丹參中丹參酮類化學(xué)成分含量測定方法研究進(jìn)展

侯 麗

（本溪市化學(xué)工業(yè)學(xué)校，遼寧 本溪 117004）

丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge）為唇形科植物丹參的干燥根和根莖，具有活血化瘀、清心除煩、涼血消癰等功效?，F(xiàn)代研究表明，丹參酮類化合物是丹參中的主要有效成分之一。丹參含有豐富的丹參酮A、丹參酮B、二氫丹參酮、隱丹參酮、水溶性丹參素和脂溶性丹參酮。目前，丹參酮類化合物的檢測方法主要有高效液相色譜法、反相色譜法、超高效液相色譜法、超高效液相色譜-質(zhì)譜法、聲光可調(diào)近紅外光譜法等。在查閱大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，綜述丹參中丹參酮類化合物的檢測方法研究進(jìn)展，為丹參的開發(fā)利用提供理論參考。

1 丹參中丹參酮類化學(xué)成分含量測定方法

1.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度高等優(yōu)點，是中藥材含量測定中最常用的分析方法。

張琳琳等采用HPLC測定白花丹參中4種主要丹參酮成分丹參酮IIA、丹參酮I、隱丹參酮和二氫丹參酮I的含量，色譜條件為：Zorbax Extend-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相乙腈-0.2%乙酸水（57∶43），流速 1.0 mL/min，檢測波長 270 nm，柱溫30℃。試驗結(jié)果表明：丹參酮IIA、丹參酮I、隱丹參酮和二氫丹參酮 I分別在 0.138～2.760 μg （r＝0.999 9），0.024～0.496 μg （r＝0.999 9），0.096～1.920 μg （r＝0.999 9）和 0.035～0.700 μg （r＝0.999 9）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；加樣回收率分別為 100.06%，99.60%，99.91%，100.06%；丹參酮 IIA、丹參酮 I、隱丹參酮和二氫丹參酮 I含量范圍分別是 2.677～7.150，0.320～1.747，0.916～5.935，0.132～2.601 mg/g。

程茜菲建立HPLC同時測定丹參中迷迭香酸、丹酚酸B、二氫丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA含量的方法，采用Thermo C18柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲酸水和乙腈進(jìn)行梯度洗脫，柱溫30℃，流速1 mL/min，檢測波長270 nm，確定迷迭香酸、丹酚酸B、二氫丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮ⅡA 的線性范圍分別為：0.336～3.360 μg （r＝0.9999），4.772～47.720 μg （r＝0.9998），0.019 3～0.192 8 μg （r＝0.999 8），0.072～0.720 μg （r＝0.9997），0.077 2～0.772 0 （r＝0.999 8），0.174 4～1.744 0 μg （r＝0.999 9）； 平均加樣回收率分別為 100.2%，100.4%，98.6%，100.0%，99.3，99.1%，RSD 值分別 為 1.58%，1.25%，1.09%，1.21%，1.10%，1.06%。

李薇探討丹參中丹參酮類成分含量一測多評法的應(yīng)用效果，色譜柱為 C18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.2%乙酸（55∶45），流速 1.0 mL/min，柱溫30℃，波長270 nm。測定結(jié)果表明：丹參酮I在0.02～0.40 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝0.999 7， 回收率為 96.8%，RSD 為 1.3%；丹參酮 IIA 在 0.015～0.300 μg 范 圍 內(nèi) 線 性 關(guān) 系 良 好，r＝0.999 5， 回 收 率 為99.5%，RSD 為 1.6%；二氫丹參酮在 0.002 5～0.500 0 μg 范 圍 內(nèi) 線 性 關(guān) 系 良 好，r＝0.999 2， 回 收 率 為99.6%，RSD 為 1.2%；隱丹參酮在 0.015～0.300 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝0.999 0，回收率為 98.7%，RSD為 0.9%。

1.2 反相色譜法

反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系（正相色譜）相反，適于分離非極性、極性和離子型化合物。

高麗等建立用RP-HPLC同時測定裕丹參中丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮I、二氫丹參酮、丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸共8種活性成分含量的方法，色譜柱為 Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），用乙腈-0.1%磷酸梯度洗脫，流速 1.0 mL/min，紫外檢測波長280 nm，柱溫35℃。分析結(jié)果表明：8種成分均達(dá)到基線分離，線性關(guān)系良好（r≥0.999 8），平均加樣回收率為 99.80%～103.89%，RSD＜2.50%。

侯超采用反相高效液相色譜法同時測定丹參中5 種成分的含量，色譜柱為 Welchrom C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.1%磷酸（B）為流動相梯度洗脫，隱丹參酮、丹參酮IIA、丹酚酸、丹參素、迷迭香酸 分 別 在 0.420 0 ～16.800 0 μg，0.414 0～16.560 0 μg，0.656 0～26.240 0 μg，0.059 5～2.380 0 μg，0.346 0～13.840 0 μg 范圍內(nèi)線性良好，r＝0.999 9，RSD 均＜1.2%（n＝6），加樣平均回收率為 98.68%～99.15%。

1.3 超高效液相色譜法

超高液相色譜法的分理原理與高效液相色譜法相同，但其色譜柱采用1.7 μm小顆粒填充，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。與傳統(tǒng)高效液相色譜法比較，其有分離效率高、重復(fù)性好的特點

湯瑤等利用超高效液相色譜法聯(lián)合洗脫同時測定丹參酮提取物的隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA含量，采用Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18色譜柱（1.7 μm，2.1 mm×100 mm），以乙腈（A）-5%乙腈水溶液 （含 0.1%甲酸，pH 2.5）（B） 為流動相梯度洗脫，流速 0.25 mL/min，柱溫 35 ℃，進(jìn)樣量 5 μL，檢測波長269 nm。試驗結(jié)果顯示：隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA在線性范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系（r＞0.999）， 平均回收率 （n＝6）分別為 96.7%（RSD＝1.3%），96.4%（RSD＝0.94%），98.5%（RSD＝1.2%）；主峰與其他共存組分達(dá)到基線分離。

李耿等采用超高效液相色譜柱法同時測定丹參中丹參素、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA共11種化學(xué)成分的含量，色譜柱為BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動相為 0.5%甲酸溶液-乙腈（梯度洗脫），流速為 0.4 mL/min，檢測波長為265 nm和280 nm。該方法可在14 min內(nèi)完成色譜分析，11種成分的色譜峰有良好的分離度，各成分的質(zhì)量濃度與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及加樣回收率試驗的RSD＜2.0%。

1.4 其他測定方法

除以上測定方法外，有很多研究采用其他技術(shù)測定丹參酮類化學(xué)成分的含量。如超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)、HPLC結(jié)合近紅外光譜、微乳液相色譜和聲光可調(diào)近紅外（AOTF-NIR）光譜等。

趙國欣等建立同時測定丹參中原兒茶醛，丹酚酸B，迷迭香酸，丹參酮Ⅰ，丹參酮ⅡA，隱丹參酮，二氫丹參酮7種成分含量的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析方法，采用 Hypersil Gold C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）， 以 0.1%甲酸溶液-甲醇為流動相梯度洗脫，流速0.3 mL/min，柱溫30℃。采用電噴霧離子源（ESI）正負(fù)離子交替掃描模式檢測反應(yīng)離子。結(jié)果表明，7種成分在1 460 μg/L有良好的線性關(guān)系，平均回收率 83.41%～116.05%， 檢測限 0.046 0 μg/L，RSD＜4.7%。

邵玉藍(lán)等利用近紅外漫反射光譜技術(shù)與高效液相色譜（HPLC）相結(jié)合的方法，測定丹參飲片中丹參酮ⅡA，采用透射模式采集樣品近紅外光譜數(shù)據(jù)，以偏最小二乘法建立光譜數(shù)據(jù)與HPLC法分析結(jié)果定量校正模型，并以準(zhǔn)確性輪廓方法驗證近紅外模型的準(zhǔn)確度和精密度。結(jié)果表明，定量模型預(yù)測值和真實值之間的決定系數(shù) （r） 為 89.92%，RM-SECV 為0.065。

盧翠婷等采用微乳液相色譜建立丹參中隱丹參酮和丹參酮ⅡA含量測定方法，色譜柱為Diamonsal C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相 0.14 mol/L 十二烷基硫酸鈉-1.08 mol/L 正丁醇 0.070 mol/L 正辛烷-水微乳，流速0.7 mL/min，柱溫為室溫，檢測波長270 nm。 隱丹參酮和丹參酮ⅡA 分別在 0.962～38.48和1.022～40.88 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好， 相關(guān)系數(shù) r＞0.9995；平均加樣回收率 （n＝6） 分別為 96.5%和97.2%，RSD 分別為 2.71%和 1.69%。

蘇婷等探索聲光可調(diào)近紅外（AOTF-NIR）光譜技術(shù)快速測定丹參藥材丹參酮I含量的新方法，采用高效液相色譜法測定丹參藥材丹參酮Ⅰ含量后，用偏最小二乘法（PLS）建立含量與NIR光譜的校正模型，并利用NIR模型對丹參樣品進(jìn)行預(yù)測。試驗結(jié)果表明：NIR 模型校正均方根偏差（RMSEC）為 0.005 2，預(yù)測均方根偏差 （RMSEP）為 0.009 6，決定系數(shù)（CORRELATION）為 0.980 0；采用驗正集樣品進(jìn)行外部驗證，實測值與預(yù)測值的偏差為3.68%。

2 結(jié)語

丹參作為傳統(tǒng)的藥食兩用天然植物，具有極高的藥用價值和保健作用，而丹參酮類化學(xué)成分是發(fā)揮作用的主要活性物質(zhì)。近年來，雖然關(guān)于丹參中的丹參酮類化學(xué)成分含量測定的研究較多，但仍需要開展大量的試驗研究，為丹參資源的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。