瑪咖不同提取物對(duì)雄性小鼠交配能力的影響

陳愷 韋會(huì)平(通訊作者)

（攀枝花學(xué)院醫(yī)學(xué)院 四川 攀枝花 617000）

瑪咖（LepidiummeyeniiWalp）為十字花科獨(dú)行菜屬一年生草本植物，原產(chǎn)于海拔3500米以上的秘魯安第斯山脈地區(qū)，在原產(chǎn)地作為當(dāng)?shù)刂饕r(nóng)產(chǎn)品已有上千年的栽培歷史，因其具有增強(qiáng)生育力和提高性功能的作用而聞名于世[1]。上世紀(jì)80年代聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)建議世界各國(guó)推廣瑪咖種植[2]，2011年開(kāi)始，該作物被衛(wèi)生部作為新資源食物被引入國(guó)內(nèi)，開(kāi)始在我國(guó)大量推廣人工種植。2012-2014年，瑪咖被引入到四川攀枝花市高山地區(qū)進(jìn)行規(guī)?；N植，并因其穩(wěn)定的產(chǎn)量和較高的品質(zhì)聞名國(guó)內(nèi)外。2015年后，因?yàn)槲覈?guó)各地盲目大規(guī)模發(fā)展瑪咖種植及國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)變化等原因，瑪咖產(chǎn)業(yè)一落千丈，面臨破產(chǎn)。目前，關(guān)于瑪咖的實(shí)際藥用保健價(jià)值眾說(shuō)紛紜。有人認(rèn)為瑪咖較高的藥用價(jià)值不容否認(rèn)，也有人認(rèn)為瑪咖根本就沒(méi)有什么真正的藥用功效。本文以攀枝花產(chǎn)瑪咖為研究對(duì)象，通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)觀察其對(duì)雄性動(dòng)物交配能力的影響，研究期藥效活性部位，為進(jìn)一步深入研究其化學(xué)成分和藥效提供參考。

1.材料與方法

1.1 藥品與試劑

瑪咖由攀枝花三博士科技有限公司提供，為產(chǎn)自四川省攀枝花市海拔3300的格薩拉風(fēng)景區(qū)的正品曬干黃瑪咖。苯甲酸雌二醇由寧波第二激素廠生產(chǎn)（批號(hào)20151121）。萬(wàn)艾可由美國(guó)輝瑞公司生產(chǎn)（批號(hào)1183028）。其它試劑均為市售分析純。SZX7型體視顯微鏡(日本，Olympus公司)；DMIL-LED 型倒置顯微鏡（德國(guó)，Leica 公司），SC-100-01-02-C 型一次性精子計(jì)數(shù)板（荷蘭，Leja 公司），Direct-Q5 型MilliQ 超純水器（美國(guó)，Millipore 公司）。其它有低溫高速離心機(jī)、電子天平、微量移液器、手術(shù)器械、眼科剪、眼科鑷、持針鉗、酒精燈等。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

6～8周齡清潔級(jí)昆明系小鼠，購(gòu)于重慶市中藥研究所動(dòng)物中心（動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(渝)20150006），雌、雄各半，體重18-22g。雌鼠群養(yǎng)，雄鼠單籠飼養(yǎng)，控制光照時(shí)間為每日7∶00～18∶00，飼喂普通飼料，自由飲水。

1.3 瑪咖提取物的制備

瑪咖樣品粉碎，過(guò)40目篩，依次分別用10倍體積的石油醚、無(wú)水乙醇、蒸餾水在50℃下磁力攪拌回流提取3次，每次30min，回收溶劑，再分別用1%聚山梨酯溶解，得到醚提取物、醇提取物、水提取物三種不同的混懸劑。另取等量瑪咖粉末樣品，混合用蒸餾水作溶劑進(jìn)行提取，同樣的方法制備得到混合水提取物的混懸劑。所有混懸劑瑪咖含量均相當(dāng)于生藥250mg/mL.

1.4 試驗(yàn)方法

60只成年雄性小鼠隨機(jī)平均分為6組：對(duì)照組（0.9%生理鹽水）、萬(wàn)艾可組（0.013g/kg BW）、醚提取物組（5 g生藥/kg BW）、醇提取物組（5g生藥/kg BW）、水提取物組（5g生藥/kg BW）及混合水提取物組（5g生藥/kg BW）。除萬(wàn)艾可組于試驗(yàn)前1h灌胃給藥外，其余各組均連續(xù)灌胃給藥28d。灌胃容積均為0.2mL/10gBW，qd。實(shí)驗(yàn)前48h雌鼠皮下注射苯甲酸雌二醇（0.02mg/只），再于晚上7～11時(shí)將雄性小鼠混合放入籠中5min，使其適應(yīng)環(huán)境，然后每籠加入1只雌鼠，觀察并記錄捕捉潛伏期（雄鼠第1次捕捉雌鼠的時(shí)間）、20min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠的次數(shù)、交配潛伏期（雄鼠第一次與雌鼠交配的時(shí)間）、20min內(nèi)交配次數(shù)[3]。數(shù)據(jù)以（±s）表示，使用SPSS 17.0 版軟件，通過(guò)t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。

2.結(jié)果與分析

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。瑪咖醚提取物組、醇提取物組對(duì)雄鼠捕捉潛伏期、捕捉雌鼠次數(shù)、交配潛伏期及20min內(nèi)交配次數(shù)無(wú)顯著影響（P＞0.05），而水提取物組、混合水提取物組均可顯著降低雄鼠捕捉潛伏期和交配潛伏期，并增加捕捉雌鼠次數(shù)和20min內(nèi)交配次數(shù)?；旌纤崛∥锝M和水提取物組相比，前者的捕捉潛伏期和交配潛伏期顯著低于后者，前者的捕捉雌鼠次數(shù)和20min內(nèi)交配次數(shù)顯著高于后者。

表1 瑪咖不同提取物對(duì)雄性小鼠交配能力的影響（±s，n=10）

表1 瑪咖不同提取物對(duì)雄性小鼠交配能力的影響（±s，n=10）

注：與對(duì)照組比較，*代表P＜0.05，**代表P＜0.01

組別 捕捉潛伏期（s） 捕捉次數(shù) 交配潛伏期（s） 交配次數(shù)對(duì)照組 132.3±12.14 8.7±1.42 317.3±14.26 4.2±1.23醚提取物組 133.1±14.51 8.4±2.11 322.4±19.21 4.5±1.45醇提取物組 132.8±12.65 8.8±1.47 318.4±15.39 4.4±1.12水提取物組 119.5±11.12* 9.9±1.22* 300.2±10.54* 5.9±0.89*混合水提取物組 105.3±10.16** 11.1±1.83** 283.4±18.21** 7.2±1.64**萬(wàn)艾可組 94.6±11.21** 13.5±1.79** 251.3±12.66* 8.3±1.25**

3.結(jié)論與討論

本試驗(yàn)中，瑪咖醚提取物組、醇提取物組對(duì)雄鼠捕捉潛伏期、捕捉雌鼠次數(shù)、交配潛伏期及20min內(nèi)交配次數(shù)無(wú)顯著影響，而水提物則能顯著降低雄鼠捕捉潛伏期和交配潛伏期、增加捕捉雌鼠次數(shù)和20min內(nèi)交配次數(shù)。這說(shuō)明，瑪咖水提物能顯著提高雄性小鼠的性功能。以往的很多試驗(yàn)都證明，瑪咖能顯著提高試驗(yàn)動(dòng)物的性功能[3-9]。本試驗(yàn)結(jié)果與曹東、王曦晨等人的研究結(jié)果相同[3-4]。

本試驗(yàn)中，瑪咖在用石油醚、乙醇先行提取后，再用水提取得到的水提取物，和不用石油醚、乙醇先行提取，而直接用水提取得到的混合水提取物的藥用功效存在顯著差異。后者的雄鼠捕捉潛伏期、交配潛伏期均顯著低于前者，捕捉雌鼠次數(shù)、20min內(nèi)交配次數(shù)均顯著高于前者。這充分說(shuō)明在用石油醚、乙醇和水依次提取瑪咖的過(guò)程中，可能有部分藥用活性成分進(jìn)入了石油醚或乙醇的提取物中，導(dǎo)致水提取物的藥用功效顯著降低。而混合水提取物中，存在多種成分的共同作用，導(dǎo)致其對(duì)雄鼠性功能的影響更為顯著。

有研究資料表明，關(guān)于瑪咖提高雄性小鼠精子數(shù)量的機(jī)制，可能與其中含有的瑪咖酰胺、瑪咖烯以及豐富的精氨酸和果糖等關(guān)系密切[10-11]。王曦晨等人的研究表明，瑪咖水提浸膏具有提高半去勢(shì)大鼠的交配能力和陰莖勃起功能的作用，其機(jī)制可能與調(diào)整失衡的血清性激素水平有關(guān)[4]。我們以往對(duì)攀產(chǎn)瑪咖的測(cè)定分析表明，瑪咖中生物堿、水溶性多糖、精氨酸、Zn的含量都較高[12]?，F(xiàn)代科學(xué)研究證明，這些成分本身與動(dòng)物的性能力、精子的生成或活力等都有一定關(guān)系。本試驗(yàn)中，瑪咖混合水提取物對(duì)雄性小鼠性交配能力的影響要顯著高于水提取物，這證明瑪咖對(duì)小鼠性功能的影響極有可能是這些成分共同作用的結(jié)果。

綜上所述，本試驗(yàn)充分表明，瑪咖能顯著提高雄性小鼠的交配能力，藥用活性成分主要存在于水提物中，且可能是多種成分共同作用的結(jié)果。

[1]Gonzales GF, Ruiz A, Gonzales C, Villegas L, Cordova A.Effect of Lepidiummeyenii (Maca) roots on spermatogenesis of male rats[J]. Asian Journal of Andrology, 2001, 3(3):231-233.

[2]Gonzales GF, Gonzales C, Gonzales-Casta eda C.Lepidiummeyenii (Maca): a plant from the highlands of Peru--from tradition to science[J].ForschendeKomplement rmedizin, 2009, 16(6): 373-380.

[3]曹東,薛潤(rùn)光,顧鑒秋.麗江瑪咖不同提取物對(duì)小鼠性行為及性激素的影響[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2012,33(9): 53-54.

[4]王曦晨,姜京徽,肖敏,劉美,等.麗江產(chǎn)瑪咖對(duì)雄性半去勢(shì)大鼠性功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].華西藥學(xué)雜志,2016,31(4):365-367.

[5]楊建英,張勇法,孟祥平,等.嘔吐毒素對(duì)小鼠精液質(zhì)量和生育力的影響[J].環(huán)境與健康雜志,2016,33(2): 118-120.

[6]VomSaal FS, Cooke PS, Buchanan DL, et al. A physiologically based approach to the study of bisphenol A and other estrogenic chemicals on the size of reproductive organs，daily sperm production，and behavior[J].Toxicology &Industrial Health, 1998, 14(1-2): 239-260.

[7]Gonzales GF, Nieto J, Rubio J, et al. Effect of Black maca (Lepidiummeyenii) on one spermatogenic cycle in rats[J]. Andrologia 2006, 38(5):166-172.

[8]Gonzales C, Rubio J, Gasco M, et al. Effect of shortterm and long-term treatments with three ecotypes of Lepidiummeyenii (Maca) on spermatogenesis in rats[J].Journal of Ethnopharmacology, 2006, 103(3): 448-454.

[9]余龍江,梅松,金文聞,程華,孫友平.瑪咖提取物對(duì)雄性小鼠性活力的影響[J].中國(guó)新藥雜志,2003,12(12):1014-1015.

[10]杜廣香.瑪咖生物堿的分離純化及抗氧化活性研究[D]. 廣州:華南理工大學(xué),2011.

[11]Dini A, MigliuoloG ,Rastrelli L et al .Chemical composition of Lepidiummeyenii[J]. Food Chemistry,1994,49(4): 347-349.

[12]王德珍，王輝，李學(xué)剛，韋會(huì)平.瑪咖HPLC指紋圖譜研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，12（24）:29-31.