阿米卡星及枸櫞酸鈉干粉抗凝在假性血小板減少中的應(yīng)用與價(jià)值探究

王勵(lì) 黃瑞英

阿米卡星及枸櫞酸鈉干粉抗凝在假性血小板減少中的應(yīng)用與價(jià)值探究

王勵(lì) 黃瑞英

目的 分析假性血小板減少中阿米卡星及枸櫞酸鈉干粉抗凝的應(yīng)用效果及臨床價(jià)值。方法 采集5例假性血小板減少患者的枸櫞酸鈉抗凝血標(biāo)本（2管，分別為水劑和干粉枸櫞酸鈉抗凝）、EDTA-K2抗凝血標(biāo)本（2管，其中1管在采血前加入阿米卡星），使用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀在5 min內(nèi)、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)檢測(cè)。結(jié)果 加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標(biāo)本中，有4例患者的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果正常；1例加或未加阿米卡星的EDTA- K2抗凝血標(biāo)本，時(shí)間延長，血小板計(jì)數(shù)逐漸升高，但仍舊存在凝集現(xiàn)象，未在正常范圍值內(nèi)；枸櫞酸鈉干粉抗凝的血標(biāo)本，4例血小板計(jì)數(shù)結(jié)果正常。結(jié)論 EDTA-K2抗凝血加入阿米卡星能夠解離血小板聚集，枸櫞酸鈉干粉抗凝血標(biāo)本亦可作為處理EDTA依賴的假性血小板減少情況。

乙二胺四乙酸；阿米卡星；枸櫞酸鈉干粉；假性血小板減少

臨床上，全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的廣泛使用，使血常規(guī)檢查更加迅速和準(zhǔn)確?？鼓齽┮叶匪囊宜猁}（EDTA）是ICSH認(rèn)定的適用于全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)的抗凝劑。實(shí)際使用過程中，容易引起EDTA依賴性假性血小板減少癥[1]。假性血小板減少患者的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果與實(shí)際值存在偏差，可導(dǎo)致誤診、誤治現(xiàn)象發(fā)生。因此，尋求有效手段對(duì)假性血小板減少進(jìn)行處理十分重要。眾多學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)，氨基糖苷類抗菌藥物可以阻止、解離EDTA依賴性假性血小板減少癥患者的血小板聚集現(xiàn)象。同時(shí)，使用枸櫞酸鈉（干粉）抗凝也適用該類患者血小板計(jì)數(shù)。本試驗(yàn)以我院2015年1月—2016年8月收治的假性血小板減少患者為對(duì)象，通過對(duì)加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標(biāo)本的研究，分析了阿米卡星解離血小板聚集的效果。通過實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)枸櫞酸鈉（干粉）可用于血小板計(jì)數(shù)方面，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月—2016年8月于我院就診的5例假性血小板減少患者進(jìn)行研究，血小板計(jì)數(shù)減少，血小板直方圖異常，儀器提示有凝集，涂片鏡檢顯示血小板大量聚集，纖維蛋白原、凝血酶原時(shí)間、部分凝血活酶時(shí)間均在參考范圍內(nèi)[2]，均無血小板減少的相關(guān)體征。男性2例，女性3例；年齡34～62歲。

1.2 儀器與試劑

Syemex XS-1000i全自動(dòng)血液分析儀及配套試劑和質(zhì)控品，質(zhì)量控制在控。EDTA-K2抗凝真空采血管、109 mmol/L枸櫞酸鈉抗凝真空采血管，肝素真空采血管由江西長青醫(yī)療科技有限公司提供。瑞氏-吉姆薩染液，由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供。硫酸阿米卡星0.1 g/ml，由遂成藥業(yè)股份有限公司提供。

1.3 方法

12.8 mg/管枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管的制備：109 mmol/L枸櫞酸鈉抗凝（1 ∶ 4）真空采血管烘干。

分別采集1管12.8 mg/管枸櫞酸鈉（干粉）抗凝血標(biāo)本500 μl，1管 109 mmol/L枸櫞酸鈉（1 ∶ 9）抗凝血標(biāo)本和 2管EDTA-K2抗凝血標(biāo)本各2 ml。在采血前，1管EDTA-K2抗凝血標(biāo)本加入阿米卡星，血濃度為6.5 mg/ml；另1管EDTA-K2抗凝血標(biāo)本未加入阿米卡星，采用XS-1000i全自動(dòng)血液分析儀在5 min內(nèi)、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)檢測(cè)；加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標(biāo)本在5 min內(nèi)、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h采用XS-1000i全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定血小板計(jì)數(shù)；各管血涂片鏡檢。在5 min內(nèi)、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h，采用XS-1000i全自動(dòng)血液分析儀對(duì)枸櫞酸鈉（水劑）抗凝血、枸櫞酸鈉（干粉）抗凝血進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)檢測(cè)，血細(xì)胞涂片，染色處理，并在顯微鏡下觀察。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

血涂片進(jìn)行瑞氏-吉姆薩染色，利用顯微鏡進(jìn)行觀察，鏡下見血小板聚集，或/和有血小板衛(wèi)星現(xiàn)象表明為血小板凝集。根據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[3]進(jìn)行操作，以該結(jié)果作為本次研究的參考值。

2 結(jié)果

2.1 EDTA-K2抗凝血的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果

采血后，加有阿米卡星的EDTA-K2抗凝管在不同時(shí)間段內(nèi)，血小板計(jì)數(shù)結(jié)果為：編號(hào)為1～4的患者血小板計(jì)數(shù)正常；編號(hào)為5的患者血小板計(jì)數(shù)逐漸升高，但仍舊存在凝集現(xiàn)象，未在正常范圍值內(nèi)。未加入阿米卡星EDTA-K2抗凝管的血小板在各時(shí)間段內(nèi)，血涂片鏡檢顯示血小板聚集，編號(hào)為1、2、4的患者隨時(shí)間延長，血小板計(jì)數(shù)逐漸減少。見表1、表2。

2.2 枸櫞酸鈉抗凝管的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果

液體抗凝劑的抗凝劑與血液之比為1 ∶ 9，表3各血小板計(jì)數(shù)結(jié)果已乘以1.1進(jìn)行換算。血涂片鏡檢均顯示血小板凝集。枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管在不同時(shí)間段內(nèi)，血小板計(jì)數(shù)結(jié)果為：編號(hào)為1～4的患者血小板計(jì)數(shù)正常；編號(hào)為5的患者血小板計(jì)數(shù)逐漸減低，鏡下存在凝集現(xiàn)象，未在正常范圍值內(nèi)。見表3、表4。

2.3 手工計(jì)數(shù)結(jié)果

經(jīng)檢測(cè)顯示，編號(hào)為1的患者手工血小板計(jì)數(shù)為250×109/L，編號(hào)為2的患者手工血小板計(jì)數(shù)為229×109/L，編號(hào)為3的患者手工血小板計(jì)數(shù)為344×109/L，編號(hào)為4的患者手工血小板計(jì)數(shù)為217×109/L，編號(hào)為5的患者手工血小板計(jì)數(shù)為183×109/L。

2.4 血涂片分析

采血5分鐘內(nèi)，EDTA-K2抗凝管涂片染色鏡檢，編號(hào)為1～5的患者血涂片顯示血小板聚集。編號(hào)為1、2和4的患者血小板聚集隨時(shí)間的延長而減少。

EDTA-K2抗凝管加入阿米卡星后，編號(hào)為1～4血小板計(jì)數(shù)正常，血涂片顯示正常；時(shí)間延長，編號(hào)為5的患者血小板聚集逐漸升高，血涂片顯示血小板仍有凝集現(xiàn)象。

枸櫞酸鈉（水劑）抗凝管的血涂片顯示有不同程度凝集，而且隨時(shí)間延長，凝集有嚴(yán)重現(xiàn)象。

枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管的血涂片顯示，編號(hào)為1～4的患者血小板計(jì)數(shù)結(jié)果基本正常，血小板無聚集，編號(hào)為5的患者血小板計(jì)數(shù)結(jié)果逐漸降低，血涂片有凝集現(xiàn)象。

3 討論

假性血小板減少的原因較多，主要與抽血不當(dāng)、EDTA-K2依賴性、冷凝集、藥物等因素密切相關(guān)，其中EDTA-K2依賴性十分常見。本實(shí)驗(yàn)室中假性血小板減少癥的發(fā)生較為少見，與1969年國外學(xué)者第一次報(bào)道的結(jié)果相近，該報(bào)道指出[4]EDTA依賴性血小板減少癥的發(fā)生率為0.07%～2.00%。隨著血小板功能研究的深入，臨床總結(jié)EDTA依賴性假性血小板減少癥發(fā)生的因素主要如下：抗凝溫度和抗凝時(shí)間，時(shí)間延長，血小板聚集明顯，血小板計(jì)數(shù)減少。中藥、抗生素、奧氮平等藥物對(duì)EDTA依賴性假性血小板減少癥有一定影響。部分疾病治療后，血小板凝集現(xiàn)象也會(huì)消失，說明EDTA依賴性假性血小板減少癥與患者所患疾病的嚴(yán)重程度及是否接受治療有關(guān)。全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的原理是依賴于細(xì)胞大小，血小板在體外發(fā)生聚集現(xiàn)象時(shí)，血細(xì)胞分析儀會(huì)將聚集的血小板誤認(rèn)為是紅細(xì)胞或白細(xì)胞，因而對(duì)血小板計(jì)數(shù)結(jié)果產(chǎn)生影響，并出現(xiàn)漏診或誤診情況。

EDTA-K2依賴性的發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜，有研究[5]認(rèn)為與血小板表面存在隱匿性抗原有關(guān)，存在EDTA時(shí)，血小板形態(tài)會(huì)發(fā)生變化，使其表面的隱匿性抗原的構(gòu)象改變，與自身抗體結(jié)合，可激活花生四烯酸、磷脂酶A、二磷酸腺苷等活性物質(zhì)?；钚晕镔|(zhì)會(huì)促使血小板纖維蛋白受體活化，導(dǎo)致纖維蛋白和血小板聚集。亦有學(xué)者指出[6]：EDTA 抗凝血使血小板膜表面抗原的抗體增加，造成抗原抗體反應(yīng)發(fā)生；由EDTA修飾的血小板膜表面抗原與血小板表面帶負(fù)電荷的磷脂抗體結(jié)合，即出現(xiàn)血小板凝集現(xiàn)象；血小板糖蛋白GPa與GPb有種單克隆抗體，與EDTA 抗凝劑相遇時(shí)會(huì)導(dǎo)致血小板出現(xiàn)凝集反應(yīng)。臨床研究及實(shí)踐表明[7]，氨基糖苷類抗菌藥物可以抑制、解離血小板聚集，避免假性血小板減少癥的發(fā)生，而氨基糖苷類抗菌藥物中，阿米卡星的解離能力最為有效，高濃度阿米卡星對(duì)多種抗凝劑依賴性血小板聚集有著較強(qiáng)的抑制和解離功效。

表1 EDTA-K2抗凝管加入阿米卡星后的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果（×109/L）

表2 未加入阿米卡星EDTA-K2抗凝管的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果（×109/L）

表3 枸櫞酸鈉（水劑）抗凝管的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果（×109/L）

表4 枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果（×109/L）

本次研究中，加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標(biāo)本中，有4例患者的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果正常；1例加或未加阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標(biāo)本，時(shí)間延長，血小板計(jì)數(shù)逐漸升高，但仍舊存在凝集現(xiàn)象，未在正常范圍值內(nèi)；枸櫞酸鈉干粉抗凝的血標(biāo)本，4例血小板計(jì)數(shù)結(jié)果正常。有研究報(bào)道提出[8]，使用枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管抗凝濃度為12.8 mg/L，采血量在200～800 μl時(shí)，在一定程度上可以糾正EDTA-K2依賴性假性血小板減少癥。枸櫞酸鈉（干粉）治療有效而枸櫞酸鈉（水劑）治療無效可能是干粉濃度較高，而血小板激活程度隨著枸櫞酸鈉濃度升高而增加。

臨床上，當(dāng)血小板計(jì)數(shù)減少與臨床不相符時(shí)，建議采取如下措施解決問題：血涂片顯示血小板聚集時(shí)，在排除采血不當(dāng)因素后，加入血濃度為6.5 mg/ml的阿米卡星進(jìn)行檢測(cè)，仔細(xì)觀察血涂片變化狀況，血小板聚集消失，對(duì)該結(jié)果進(jìn)行上報(bào)；血小板仍有聚集，使用枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管抽血，進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)涂片染色觀察血小板分布，血小板計(jì)數(shù)結(jié)果會(huì)更加準(zhǔn)確。此外，一部分標(biāo)本在使用阿米卡星、枸櫞酸鈉后未能解決的，如本試驗(yàn)中，編號(hào)為5的患者，解決如下：可以讓其在機(jī)旁采血，立即上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)；含有EDTA-K2成分的全自動(dòng)血液分析儀的配套稀釋液，可用0.9%生理鹽水代替配套的稀釋液，按照一定比例稀釋后，盡快上機(jī)操作；手工計(jì)數(shù)不能解決的，可對(duì)血涂片中的血小板數(shù)量進(jìn)行估算，并在報(bào)告中注明。

總之，阿米卡星能夠有效解離血小板聚集，在假性血小板減少中，阿米卡星的解離作用最佳，不僅可以減少重復(fù)抽血造成的成本浪費(fèi)，還能進(jìn)一步減少患者遭受的痛苦。使用枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管也有一定效果，但血涂片顯示血小板聚集時(shí)，需要重新進(jìn)行抽血。因此，假性血小板減少中，兩者的應(yīng)用價(jià)值較高。

[1]常菁華，王劍飚. EDTA依賴性假性血小板減少的實(shí)驗(yàn)室解決思路[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，29（7）：733-737.

[2]張景全，陳驪婷，石厚榮，等. 兩例EDTA依賴性假性血小板減少應(yīng)用阿米卡星無效探討[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，29（6）：676-678.

[3]趙凱華，周雄輝，劉強(qiáng)，等. 兩種藥物對(duì)EDTA依賴性血小板聚集的抑制作用比較[J]. 西南國防醫(yī)藥，2013，23（6）：589-590.[4]冉啟川，李鴻濱，鄧宗奎. 血小板自發(fā)性凝集致假性血小板減少癥分析[J]. 國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（10）：1317-1319.

[5]趙麗艷，劉昕鳴，龐孟煜，等. 硫酸阿米卡星對(duì)EDTA依賴性假性血小板減少癥血小板聚集的解離作用[J]. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2010，36（1）：178-182.

[6]李麗紅，金玲，李威，等. 我院56例EDTA依賴性假性血小板減少病例分析及臨床處理[J]. 中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2013，17（12）：2232-2234.

[7]毛維玉，霍梅，葉素丹，等. EDTA依賴的假性血小板減少的實(shí)驗(yàn)分析與對(duì)策[J]. 中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2014，22（5）：1345-1347.

[8]黃江浩，何維娜，華建江，等. 枸櫞酸鈉干粉抗凝管在消除EDTA依賴性假性血小板減少癥中的應(yīng)用研究[J]. 四川醫(yī)學(xué)，2014，35（12）：1530-1534.

Amikacin and Sodium Citrate Powder of Anticoagulant Tube in the Application of Pseudo Thrombocytopenia and Value

WANG Li HUANG Ruiying Clinical Laboratory Department, Guiping Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guiping Guangxi 537200, China

Objective To analyze the application effect and clinical value of the anticoagulant of sodium amitacin and sodium citrate in pseudo thrombocytopenia. Methods 5 patients with pseudo thrombocytopenia and sodium citrate anticoagulant blood specimens were collected (2 tubes,water and dry sodium citrate anticoagulation, respectively), EDTA-K2anticoagulant blood specimens (2 tubes, before blood collection, one of which joined amikacin). The automatic blood cell analyzer was used in 5 min, 15 min, 0.5 h, 1 h, 2 h, 3 h to detect the platelet count. Results The platelet count was normal in 4 patients in the EDTA-K2anticoagulant specimens. 1 case of EDTA-K2anticoagulant specimens with or without amikacin, time extended and platelet count gradually increased, but there was still agglutination, which was not in normal range. Blood samples of sodium citrate dry powder, 4 cases of platelet count were normal.Conclusion EDTA - K2anticoagulant join amikacin solution from the platelet aggregation, sodium citrate powder as dealing with EDTA anticoagulant blood specimens can be rely on pseudo thrombocytopenia.

ethylenediamine tetraacetic acid; amikacin; sodium citrate powder; pseudo thrombocytopenia

R558

A

1674-9316（2017）27-0124-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2017.27.067

廣西省桂平市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 桂平 537200