液相色譜示差折光法測(cè)定無(wú)糖食品中8種糖和糖醇的含量

曹寧陽(yáng)，岑 琴

（1.沈陽(yáng)食品檢驗(yàn)所，沈陽(yáng) 110136；2.沈陽(yáng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院，沈陽(yáng) 110000）

糖醇作為糖的重要衍生物之一，具有甜度低、熱值低的特點(diǎn)，對(duì)人體血糖值上升無(wú)影響，因而被廣泛應(yīng)用于無(wú)糖食品中。按照國(guó)際慣例，無(wú)糖食品是指不含蔗糖和淀粉糖，而必須含有作為食糖替代品的糖醇（木糖醇、山梨糖醇、麥芽糖醇、甘露醇等）的一類(lèi)食品。GB13432-2004《預(yù)包裝特殊膳食用食品標(biāo)簽通則》中對(duì)無(wú)糖食品的規(guī)定是，包括所有的單糖和雙糖在內(nèi)在固體和液體食品中的總含糖量低于0.5 g/100 g（100mL）。為此建立利用高效液相示差折光方法，對(duì)無(wú)糖食品中多種糖和糖醇進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，此方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可作為無(wú)糖食品中糖及糖醇的定量分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

木糖醇（99.8%）、山梨糖醇（99.5%）、甘露糖醇（99.5%）、果糖（99.5%）、蔗糖（99.5%）均產(chǎn)自德國(guó) Dr公司；赤蘚醇 （99.9%）產(chǎn)自安譜公司；阿拉伯醇（99.0%）和半乳糖醇（98.0%）產(chǎn)自 TRC 公司。

乙腈為色譜純，水為去離子水，其它試劑均為分析純。

供試樣品為超市購(gòu)買(mǎi)的無(wú)糖糕點(diǎn)、無(wú)糖麥麩粉、無(wú)糖餅干和無(wú)糖八寶粥。

1.2 儀器與設(shè)備

島津LC20A高效液相色譜儀，配有示差檢測(cè)器；HZF-A500電子天平（福州華志科學(xué)儀器有限公司）；KQ-250DB超聲波發(fā)生器 （昆山市超聲儀器有限公司）；H2050R離心機(jī) （長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 HPLC 色 譜 條 件 色 譜 柱 ：Thermo APS-2 HYPERSIL，250 mm×4.6 mm，5 μm； 柱溫：40 ℃；流速：1.2 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。流動(dòng)相：乙腈∶水＝90∶10

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 分別準(zhǔn)確稱取糖及糖醇50 mg（精確至 0.1mg），置于 10 mL 容量瓶中，加入適量水溶解，定容，配置成 0.5 g/100mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 樣品前處理 準(zhǔn)確稱取 2.5 g（精確到 0.001 g）試樣于50 mL具塞離心管中，分別用水和80%乙腈水作為提取液進(jìn)行提取。加提取液約10 mL，渦旋混勻，水浴超聲 15 min，于 4 000 r/min離心 5 min，將提取液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中；在殘?jiān)屑犹崛∫?0 mL重復(fù)提取一次，提取液轉(zhuǎn)移至同一容量瓶中，用提取液定容至刻度，混勻。取上清液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，用高效液相色譜儀進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離條件優(yōu)化

采用 Thermo APS-2 HYPERSIL （250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，以不同比例的乙腈水溶液流速作為流動(dòng)相洗脫，在柱溫40℃的條件下，采用不同流速優(yōu)化最佳分離條件。

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以90%乙腈水溶液作洗脫液，流速1.2 mL/min，可使赤蘚醇、木糖醇、阿拉伯醇、果糖、山梨糖醇、甘露醇、半乳糖醇、蔗糖這8種組分保持良好的分離度和峰形，詳見(jiàn)圖1。

圖1 8種糖和糖醇液相分析色譜圖Figure 1 Liquid chromatography of eight kinds of sugar and sugar glycol

2.2 方法的回收率和精密度

取同一空白樣品6份，采用不同的前處理方法，分別添加3個(gè)濃度水平的8種糖和糖醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按優(yōu)化后的條件進(jìn)行測(cè)定。每個(gè)濃度平行測(cè)定6次，計(jì)算樣品組分的回收率和精密度，結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

表1 水提取液的回收率和精密度Table 1 Recovery and precision of water extraction solution /%

表2 80%乙腈水提取液的回收率和精密度Table 2 The recovery and precision of 80%acetonitrile water extraction solution /%

由表1和表2中的數(shù)據(jù)可見(jiàn)，水的提取效率更高，且8種糖和糖醇的回收率在92.9%～102.6%之間，精密度在0.98%～6.47%之間，具有良好的回收率和精密度。

2.3 陽(yáng)性樣品驗(yàn)證

用優(yōu)化條件檢測(cè)市售的無(wú)糖食品，同時(shí)按照GB/T 5009.140-2008 和 GB 5009.97-2016 的方法對(duì)無(wú)糖食品中的甜味劑安賽蜜和甜蜜素進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可知：無(wú)糖食品中的木糖醇和山梨糖醇添加量較大，且有4種產(chǎn)品的含糖量超過(guò)了0.5%的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，有3種產(chǎn)品含有甜味劑安賽蜜。

3 結(jié)論

采用氨基柱分離，在柱溫40℃、90%乙腈水為流動(dòng)相、流速1.2 mL/min的條件下，用高效液相色譜儀和示差檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定無(wú)糖食品中的赤蘚醇、木糖醇、阿拉伯醇、山梨糖醇、甘露醇、半乳糖醇、果糖、蔗糖。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法前處理簡(jiǎn)單、靈敏度高、回收率（＞92.9%）和精密度（RSD＜6.47%）良好；在 40 min內(nèi)完成8種糖和糖醇的分離，且結(jié)果比較理想。

表3 無(wú)糖食品中8種糖和糖醇及2種甜味劑的檢測(cè)結(jié)果Table 3 Test results of 8 kinds of sugar，sugar alcohols and 2 kinds of sweeteners in sugar-free food

從陽(yáng)性樣品可以看出，無(wú)糖食品并非真正的“無(wú)糖”，一些無(wú)糖食品添加了合成甜味劑或者超量的糖醇類(lèi)物質(zhì)。呼吁相關(guān)部門(mén)嚴(yán)格監(jiān)管無(wú)糖食品，確保無(wú)糖食品真正無(wú)糖。