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    基于Caco-2細(xì)胞模型的3種大豆肽降膽固醇能力研究

    2021-02-05 05:53:14張慧娟付冰冰
    中國(guó)食品學(xué)報(bào) 2021年1期
    關(guān)鍵詞:辛伐他汀多肽抑制率

    張慧娟,付冰冰,王 靜

    (北京工商大學(xué)食品與健康學(xué)院 中國(guó)-加拿大食品營(yíng)養(yǎng)與健康聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室(北京) 北京100048)

    心腦血管疾病是我國(guó)乃至全球致死率最高的疾病,而高血脂癥則是心腦血管疾病的主要誘因。由于藥物的副作用很難消除,很多研究開始側(cè)重于尋求無(wú)毒、健康的藥物替代品,因此食源性功能成分對(duì)人體脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用得到越來(lái)越多的關(guān)注[1]。大豆多肽因其多樣的生物功效得到越來(lái)越廣泛的關(guān)注[1-5]。Anderson 等[6]證明人體每天攝入25 g 大豆蛋白,可以降低血清中的低密度脂蛋白、膽固醇和甘油三酯的含量分別為9.2%,12.9%和0.5%。也有研究表明連續(xù)5 周每天攝入20 g 大豆蛋白與80 mg 異黃酮,可以降低中年人患冠心病的發(fā)病率[7];含高植物蛋白的豆奶可以顯著降低血清中的膽固醇含量[8]。據(jù)報(bào)道,大豆蛋白水解物(SPH)具有比完整大豆蛋白更高的體內(nèi)降膽固醇能力[9]。大豆多肽的制取一般采用單一、多種專一、非專一性蛋白酶水解而得。大豆多肽具有良好的溶解性、吸水性等理化性質(zhì),并具有易吸收,降膽固醇,降血壓,抗氧化,抗炎等多種生理功能[10]。降膽固醇大豆多肽經(jīng)大豆蛋白加工處理,一般由3~6 個(gè)氨基酸組成[11]。張清明[12]以大豆多肽、谷胱甘肽等制成調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的功能性飲品。此外Zhong等[13]以喂食高脂飼料的小鼠為動(dòng)物模型,探究了大豆蛋白酶解產(chǎn)物調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的生物活性,且進(jìn)一步研究表明源于大豆蛋白的多肽WGAPVT(WT-6)和WGAPSL(WL-6)具有體外降膽固醇的生物活性;也有研究表明利用多肽LPVPR(LR-5)灌胃小鼠2 d 后,可以降低小鼠體內(nèi)的總膽固醇和低密度脂蛋白含量[14],而利用大豆多肽VAWWMY(VY-6)灌胃大鼠1 h 后,表現(xiàn)出抑制膽固醇在大鼠小腸、肝臟及血清中吸收的能力[15]?;钚远嚯牡纳锢枚仁腔钚远嚯倪M(jìn)一步開發(fā)利用的限制性因素[16],因此利用Caco-2 細(xì)胞模型探究多肽的轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收機(jī)制也得到了越來(lái)越廣泛的關(guān)注[17]。

    本研究以具有降膽固醇生物活性的3 種大豆多肽WL-6、VY-6 和LR-5 為研究對(duì)象,探究其在Caco-2 細(xì)胞模型中抑制膽固醇吸收的生物活性以及轉(zhuǎn)運(yùn)吸收機(jī)制,以期為活性多肽的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收機(jī)制提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    人源腸Caco-2 細(xì)胞,北京協(xié)和醫(yī)院;多肽VY-6、LR-5、WL-6、WT-6,紫域多肽合成有限公司;DMEM 培養(yǎng)基、MEM 培養(yǎng)基、PBS 緩沖液、青霉素-鏈霉素、胰蛋白酶、非必需氨基酸、HEPES緩沖液,美國(guó)Hyclone 公司;胎牛血清(FBS),德國(guó)PAN 公司;22-NBD 膽固醇,美國(guó)Sigma 公司;辛伐他汀,美國(guó)TGI 公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    GALAXY S 二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱,英國(guó)RS Biotech 公司;Axiovert 200 光學(xué)倒置顯微鏡,德國(guó)Zeiss 公司;生物安全柜,美國(guó)NUAIRE 公司;3K15高速冷凍離心機(jī),德國(guó)SIGMA Laborzentrifugen GmbH 公司;Synergy H1MDG 多功能酶標(biāo)儀,美國(guó)BioTek 公司;HH-2 恒溫水浴鍋,金壇市杰瑞爾電器有限公司;KQ-700GVDV 多用途恒溫超聲清洗儀,昆山市超聲波清洗器;SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵,鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司;液質(zhì)聯(lián)用儀(LC-MS),美國(guó)Agilent 公司。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 Caco-2 細(xì)胞傳代與培養(yǎng) 采用MEM 培養(yǎng)基,加入20%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素、1%非必需氨基酸、1%HEPES 緩沖液配成。人源腸Caco-2 細(xì)胞為25T 瓶,代數(shù)為30。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí),用移液管吸取PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞2 次后,加入0.5 mL 0.05%胰蛋白酶,搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,確定胰蛋白酶鋪滿培養(yǎng)瓶后,放入37 ℃,5%CO2恒溫恒濕培養(yǎng)箱中消化5 min,顯微鏡下觀察細(xì)胞間連粘斷開呈單一形態(tài)并且大量細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中脫落時(shí),加入3 mL MEM 培養(yǎng)基,用3 mL 一次性移液管輕微吹打,將培養(yǎng)基和細(xì)胞移入15 mL 離心管中,1 000 r/min 離心5 min 后盡可能完全吸去培養(yǎng)基,加入3 mL 培養(yǎng)基輕柔吹打混勻50 下后,以1∶3的比例進(jìn)行傳代培養(yǎng),傳代第1 天后換液,此后隔天換液,顯微鏡下觀察,待細(xì)胞長(zhǎng)到80%時(shí)繼續(xù)傳代,此時(shí)可用1∶1 的體積比由25T 細(xì)胞瓶傳為75T 細(xì)胞瓶。

    1.3.2 Caco-2 細(xì)胞模型的建立

    1.3.2.1 Transwell 培養(yǎng)板包被 研究表明,鼠尾膠原在低濃度下包被Transwell 小室膜可以增加Caco-2 細(xì)胞的貼壁性,提高建模成功率[18]。將4 ℃存放的鼠尾膠原迅速溶于0.006 mol/L 無(wú)菌乙酸中,配制成質(zhì)量濃度0.012 mg/mL 的鼠尾膠原稀釋液,24 孔Transwell 板每孔55 μL,搖勻,生物安全柜中晾干過(guò)夜后用于接種細(xì)胞。

    1.3.2.2 Caco-2 細(xì)胞培養(yǎng)分化 分化Caco-2 細(xì)胞應(yīng)用DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng),DMEM 培養(yǎng)基中加入20%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素、1%非必需氨基酸及1%HEPES 緩沖液。細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化、離心、吸去培養(yǎng)基后加入1 mL 培養(yǎng)基,吹打混勻50次后用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。將細(xì)胞數(shù)量用培養(yǎng)基調(diào)整到1×105個(gè)/孔,將細(xì)胞吹打混勻,接種于24孔Transwell 小室中,基頂側(cè)100 μL、基底側(cè)600 μL 培養(yǎng)基,輕搖后放入37 ℃,5%CO2恒溫恒濕培養(yǎng)箱中,過(guò)夜換液。此后7 d 隔天換液,第8 天時(shí)每天換液,第21 天時(shí)細(xì)胞分化完成,進(jìn)行模型驗(yàn)證[19]。

    1.3.3 22 -NBD 膽固醇膠束溶液配制及其細(xì)胞毒性測(cè)定 固醇類的熒光類似物是一種便利的試驗(yàn)介質(zhì),可以進(jìn)行細(xì)胞中物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、分配、蛋白-配體互相作用的研究[20]。本試驗(yàn)選用22-NBD 膽固醇作為膽固醇膠束的基本原料,22-NBD 膽固醇的熒光基團(tuán)連接于膽固醇第22 位碳側(cè)鏈上,在激發(fā)光469 nm 和發(fā)射光537 nm 波長(zhǎng)處發(fā)出綠色熒光,熒光強(qiáng)度和膽固醇濃度成正比。

    膽固醇微膠束:100 μmol/L 22-NBD 膽固醇、1 mmol/L 油酸、0.5 mmol/L 單酰甘油、6.6 mmol/L牛黃膽酸鈉、0.1 mmol/L 大豆卵磷脂的微膠束溶解于1%二甲基亞砜的Hanks 溶液中,0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾除菌,37 ℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

    對(duì)數(shù)期消化細(xì)胞,96 孔板以1×105個(gè)/孔細(xì)胞量培養(yǎng)細(xì)胞,100 μL 每孔孵育12 h,將配制好的膽固醇微膠束溶液以每孔10 μL 的體積加入孔中,放在振板器上振動(dòng)后,于37 ℃,5%CO2條件下孵育12 h。每孔加入10 μL CCK-8 溶液孵育90 min,用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm 波長(zhǎng)處的吸光值,檢測(cè)膽固醇微膠束對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

    1.3.4 辛伐他汀的激活及對(duì)細(xì)胞毒性測(cè)定 將0.4 g 辛伐他汀溶解在100 μL 無(wú)水乙醇中,加入300 μL 0.1 mmol/L 的氫氧化鈉,50 ℃水浴2 h,加入等體積的0.1 mmol/L HCl,用雙蒸水將其稀釋至1 mL,2 μm 濾膜過(guò)濾,即為1 mol/L 辛伐他汀原液。將辛伐他汀原液用Hanks 溶液稀釋至5,10,20,40,60,80,100 mmol/L,待用。

    取對(duì)數(shù)期細(xì)胞,胰酶消化后以1×105個(gè)/孔細(xì)胞量培養(yǎng)細(xì)胞,100 μL 每孔孵育21 d,吸去孔內(nèi)培養(yǎng)基,用Hanks 緩沖溶液潤(rùn)洗細(xì)胞2 次,以每孔100 μL 體積分別加入配制好的濃度梯度為5,10,20,40,60,80,100 mmol/L 辛伐他汀溶液,5 個(gè)平行。在37 ℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育24 h 后,每孔加入10 μL CCK-8 溶液孵育90 min,用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm 波長(zhǎng)處的吸光值,檢測(cè)不同濃度辛伐他汀對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

    1.3.5 辛伐他汀體外降膽固醇能力驗(yàn)證 選取細(xì)胞存活率在90%以上的辛伐他汀濃度組作為降膽固醇能力驗(yàn)證試驗(yàn)組。取對(duì)數(shù)期細(xì)胞,胰酶消化后以1×105個(gè)/孔細(xì)胞量培養(yǎng)細(xì)胞,每組5 個(gè)平行,100 μL 每孔孵育21 d,吸去孔內(nèi)培養(yǎng)基,用Hanks緩沖溶液潤(rùn)洗細(xì)胞2 次,以每孔100 μL 體積加入配制好的辛伐他汀與22-NBD 膽固醇膠束混合溶液,在37 ℃,5%CO2條件下孵育3 h 后,用酶標(biāo)儀測(cè)定470 nm/535 nm 波長(zhǎng)處的熒光值,檢測(cè)辛伐他汀降膽固醇能力。

    1.3.6 3 種多肽降膽固醇能力驗(yàn)證

    1.3.6.1 3 種多肽束縛膽固醇膠束的能力 參考Homma 等[21]的方法,略有改動(dòng),測(cè)定蛋白對(duì)體外微膠束中膽固醇溶解度的影響。膽固醇微膠束成分:100 μmol/L 22-NBD 膽固醇、1 mmol/L 油酸、0.5 mmol/L 單酰甘油、6.6 mmol/L 牛黃膽酸鈉、0.1 mmol/L 大豆卵磷脂。分別向微膠束溶液中添加多肽VY-6,LR-5,WL-6,使每種蛋白的最終濃度分別為0.5,1,1.5 mmol/L,每組3 個(gè)平行。使用超聲萃取儀將配制好的蛋白-微膠束混合液超聲溶解,然后置于37 ℃,5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后,10 200 r/min 離心30 min。收集上清液,用酶標(biāo)儀測(cè)定470 nm/535 nm 波長(zhǎng)處各組上清液的熒光強(qiáng)度值。

    1.3.6.2 3 種多肽對(duì)細(xì)胞攝入膽固醇的影響 細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)80%~90%后按照1×105個(gè)/孔細(xì)胞量接種到6 孔板中,每組5 個(gè)平行,接種后隔天換液,1 周后每天換液,培養(yǎng)至21 d 時(shí)用顯微鏡觀察細(xì)胞培養(yǎng)情況。設(shè)立常規(guī)培養(yǎng)組(空白)、22-NBD膽固醇膠束組(NCM)、22-NBD 膽固醇膠束+辛伐他汀組(藥物)、22-NBD 膽固醇膠束+VY-6 組(CVY)、22-NBD 膽固醇膠束+LR-6 組(CLR)、22-NBD 膽固醇膠束+WL-6 組(CWL),所有多肽均為1 mmol/L,將上述培養(yǎng)基加入已分化好的Caco-2細(xì)胞中。每組5 個(gè)平行,在37 ℃,5%CO2條件下孵育3 h 后,吸去孔內(nèi)培養(yǎng)基,換為新培養(yǎng)基,用酶標(biāo)儀測(cè)定470 nm/535 nm 波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度值。

    1.3.6.3 3 種多肽對(duì)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)能力的影響 取貼壁80%~90%細(xì)胞,0.05%胰酶消化后,1 000 r/min 離心5 min,以1×105個(gè)/孔的細(xì)胞量接種于24孔Transwell 板中,以基頂側(cè)100 μL 培養(yǎng)基、基底側(cè)600 μL 培養(yǎng)基建立模型,至21 d 細(xì)胞分化完成。第21 天時(shí)吸去模型中的培養(yǎng)基,用Hanks 緩沖溶液潤(rùn)洗細(xì)胞2 次,在基頂側(cè)分別加入100 μL由1.3.3 節(jié)稀釋好的22-NBD 膽固醇微膠束與2 mmol/L VY-6 混溶的Hanks 緩沖液,22-NBD 膽固醇微膠束與2 mmol/L LR-5 混溶的Hanks 緩沖液,22-NBD 膽固醇微膠束與2 mmol/L WL-6 混溶的Hanks 緩沖液,基底側(cè)加入600 μL Hanks 緩沖溶液,每組5 個(gè)平行。轉(zhuǎn)運(yùn)120 min 后,收集基底側(cè)溶液,于470 nm/535 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定熒光強(qiáng)度值。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié)果與分析

    2.1 22-NBD 膽固醇最適濃度的選擇

    22-NBD 膽固醇膠束濃度會(huì)對(duì)細(xì)胞造成溶解現(xiàn)象,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,所以需要選擇一個(gè)適宜濃度的22-NBD 膽固醇膠束溶液作為高脂細(xì)胞模型,利用1.3.3 節(jié)所述膠束溶液配制方法,用Hanks 稀釋膠束溶液母液,培養(yǎng)24 h 后加入CCK-8 顯色,結(jié)果如圖1所示,與對(duì)照組相比,在母液的基礎(chǔ)上稀釋到8 倍的22-NBD 膽固醇膠束無(wú)顯著細(xì)胞毒性,其余3 個(gè)稀釋倍數(shù)的膽固醇膠束皆對(duì)細(xì)胞有毒性。

    2.2 辛伐他汀最適濃度的選擇

    2.2.1 辛伐他汀CCK-8 試驗(yàn) 本研究使用辛伐他汀作為藥物對(duì)照。辛伐他汀是土曲霉發(fā)酵產(chǎn)物的合成衍生物,屬于他汀類降血脂藥物,可以起到控制血脂,預(yù)防心血管疾病的作用。辛伐他汀為羥甲基戊二酸單酰輔酶A 合酶(HMG-CoA)的抑制劑,其降膽固醇機(jī)制主要是通過(guò)對(duì)該酶特異的競(jìng)爭(zhēng)性抑制使HMG-CoA 無(wú)法轉(zhuǎn)變?yōu)榧谆u戊酸,從而阻斷膽固醇的合成,減少血清內(nèi)膽固醇[22]。丁宏輝等[23]研究表明辛伐他汀不僅能顯著降低血清內(nèi)甘油三酯和膽固醇,還可以改善脂譜,即辛伐他汀顯著降低高膽固醇患者LDLC/HDLC 的比值與ApoB100/ApoAI,由此降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)性。

    圖2可知,在5~100 μmol/L 濃度范圍內(nèi),辛伐他汀對(duì)細(xì)胞皆有顯著毒性,而20 μmol/L 以內(nèi)細(xì)胞存活率為90%以上,可以作為合適的試驗(yàn)濃度,故選用5,10,20 μmol/L 濃度的辛伐他汀檢測(cè)其抑制細(xì)胞攝取膽固醇的能力。

    2.2.2 辛伐他汀降膽固醇試驗(yàn) 如圖3所示,20 μmol/L 的辛伐他汀抑制細(xì)胞攝取膽固醇率達(dá)到33.3%。在細(xì)胞耐受范圍內(nèi)達(dá)到了最佳降膽固醇的效果,故選用20 μmol/L 辛伐他汀作為藥物對(duì)照組。

    圖2 CCK-8 法測(cè)定不同濃度辛伐他汀對(duì)細(xì)胞毒性的影響Fig.2 The effects of cytotoxicity of simvastatin in different concentrations by the CCK-8 method

    圖3 不同濃度辛伐他汀體外細(xì)胞的膽固醇攝入能力Fig.3 Cholesterol uptake inhibition of simvastatin in Caco-2 cells in different concentrations

    2.3 3 種多肽體外降膽固醇能力

    2.3.1 3 種大豆肽抑制膽固醇吸收能力分析 由圖4可知,VY-6 在0.5~2 mmol/L 濃度內(nèi)抑制細(xì)胞攝取膽固醇能力隨濃度增加而增加,且在2 mmol/L 時(shí)抑制能力超過(guò)藥物組達(dá)到了43.14%;在2.5 mmol/L 時(shí)細(xì)胞攝取膽固醇量增加,顯著性與0.5 mmol/L 時(shí)相同,證明在此濃度下,多肽抑制膽固醇吸收能力效果下降;在3 mmol/L 時(shí),抑制效果又明顯回升。本課題組前期的研究表明[24],高濃度多肽對(duì)小鼠膽固醇吸收有促進(jìn)效果,故多肽在2.5 mmol/L 時(shí)膽固醇吸收能力會(huì)增強(qiáng),而在3 mmol/L時(shí)多肽與22-NBD 膽固醇膠束共同作用下對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了毒性,從而減少了膽固醇的攝入。

    從圖5結(jié)果可知,在0.5~3 mmol/L 濃度下,LR-5 可以顯著(P<0.05)抑制細(xì)胞吸收膽固醇作用,在2.5 mmol/L 時(shí)抑制率達(dá)到45.7%,而在3 mmol/L 時(shí)高濃度的多肽導(dǎo)致抑制率降低。

    由圖6可知,多肽WL-6 在0.5~3 mmol/L 濃度范圍內(nèi)都可以顯著(P<0.05)抑制細(xì)胞對(duì)膽固醇吸收的能力,且在2 mmol/L 時(shí)抑制率最大,達(dá)到45.93%。在濃度為3 mmol/L 時(shí)也出現(xiàn)了抑制能力下降的現(xiàn)象。

    2.3.2 3 種大豆肽抑制膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)能力分析 抑制細(xì)胞對(duì)膽固醇的吸收情況是降膽固醇的一方面,另一方面需要在Caco-2 轉(zhuǎn)運(yùn)模型中考察多肽介導(dǎo)膽固醇膠束轉(zhuǎn)運(yùn)情況。由圖7所示,NCM 組、藥物組與3 種多肽組進(jìn)行膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)情況的比較,WL-6 組中膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)抑制率最高,使轉(zhuǎn)運(yùn)率下降了30.7%,其后抑制效果顯著的是VY-6,使轉(zhuǎn)運(yùn)率下降了22.1%,WT-6 的抑制率為15.1%,而LR-5 對(duì)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制效果并不明顯。

    圖4 不同濃度VY-6 抑制細(xì)胞攝入膽固醇的能力Fig.4 The ability of cholesterol uptake inhibition in different concentrations of VY-6

    圖5 不同濃度LR-5 抑制細(xì)胞攝入膽固醇的能力Fig.5 The ability of cholesterol uptake inhibition in different concentrations of LR-5

    圖6 不同濃度WL-6 抑制細(xì)胞攝入膽固醇的能力Fig.6 The ability of cholesterol uptake inhibition in different concentrations of WL-6

    2.3.3 3 種大豆肽抑制膽固醇膠束溶解能力分析 表1是不同濃度大豆肽對(duì)膽固醇膠束的物理作用溶解率的影響結(jié)果。設(shè)立空白對(duì)照組為100%,與其余3 種多肽比較發(fā)現(xiàn),隨著濃度的升高抑制率逐漸下降。其次,抑制率最高的是WL-6,在0.5 mmol/L 時(shí)達(dá)到14.2%,隨后隨著濃度升高抑制率逐漸下降。VY-6 的膽固醇溶解也隨濃度升高而下降,在2 mmol/L 時(shí)只有2.5%,僅為0.5 mmol/L 時(shí)的52%。而LR-5 在1 mmol/L 時(shí)膽固醇溶解率略有下降,之后在2 mmol/L 時(shí)顯著上升,整體呈上升趨勢(shì)。Chou 等[25]報(bào)道黑米醋中含有大量必需氨基酸與疏水性氨基酸,如:谷氨酸、亮氨酸、組氨酸和賴氨酸,可以顯著降低倉(cāng)鼠體重,同時(shí)降低血清和肝中的總膽固醇含量,提高膽汁酸脂質(zhì)含量和肝抗氧化能力。本文研究的3 種多肽均含有上述氨基酸,從而對(duì)膽固醇膠束具有物理束縛作用,進(jìn)而均有降膽固醇的生物活性。

    圖7 3 種大豆肽抑制膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)能力Fig.7 Three kinds of soybean peptides inhibition ability of cholesterol transport

    3 結(jié)論

    本文利用CCK-8 法選擇稀釋8 倍的22-NBD膽固醇膠束濃度為高脂組濃度,辛伐他汀抑制細(xì)胞對(duì)膽固醇吸收的試驗(yàn)選定藥物組濃度為20 μmol/L。對(duì)3 種多肽在不同濃度下降膽固醇能力的驗(yàn)證結(jié)果顯示,VY-6 在濃度為2 mmol/L 時(shí)抑制率最大(43.1%),LR-5 在濃度為2.5 mmol/L 時(shí)抑制率最大(45.7%),WL-6 在濃度為2 mmol/L 時(shí)抑制率最大(45.9%),WL-6 是3 種多肽中抑制膽固醇效果最好的多肽。在抑制膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)方面,WL-6 的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)抑制率為30.7%,效果最好,其次抑制效果顯著的是VY-6,抑制率達(dá)到了22.1%,LR-5 的抑制率僅為9.3%。在膽固醇溶解的抑制能力方面,多肽WL-6 在0.5 mmol/L 時(shí)抑制膽固醇溶解率效果最優(yōu),達(dá)到14.2%,其次VY-6 在濃度為0.5 mmol/L 時(shí)抑制膽固醇溶解率為4.8%,而LR-5 在2 mmol/L 時(shí)抑制率為4.1%,其中VY-6、WL-6 的抑制效果隨濃度升高而下降,LR-5 抑制率隨濃度升高整體呈升高趨勢(shì)。本試驗(yàn)結(jié)果表明這3 種大豆肽均可以通過(guò)抑制細(xì)胞吸收膽固醇能力、膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)能力以及溶解率,實(shí)現(xiàn)降低體內(nèi)膽固醇的吸收,達(dá)到降低膽固醇水平的目的。綜合比較降膽固醇效果最高的多肽是WL-6。

    表1 不同濃度大豆肽對(duì)膽固醇膠束溶解率的影響(%)Table 1 Different concentrations of soybean peptides influence of cholesterol solubility(%)

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