高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)食品中獸藥殘留量檢測(cè)分析

陳敏

摘 要：本文采用高效液相色譜，質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)法提取、凈化樣品，在采取0.1mol/L緩沖液以及乙腈混合溶液作為提取溶劑時(shí)，四環(huán)素獸藥、喹諾酮類、磺胺類以及金剛烷胺等獸藥的回收效果均較好，回收率均能達(dá)到要求，解決了四環(huán)素類獸藥與喹諾酮類以及磺胺類獸藥難以在同時(shí)進(jìn)行提取的問題。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) 獸藥殘留量

中圖分類號(hào)：R917 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2017）11（a）-0088-02

隨著現(xiàn)代人們對(duì)于健康生活的重視，食品安全問題已經(jīng)得到更多人群的關(guān)注，這對(duì)于食品檢測(cè)工作機(jī)構(gòu)來說，無(wú)疑是提出了更大的工作挑戰(zhàn)，其將會(huì)面臨著更大的檢測(cè)工作量。因此，如何建立一套快速的獸藥殘留藥物檢測(cè)方式顯得尤為重要。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

準(zhǔn)備的儀器有超高效液相色譜儀、高速離心機(jī)、旋渦混合器、超純水儀以及旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，準(zhǔn)備的試劑有29種獸藥，甲酸、乙腈為色譜純、水為超純水、吸附劑C18、NH2。

對(duì)于以上試劑分別取合適的量進(jìn)行研究，對(duì)于四環(huán)素類的獸藥溶解以及定容時(shí)采用甲醇，對(duì)于磺胺類的獸藥溶解以及定容時(shí)采用乙腈，保存的條件在4℃以下。分別吸取以上的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.25mL于25mL容量瓶，用乙腈來進(jìn)行稀釋并定容，配制成質(zhì)量濃度為1.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液I；分別吸取四環(huán)素類獸藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各0.5mL，吸取金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1mL，分別吸取喹諾酮類以及磺胺類獸藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1mL于100mL容量瓶，同樣也是用乙腈來進(jìn)行稀釋并定容，配制混合標(biāo)準(zhǔn)工作液II，其中四環(huán)素類獸藥質(zhì)量濃度為0.5mg/L，金剛烷胺質(zhì)量濃度為0.1mg/L，其他獸藥質(zhì)量濃度為1.0mg/L。

1.2 樣品前處理方法

在50mL離心管中加入2g的標(biāo)準(zhǔn)樣品，加入3mL乙腈、2mL 0.1mol/L緩沖溶液，并進(jìn)行2min旋渦、5min離心，將上清液收集起來放入其他的離心管中。再加5mL乙腈在剩余溶液部分，重復(fù)上述動(dòng)作進(jìn)行旋渦、離心，將上清液收集放入上述離心管中。在收集的上清液當(dāng)中放入乙酸200μL，氯化鈉1g，再一次進(jìn)行1min旋渦、5min離心，將上層的2mL乙腈放在離心管中，加入100mg C18、100mgNH2，再進(jìn)行1min旋渦、5min離心，吹干上清液當(dāng)中的氮?dú)猓谑Ｏ碌娜芤寒?dāng)中加入甲醇1mL、甲酸水0.1%，進(jìn)行定容，然后進(jìn)行過濾。

1.3 色譜條件

色譜柱：AcquityTMBEHRP18柱；流動(dòng)相：A相，甲酸甲醇0.1%；B相：甲酸水0.1%；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：30℃。

1.4 質(zhì)譜條件

電離模式：電噴霧正離子ESI（+）；毛細(xì)管電壓：3.0kV；離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度：380℃；脫溶劑氣流量：550L/h；錐孔反吹氣流量：50L/h；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式。

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1 質(zhì)譜條件

在處于電噴霧正離子這一模式當(dāng)中時(shí)，掃描標(biāo)準(zhǔn)的溶液就可以將每種類型的獸藥所含離子獲取，將得到的離子進(jìn)行掃描就可以獲取最佳的碰撞能量值。

2.1.2 梯度洗脫條件的優(yōu)化

本文的研究中所選取的流動(dòng)相有兩種，第一種為甲醇-0.1%甲酸水，第二種為乙腈-0.1%甲酸水，將這兩者進(jìn)行效果比較，研究顯示第一種選擇的分離效果要好于第二種。

梯度洗脫條件的優(yōu)化：在多次研究之后，最好的梯度洗脫條件得以確定，獲得了最好的藥物分離效果，其藥物總離子流色譜圖如圖1所示。

2.2 定容溶液的選擇

在本次研究中，分別對(duì)比5種類型的定溶液，通過對(duì)比的結(jié)果顯示，比例為10∶90時(shí)效果最好，比例為50∶50時(shí)效果最差。通過試驗(yàn)后選擇0.1%甲醇-甲酸水為定容溶液。

2.3 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.3.1 提取溶劑的選擇

對(duì)于本次研究來說，選擇提取的溶劑是一大難點(diǎn)，對(duì)于四環(huán)素類獸藥與喹諾酮類以及磺胺類獸藥來說，難以在同時(shí)進(jìn)行提取工作，依據(jù)前人研究的基礎(chǔ)之上，采取乙腈作為提取溶劑時(shí)，四環(huán)素獸藥、喹諾酮類以及金剛烷胺等獸藥的回收率不高；采取5%醋酸乙腈作為提取溶劑時(shí)，四環(huán)素獸藥、喹諾酮類獸藥的回收率也只在20%～30%；采取0.1mol/L緩沖液作為提取溶劑時(shí)，喹諾酮類以及四環(huán)素類獸藥的回收效果較好，相對(duì)磺胺類獸藥的回收率較低，為50%左右。本文最終選擇0.1mol/L緩沖液-乙腈作為提取液。

2.3.2 凈化方法的確定

本研究采用0.1mol/L緩沖溶液-乙腈進(jìn)行提取，取2mL乙腈相，C18、NH2分散雜質(zhì)，吹干上清液中的氮?dú)?，選取1mL甲醇-0.1%甲酸進(jìn)行定容。

結(jié)果表明：凈化效果好，吸附劑的用量在50mg時(shí)，凈化效果較差，用量在100mg時(shí)，幾乎沒有獸藥吸附，當(dāng)用量在150mg時(shí)，有少量獸藥被吸附，以上數(shù)據(jù)表明用量在100mg，所達(dá)到的效果最好。因此，本文選取用量為100mg 的C18、100mg的NH2。

2.4 效果檢測(cè)

通過試驗(yàn)表明，29種獸藥在合適的質(zhì)量濃度區(qū)間，有著較好的線性關(guān)系，在29種獸藥的LOQ水平、20μg/kg以及50μg/kg等3個(gè)水平做加標(biāo)回收率試驗(yàn)，每一水平做5個(gè)平行樣品。稱取兩樣品，加入合適溶液，進(jìn)行1min渦旋，按照前文的方法來提取、凈化、測(cè)定。經(jīng)檢測(cè)29種獸藥在豬肉、雞肉、豬肝以及雞肝等當(dāng)中的回收率平均達(dá)到了71.5%～93.2%，符合多殘留分析的要求。

3 結(jié)語(yǔ)

通過本文的研究，在采取0.1mol/L緩沖液以及乙腈混合溶液作為提取溶劑時(shí)，四環(huán)素獸藥、喹諾酮類、磺胺類以及金剛烷胺等獸藥的回收效果均較好，回收率均能達(dá)到要求，解決了四環(huán)素類獸藥與喹諾酮類以及磺胺類獸藥難以在同時(shí)進(jìn)行提取的問題，建立了29種獸藥快速檢測(cè)的方法，經(jīng)檢測(cè)29種獸藥在豬肉、雞肉、豬肝以及雞肝等當(dāng)中的回收率平均達(dá)到了71.5%～93.2%，符合多殘留分析的要求。并對(duì)提取方式、凈化方法等有了一個(gè)新的優(yōu)化處理，為食品檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供了更為便捷的檢測(cè)方式，利于對(duì)大量的動(dòng)物樣品獸藥的殘留情況進(jìn)行監(jiān)控。

參考文獻(xiàn)

[1] 譚陽(yáng)陽(yáng)，牛墨，田紅.QuEChERS——超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法在動(dòng)物源食品中禁限用獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].食品安全導(dǎo)刊，2017（9）：112-113.

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