化妝品中性激素檢測方法的改進(jìn)

仇朝紅，宋薇香

（1．青海省藥品不良反應(yīng)監(jiān)測中心，青海 西寧 810007；2．青海制藥廠有限公司，青海 西寧 810001）

我國化妝品衛(wèi)生規(guī)范規(guī)定采用高效液相色譜法測定性激素，系統(tǒng)用流動相甲醇-水（60:40）測定雌三醇保留時間為2～3分鐘，易被干擾，雌酮和己烯雌酚分離效果不佳，選用乙腈-水（60:40）為流動相七種標(biāo)準(zhǔn)混合測定時分離效果好[1-2]。

1 儀器與試藥

Waters 2695-2487高效液相色譜儀，H1850R臺式高速冷凍離心機(jī)，Sartorius CP225D電子天平。雌酮對照品、雌二醇對照品、雌三醇對照品、己烯雌酚對照品睪丸酮對照品、甲基睪丸酮對照品、黃體酮對照品。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜參考條件

色譜柱：Phenomenex C18柱，250×4.6 mm，10 μm；檢測波長：二極管陣列檢測器（雌性激素-204 nm，雄性激素-245 nm），流動相：乙腈：水=60：40，流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 雌激素標(biāo)準(zhǔn)溶液

雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.200 g，用少量甲醇溶解，移至100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。

2.3 雄激素標(biāo)準(zhǔn)溶液

睪丸酮、甲基睪丸酮各0.600 g，用少量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。1 mL此溶液含以上兩種雄激素6.00 mg。移取此標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0 mL置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。

2.4 孕激素標(biāo)準(zhǔn)溶液

黃體酮0.600 g，用少量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。1mL此溶液含孕激素6.00 mg。移取此標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0 mL置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。

2.5 加樣回收率試驗

精密稱取樣品（檢品編號201370115）2.0 g，置具塞刻度管中，共三份，分別精密加入七種性激素對照品0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL，按樣品方法處理，精密量取10 μL，注入液相色譜儀。三份樣品量均為0（μg）：

2.5.1 黃體酮

（1）對照品加入量7.2288 μg，實測值6.9542 μg，實測加入值6.9542 μg，回收率96.20%；（2）對照品加入量7.2288 μg，實測值7.0365 μg，實測加入值7.0365 μg，回收率97.33%；（3）對照品加入量7.2288 μg，實測值7.2654 μg，實測加入值7.2654 μg，回收率100.50%。平均回收率98.01%。

2.5.2 雌二醇

（1）對照品加入量160.750 μg，實測值159.31 μg，實測加入值159.31 μg，回收率99.10%；（2）對照品加入量160.750 μg，實測值158.61 μg，實測加入值158.61 μg，回收率96.20%；3：對照品加入量160.750 μg，實測值161.23 μg，實測加入值161.23 μg，回收率100.29%。平均回收率98.53%。

2.5.3 雌三醇

（1）對照品加入量160.264 μg，實測值159.326 μg，實測加入值159.326 μg，回收率99.41%；（2）對照品加入量160.264 μg，實測值158.345 μg，實測加入值158.345，回收率98.80%；（3）對照品加入量160.264 μg，實測值160.12 μg，實測加入值160.120 μg，回收率99.91%。平均回收率99.37%。

2.5.4 己烯雌酚

（1）對照品加入量160.28 μg，實測值157.316 μg，實測加入值157.316 μg，回收率98.15%；（2）對照品加入量160.28 μg，實測值158.344 μg，實測加入值158.344 μg，回收率98.79%；（3）對照品加入量160.28 μg，實測值159.140 μg，實測加入值159.140 μg，回收率99.28%。平均回收率98.74%。

2.5.5 雌酮

（1）對照品加入量為160.712 μg，實測值159.316 μg，實測加入值159.316μg，回收率99.13%；（2）對照品加入量160.712 μg，實測值158.344 μg，實測加入值158.344 μg，回收率98.52%；（3）對照品加入量160.712 μg，實測值160.144 μg，實測加入值160.144 μg，回收率99.64%。平均回收率99.09%。

2.5.6 甲基睪丸酮

（1）對照品加入量12.10 μg，實測值11.34 μg，實測加入值為11.34 μg，回收率93.71%；（2）對照品加入量12.10 μg，實測值10.25 μg，實測加入值10.25 μg，回收率84.71%；（3）對照品加入量12.10 μg，實測值10.99 μg，實測加入值10.99μg，回收率90.82%。平均回收率89.75%。

2.5.7 睪丸酮

（1）對照品加入量12.00 μg，實測值11.84 μg，實測加入值11.84 μg，回收率98.66%；2：對照品加入量12.00 μg，實測值10.65 μg，實測加入值10.65 μg，回收率88.75%；3：對照品加入量12.00 μg，實測值為10.69 μg，實測加入值10.69 μg，回收率89.08%。平均回收率92.16%。

2.6 檢測限

性激素-雌三醇：檢測限為0.025 μg；性激素-雌酮：檢測限為0.05 μg；性激素-雌二醇：檢測限為0.025 μg；性激素-睪丸酮：檢測限為0.0025 μg；性激素-己烯雌酚：檢測限為0.0125 μg；性激素-甲基睪丸酮：檢測限為0.0025 μg；性激素-黃體酮：檢測限為0.003 μg。

2.7 樣品測定

分別稱取兩批樣品各2.0 g，置100 mL錐形瓶中，加入飽和氯化鈉溶液50 mL，硫酸2 mL，振蕩溶解后轉(zhuǎn)移至100 mL分液漏斗。以環(huán)己烷30 mL分三次萃取，離心分離。合并環(huán)己烷并在水浴上餾除。用甲醇溶解殘留物，轉(zhuǎn)移到10 mL具塞比色管中，用甲醇稀釋到刻度?；靹蚝?，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，分別取樣10 μL注入高效液相色譜儀，結(jié)果均未檢出性激素。

3 討 論

化妝品中性激素的檢測對控制化妝品產(chǎn)品質(zhì)量保障人體健康具有非常重要的意義[3]。采用該方法測定七種性激素，專屬性強(qiáng)，分離效果好，為化妝品中多種禁限用指標(biāo)檢測提供了參考。