梨盤多毛孢褐斑病菌生物學(xué)特性及藥劑毒力測定

趙 杰，戴富明

（1上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，上海 201201；2上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境保護(hù)研究所，上海 201403）

梨盤多毛孢褐斑病菌生物學(xué)特性及藥劑毒力測定

趙 杰1，戴富明2

（1上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，上海 201201；2上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境保護(hù)研究所，上海 201403）

為了研究梨盤多毛孢褐斑病菌的生物學(xué)特性和篩選防治該病原菌的殺菌劑，采用生長速率法和產(chǎn)孢量的測定來研究梨盤多毛孢褐斑病菌的生物學(xué)特性。結(jié)果表明：PDA和PSA培養(yǎng)基最適宜菌落生長，葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最多；菌絲生長的適宜溫度范圍為5—30℃，最適溫度25℃；培養(yǎng)基pH 4左右，菌絲產(chǎn)孢量最多；病原菌致死溫度為54℃；全暗和全光有利于菌落生長，全光條件下產(chǎn)孢量最大。碳源測定的試驗顯示：淀粉和葡萄糖最適宜菌絲生長，果糖最適宜產(chǎn)孢。氮源試驗表明：氮源中以酵母膏、蛋白胨和牛肉膏最適宜菌絲生長，蛋白胨最適宜產(chǎn)孢。12種殺菌劑的毒力測定結(jié)果表明：吡唑醚菌酯、己唑醇、多菌靈、咪鮮胺錳鹽的毒力較強(qiáng)，是比較理想的防治藥劑。以上結(jié)果為試驗條件下高效培養(yǎng)梨盤多毛孢褐斑病菌奠定了基礎(chǔ)，為生產(chǎn)上防治該病害提供了理論依據(jù)。

梨盤多毛孢褐斑病菌；生物學(xué)特性；產(chǎn)孢量；殺菌劑；毒力測定

鮮梨是我國主要果品之一，也是浦東新區(qū)的優(yōu)勢特色產(chǎn)業(yè)，其中“翠冠”梨因果形大、外觀好、風(fēng)味佳，深受廣大市民喜愛，市場銷售情況常供不應(yīng)求，畝產(chǎn)值達(dá)8 900元人民幣（大眾水果中僅次于葡萄）。2013—2015年，作者在多個梨園梨樹葉片上發(fā)現(xiàn)由斑污擬盤多毛孢引起的梨盤多毛孢褐斑病，葉片發(fā)病率在5%—10%，嚴(yán)重的可達(dá)40%以上，該病害可侵染梨、茶、柿、山茶、木蘭、烏飯樹等［1-2］。雖然有關(guān)擬盤多毛孢屬的分類［3］、新種［4-10］和防治［11-12］有不少研究報道，也有學(xué)者開展了該屬擬盤多毛孢菌生物學(xué)特性的研究［11，13］，但只有陳玉森等［14］對寄主茶樹上的斑污擬盤多毛孢菌絲適宜溫度和pH進(jìn)行了研究。由于不同地區(qū)、不同寄主和栽培條件下，病菌特性往往存在明顯差異，因此，對當(dāng)?shù)乩姹P多毛孢褐斑病菌即梨斑污擬盤多毛孢的癥狀、生物學(xué)特性進(jìn)行了觀測，旨在尋找通過環(huán)境條件控制病害發(fā)生的途徑，并篩選防治該病害的理想藥劑。

1 材料與方法

1.1 供試病原菌

梨盤多毛孢褐斑病菌（Pestalotia guepini Desm.）從浦東新區(qū)梨樹采集病葉，經(jīng)室內(nèi)組織分離、純化［15］，病原菌于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d用于試驗。

1.2 供試藥劑

30%吡唑醚菌酯懸浮劑（深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司）、43%戊唑醇懸浮劑（發(fā)事達(dá)南通化工有限公司）、50%異菌脲懸浮劑（拜耳作物科學(xué)中國有限公司）、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司）、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（江蘇豐登農(nóng)藥有限公司）、80%代森錳鋅可濕性粉劑（江蘇省農(nóng)墾生物化學(xué)有限公司）、45%咪鮮胺乳油（以色列馬克西姆化學(xué)公司）、50%多菌靈懸浮劑（江蘇龍燈化學(xué)有限公司）、25%丙環(huán)唑乳油（深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司）、5%己唑醇懸浮劑（陜西上格之路生物科學(xué)有限公司）、12.5%烯唑醇可濕性粉劑（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司）、40%百菌清懸浮劑（汕頭市宏光化工有限公司）。

1.3 生物學(xué)特性觀測

1.3.1 不同培養(yǎng)基對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

將梨盤多毛孢褐斑病菌于20%植物煎汁（梨樹葉片、枝條和未成熟果實）培養(yǎng)基、PDA、PSA、葡萄糖蛋白胨瓊脂、淀粉瓊脂、酵母浸膏和麥芽糖瓊脂等9種培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)5 d后測量菌落直徑，第7天測產(chǎn)孢量［16-18］。

1.3.2 溫度和pH對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響［18］

將直徑為1 cm的病原菌菌絲塊接種到PDA平板中央，分別于5—40℃下培養(yǎng)5 d后測量菌落直徑。

用乳酸和NaOH配制pH為3—10的PDA培養(yǎng)基，于平板中央接種直徑為1 cm的病原菌菌絲塊，25℃培養(yǎng)5 d后測量菌落直徑，第7天測產(chǎn)孢量。

1.3.3 病菌致死溫度的測定

取直徑為1 cm的菌落于不同溫度的試管中處理10 min，然后接種到PDA平板中央，于25℃培養(yǎng)5 d，觀察菌絲生長情況。

1.3.4 光照對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

將直徑1 cm的菌絲塊接種到PDA平板中央，25℃下分別于連續(xù)光照、連續(xù)黑暗、12 h光照12 h黑暗交替下培養(yǎng)5 d后測量菌落直徑，第7天測定產(chǎn)孢量。

1.3.5 不同碳、氮源對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

采用真菌生理培養(yǎng)基［18］，以KNO3為氮源，測定葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖和淀粉等碳源對菌落生長的影響，25℃培養(yǎng)5 d測量菌落直徑，第7天測產(chǎn)孢量；以蔗糖為碳源，測定硝酸鉀、硫酸銨、氯化銨、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨和尿素等氮源對菌落生長的影響，25℃培養(yǎng)5 d測量菌落直徑，第7天測定產(chǎn)孢量。

1.4 殺菌劑的毒力測定

采用生長速率法進(jìn)行測定［18］：根據(jù)試驗情況，配置5個濃度的含藥PDA培養(yǎng)基，將直徑為1 cm的菌絲塊放在含藥培養(yǎng)基中央，25℃培養(yǎng)5 d，測量菌落直徑、計算抑制率、以藥劑有效成分的濃度為測試濃度計算回歸方程和抑制中濃度EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害癥狀及病原菌培養(yǎng)性狀觀察

梨盤多毛孢褐斑病菌主要侵染梨樹上部葉片，尤以頂部葉片受害最重，病斑近圓形或不規(guī)則形，初為紅褐色斑點，隨著病情發(fā)展，中央呈黑色，邊緣紅褐色。在PDA上培養(yǎng)初期，菌落呈白色，隨著菌落生長，菌落出現(xiàn)波狀隆起的同心輪紋，在菌落表面產(chǎn)生黑色的分生孢子盤，培養(yǎng)基背面黃色，培養(yǎng)基內(nèi)可見輪紋狀排列的黑色分生孢子盤。分生孢子紡錘形，直或略彎曲，多為5細(xì)胞，中間3色胞橄欖色或略有深淺，頂胞和尾胞無色或接近無色，頂胞具附屬絲1—3根，多為3根，尾胞具1根或無附屬絲（圖1）。

圖1 梨盤多毛孢褐斑病葉片癥狀、PDA培養(yǎng)基上的菌落和分生孢子Fig.1 Leaf sym ptom s caused by P.guepini and colonies and conidia on PDA medium

2.2 不同培養(yǎng)基對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

梨盤多毛孢褐斑病菌在PDA和PSA培養(yǎng)基上生長最好，培養(yǎng)5 d后的直徑在7 cm以上；7 d后的產(chǎn)孢量以葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基最多，為6.667×106個/皿。選用的梨樹葉片、枝條和未成熟果實3個植物煎汁培養(yǎng)基中以梨果煎汁培養(yǎng)基菌落直徑和產(chǎn)孢量較高，表明梨果含有有利于病菌生長和產(chǎn)孢的營養(yǎng)物質(zhì)（表1）。

表1 梨盤多毛孢褐斑病菌在不同培養(yǎng)基上菌落生長和產(chǎn)孢情況Table1 Colony grow th and spore output of P.guepini on differentmedia

2.3 溫度和pH對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

梨盤多毛孢褐斑病菌在溫度為5—30℃均能生長，其中以25℃最為適宜，直徑為7.36 cm，在40℃時不能生長，甚至菌絲出現(xiàn)衰亡。菌落在pH 3—10均能正常生長，且都有孢子產(chǎn)生，其中菌落生長以pH 4最為適宜，菌落直徑8.50 cm；產(chǎn)孢量以pH 4—6酸性環(huán)境較大，超過1.000×106個/皿，其余pH環(huán)境下產(chǎn)孢量差異不大，可見病菌較適應(yīng)于偏酸性環(huán)境（表2）。

表2 溫度和pH對梨盤多毛孢褐斑病菌菌落生長和產(chǎn)孢量的影響Table 2 Effects of temperature and pH on colony grow th and spore output of P.guepini

2.4 病菌致死溫度

將菌落在40—52℃的水浴中處理10 min，于PDA平板上培養(yǎng)7 d后均能形成新生菌絲，而54℃以上不能生長，因此，病菌的致死溫度為54℃，時間為10 min。

2.5 光照對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

病原菌全暗或全光等穩(wěn)定條件下菌落生長較快，光暗交替不利于菌落生長；產(chǎn)孢量以全光條件下最大，為7.350×106個/皿，其次為全暗和光暗交替條件。由此可見，全光不僅有利于菌落生長，還能促進(jìn)孢子形成（表3）。

表3 光照條件對梨盤多毛孢褐斑病菌菌落生長和產(chǎn)孢量的影響Table 3 Effects of light on colony grow th and spore output of P.guepini

2.6 不同碳、氮源對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

菌落生長較適宜的碳源為淀粉和葡萄糖，菌落直徑分別為5.74 cm和5.53 cm，最不適宜的為果糖；產(chǎn)孢量最適宜的碳源為果糖，為1.300×106個/皿（表4）。

菌落生長最適宜的氮源為酵母膏、蛋白胨和牛肉膏等有機(jī)氮源，菌落直徑在6 cm左右，最不適宜的是尿素和硫酸銨；最適宜產(chǎn)孢的氮源為蛋白胨，產(chǎn)孢量為1.100×106個/皿，其次為酵母膏、牛肉膏和硫酸銨，氯化銨最不適宜產(chǎn)孢（表5）。

表4 碳源對梨盤多毛孢褐斑病菌菌落生長和產(chǎn)孢量的影響Table 4 Effects of carbon sources on colony grow th and spore output of P.guepini

表5 氮源對梨盤多毛孢褐斑病菌菌落生長和產(chǎn)孢量的影響Table 5 Effects of nitrogen sources on colony grow th and spore output of P.guepini

2.7 殺菌劑對病原菌的毒力測定

選用12種殺菌劑對梨盤多毛孢褐斑病菌進(jìn)行毒力試驗，結(jié)果顯示：吡唑醚菌酯、己唑醇、多菌靈和咪鮮胺錳鹽的EC50明顯小于1 mg/L，毒力較高，可能為生產(chǎn)上理想的防治藥劑。丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、異菌脲、戊唑醇、咪鮮胺，EC50小于10 mg/L；烯唑醇、代森錳鋅、百菌清毒力相對較低（表6）。

表6 12種殺菌劑對梨盤多毛孢褐斑病菌的毒力Table 6 Test for toxicities of 12 fungicides to P.guepini

3 結(jié)論與討論

通過田間觀察、實驗室分離和培養(yǎng)，明確了梨盤多毛孢褐斑病在葉片上的為害癥狀、PDA上的菌落性狀，為田間診斷提供了參考。目前只發(fā)現(xiàn)該病菌為害葉片，但病菌在梨葉、梨枝和梨果煎汁培養(yǎng)基上都能正常生長，且以梨果培養(yǎng)基生長最好且產(chǎn)孢量最多，表明該病菌極有可能侵染果實；在其余供試的6種培養(yǎng)基上，菌落在PDA培養(yǎng)基上生長最好，與碳源試驗中葡萄糖較適宜菌落生長的結(jié)果一致；產(chǎn)孢量以葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基最多，與氮源試驗中蛋白胨最適宜產(chǎn)孢的結(jié)果相同。

該菌在5—30℃、pH 3—10的條件下均能生長，而且產(chǎn)孢量以pH 4—6酸性環(huán)境較大，表明病菌對環(huán)境條件適應(yīng)能力強(qiáng)，尤其適宜溫暖和偏酸性的條件。陳玉森等［14］研究表明，梨盤多毛孢褐斑病菌菌絲生長適宜pH為7.5，與本研究pH 4—6存在一定差異，可能與病菌長期生存的環(huán)境有關(guān)。

殺菌劑的毒力測定結(jié)果表明：吡唑醚菌酯、己唑醇、多菌靈、咪鮮胺錳鹽、丙環(huán)唑的毒力較高；任海英等［12］防治由異色擬盤多毛孢和小孢擬盤多毛孢引起的楊梅凋萎病試驗發(fā)現(xiàn)，吡唑醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、丙環(huán)唑防效較好，與本研究中的結(jié)果相似，表明同一藥劑對同屬病菌可能具有相同的效果，但由于藥效受寄主和環(huán)境的多重影響，因此還需通過田間試驗進(jìn)一步研究。

秋季氣溫適宜，多陰雨有利于梨盤多毛孢褐斑病的發(fā)生；梨果采收后，未及時施用采后肥、管理粗放，發(fā)病加重。溝系暢通，科學(xué)施肥，合理修剪，改善梨園土壤環(huán)境，能有效控制發(fā)病，說明改變環(huán)境和科學(xué)種植是控制病害的重要途徑，因此除了使用藥劑控制病害，關(guān)鍵還要注重栽培管理，綜合防治該病害。

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The biological characteristics of Pestalotia guepini Desm.and toxicity test of fungicides to it

ZHAO Jie1，DAIFu-ming2

（1Pudong New District Agro-Technology Extension Center，Shanghai201201，China；2Institute of Eco-Environment Protection，Shanghai Academy of Agricultural Sciences，Shanghai201403，China）

In order to study biological characteristics of P.guepini Desm.and select fungicides against the pathogen，both colony growth and spore production were tested.The results indicated that both PDA and PSA media were themost suitable for the colony growth and there was themaximum spore output on dextrose peptone agarmedium.The suitable temperature for themycelial growth was5—30℃and the optimum was25℃.At pH 4 or so the spore outputwas themaximum.The lethal temperature of the pathogen was 54℃.Full dark or full lightwas favorable for the colony growth and under full light the spore output was the maximum.The tests for carbon sources indicated that amylum and dextrose were favorable for themycelial growth，and fructose was the most favorable for the spore production.The tests for nitrogen sources indicated that yeast extract，peptone and beef extractwere favorable for themycelial growth，and peptone was themost favorable for the spore production.The toxicity tests of 12 fungicides to P.guepini showed that pyraclostrobin，hexaconazole，carbendazim，prochloraz-manganese chloride complex had a higher toxicity and were ideal fungicides.The above results laid a foundation for efficiently culturing P.guepini under experimental conditions and controlling the disease caused by P.guepini in production.

Pestalotia guepini Desm.；Biological characteristic；Spore output；Fungicide；Toxicity test

2016-07-06

上海市浦東新區(qū)科技發(fā)展基金項目“梨樹病蟲害防控技術(shù)集成與示范”（PKJ2016-N02）

趙杰（1979—），男，碩士，高級農(nóng)藝師，主要從事果實栽培與病蟲害防治。E-mail：zhaocaoyou＠163.com，Tel：021-58388032

S436.612

A

1000-3924（2017）06-033-05

程智強(qiáng)）