘損傷而神經(jīng)內(nèi)膜保持完整，其修復(fù)過程與周圍神經(jīng)損傷修復(fù)過程一致。研究證實(shí)，坐骨神經(jīng)受壓后，神經(jīng)鞘膜缺血壞死，周圍組織產(chǎn)生炎癥水腫，周圍巨噬細(xì)胞聚集，清除神經(jīng)鞘膜壞死組織，并分泌相關(guān)細(xì)胞因子，促進(jìn)神經(jīng)組織的修復(fù)與再生。

坐骨神經(jīng)損傷常引起下肢麻木、疼痛，活動(dòng)不利等癥狀，屬于中醫(yī)的痹證范疇。經(jīng)絡(luò)受損，經(jīng)氣不通，肢體失養(yǎng)是其病理改變。治療上常采用益氣活血、行氣通脈為法，療效顯著。補(bǔ)陽還五湯是臨床上常用于治療神經(jīng)損傷的方劑，大量研究證實(shí)補(bǔ)陽還五湯能改善損傷神經(jīng)鞘膜的血液循環(huán)，促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)因子的分泌，能有效地治療神經(jīng)損傷的相關(guān)疾病[5]。同時(shí)，活血類中藥也廣泛用于臨床治療周圍神經(jīng)損傷，如三七、丹參、紅花等。活血類中藥能改善神經(jīng)組織的血液循環(huán)，促進(jìn)炎癥因子的吸收，并促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬壞死組織，增強(qiáng)雪旺細(xì)胞修復(fù)功能，能有效地促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)。丹紅注射液主要由丹參、紅花提取物組成，具有較好的活血通脈的功能，臨床上常用于治療各種經(jīng)脈痹阻的疾病。但目前缺乏丹紅針對神經(jīng)損傷的修復(fù)作用的相關(guān)研究。

隨著國內(nèi)外臭氧治療的興起，臭氧的治療領(lǐng)域也逐漸拓寬，除了研究較為深入的臭氧自血療法、經(jīng)皮椎間盤突出癥的治療外，臭氧還被廣泛應(yīng)用于各種經(jīng)痛的治療，這些治療都取得了一定的效果。1988年，意大利醫(yī)生Verga首先將臭氧注入腰大肌及椎旁間隙治療腰腿痛；1990年，Muto等[6，7]將臭氧注入椎間盤及椎旁間隙治療腰椎盤突出，并于1998年報(bào)道93例，有效率為78%；Alexandre[8]總結(jié)從1994年至2000年6665例腰椎間盤突出癥臭氧治療研究結(jié)果，手術(shù)優(yōu)良率達(dá)80.9%。俞志堅(jiān)[9]對28例梨狀肌綜合征患者，行梨狀肌壓痛點(diǎn)局部注射濃度40μg/mL的醫(yī)用臭氧10mL。21例患者術(shù)后癥狀和體征消失，4例患者僅有臀部輕度疼痛，不影響工作和生活，3例治療無效。所有病例在醫(yī)用臭氧注射過程中及術(shù)后均為發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)及并發(fā)癥。臭氧能激活抗氧化酶和清除自由基作用，在生理和病理過程中過多的自由基和過氧化物。臭氧代謝后在局部直接改變神經(jīng)末梢組織缺氧狀況，浸潤注射臭氧過程，能使病變組織粘連與攣縮得到松解和疏導(dǎo)[10、11]。

本實(shí)驗(yàn)通過Bennett方法制作坐骨神經(jīng)卡壓的大鼠模型，術(shù)后第7天用丹紅注射液聯(lián)合臭氧治療，結(jié)果顯示中藥組、臭氧組、中藥+臭氧組SFI值明顯高于模型對照組（P0.05）；中藥+臭氧組SFI值明顯高于中藥組（P<0.01）；中藥+臭氧組SFI值明顯高于臭氧組（P<0.01）。中藥組、臭氧組、中藥+臭氧組NCV值明顯高于模型對照組（P0.05）；中藥+臭氧組NCV值明顯高于中藥組（P<0.01）；中藥+臭氧組NCV值明顯高于臭氧組（P<0.01）。由此可見活血中藥丹紅注射液加醫(yī)用臭氧能促進(jìn)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后的功能修復(fù)，值得臨床推廣應(yīng)用。

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