清燥救肺湯及其分解劑對(duì)肺炎支原體感染小鼠TLR-2/NF-κB信號(hào)通路的影響

吳振起， 賈曉儒， 敏娜， 岳志軍， 王雪峰， 張聰聰

實(shí)驗(yàn)論著

清燥救肺湯及其分解劑對(duì)肺炎支原體感染小鼠TLR-2/NF-κB信號(hào)通路的影響

吳振起， 賈曉儒， 敏娜， 岳志軍， 王雪峰， 張聰聰

目的觀(guān)察清燥救肺湯及其分解劑對(duì)肺炎支原體(MP)感染小鼠Toll樣受體2(TLR-2)、髓樣分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)信號(hào)通路的影響，探討其抗MP的作用機(jī)制。方法選擇SPF級(jí)BALB/c小鼠144只，隨機(jī)分成正常組、模型組、全方組、分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組及阿奇霉素組，每組24只。除正常組其他各組制備MP感染模型，造模成功后予藥物灌胃治療，并于感染后第3、7、10、14天進(jìn)行取材。采用蘇木精-伊紅染色觀(guān)察肺臟病理組織學(xué)改變、qPCR方法檢測(cè)肺組織中TLR-2 mRNA變化、ELISA法檢測(cè)血清中MyD88、TNF-α的含量及Western blot法檢測(cè)肺組織NF-κB的表達(dá)。結(jié)果MP感染后小鼠肺組織出現(xiàn)間質(zhì)性炎癥改變，7 d時(shí)炎癥最明顯，14 d時(shí)炎癥逐漸減輕；治療后各組肺部炎癥均有改善，尤以第10、14天全方組、阿奇霉素組明顯。MP感染后小鼠肺組織中TLR-2、NF-κB表達(dá)水平升高，血清中MyD88、TNF-α含量亦升高(P<0.05)，各項(xiàng)指標(biāo)出現(xiàn)峰值的時(shí)間不一致，其中NF-κB出現(xiàn)最早(第3天)，TLR-2、TNF-α于第7天達(dá)峰值，而MyD88則相對(duì)較晚，于第10天達(dá)峰值。第7天，全方組即起效(P<0.05)，肺組織中TLR-2、NF-κB表達(dá)水平下降，血清中MyD88、TNF-α含量亦降低；分解劑Ⅰ組在第10、14天亦能發(fā)揮類(lèi)似全方組的作用，但較全方組偏弱(P>0.05)；分解劑Ⅱ組在第14天TLR-2 mRNA表達(dá)略升高。結(jié)論清燥救肺湯抗MP感染的機(jī)制與減少促炎因子的釋放，調(diào)控TLR-2/NF-κB信號(hào)通路傳導(dǎo)有關(guān)，其中分解劑Ⅰ起主要作用。

肺炎支原體； 清燥救肺湯； TLR-2/NF-κB信號(hào)通路； 小鼠

肺炎支原體(mycoplasma pneumonia，MP)是臨床上常見(jiàn)的一種病原體，其感染引起的肺炎占小兒肺炎的20%左右，在密集人群其發(fā)病率則更高[1]。隨著研究深入，我們認(rèn)識(shí)到MP感染由多因素所致，其致病機(jī)制復(fù)雜，目前公認(rèn)的免疫炎癥機(jī)制越來(lái)越受到人們的關(guān)注[2]。Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)作為模式識(shí)別受體，通過(guò)和病原相關(guān)分子的結(jié)合，激活天然免疫，同時(shí)在機(jī)體炎癥反應(yīng)中的固有免疫應(yīng)答中也起著非常重要的作用。近年來(lái)，大量的臨床和實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)TLRs在各類(lèi)炎癥動(dòng)物模型中的表達(dá)都有顯著的升高[3]。炎癥通路TLR-2啟動(dòng)的信號(hào)通路既能激活先天免疫，也能調(diào)控后天免疫。髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)作為信號(hào)通路中的樞紐分子，介導(dǎo)了多種TLRs信號(hào)向下游傳導(dǎo)，MyD88依賴(lài)性反應(yīng)通路中參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子有MyD88、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF-α)等，最終激活核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)，而NF-κB的激活是炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)[4]。

MP感染具有燥邪致病特征，前期的研究已證實(shí)清燥救肺湯對(duì)MP有抑制作用[5]。清燥救肺湯作為治療燥熱傷肺病證的經(jīng)典方劑，具有甘涼滋潤(rùn)，清金保肺的效用。本研究以法拆方，將具有“清、宣、降”作用的藥物如桑葉、石膏、杏仁等作為分解劑Ⅰ，具有“潤(rùn)、補(bǔ)”作用的藥物如人參、阿膠、甘草等作為分解劑Ⅱ。通過(guò)觀(guān)察清燥救肺湯及其分解劑對(duì)MP感染小鼠TLR-2/NF-κB信號(hào)通路的影響以探討其抗MP的作用機(jī)制，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與菌株 選SPF級(jí)BALB/c小鼠144只，體質(zhì)量(20±2)g，雌雄各半，購(gòu)買(mǎi)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(遼)2013-0009，使用許可證號(hào)：SYXK(遼)2015-0001；MP菌株保存于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院病毒室。

1.2 藥物及制備 清燥救肺湯全方組、分解劑Ⅰ組與分解劑Ⅱ組中藥均購(gòu)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院門(mén)診藥局，相關(guān)草藥已驗(yàn)視，均為正品。清燥救肺湯全方組：桑葉、石膏、麥冬、人參、阿膠、甘草、杏仁、枇杷葉、胡麻仁；分解劑Ⅰ：桑葉、石膏、杏仁、枇杷葉；分解劑Ⅱ：人參、阿膠、甘草、胡麻仁、麥冬。供試藥液的配制：石膏水煎濃縮，阿膠烽化，藥液備用；余藥用8倍量70%乙醇加熱回流提取2次，合并藥液，回收溶劑并濃縮，分別制成含生藥1、0.61、0.39 g/mL混懸液。阿奇霉素分散片(東北制藥廠(chǎng)，批號(hào)：4170201)，配成6 g/L藥液。每組藥液分別4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 主要試劑 Trizol總RNA提取試劑(Invitrogen公司)；RT-PCR試劑盒、DEPC、DNA marker DL2000(大連寶生物公司)；小鼠TNF-α ELISA試劑盒、MyD88 ELISA試劑盒、Phospho-NF-κB P65抗體試劑盒、GAPDH、ECM Ⅱ of Western-blotting檢測(cè)試劑盒、濃縮型兔IgG二抗(武漢博士德公司)。引物根據(jù)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)[6]，TLR-2，G1：5＇-GCC ACC ATT TCC ACG GAC T-3＇；G2：5＇-GGC TTC CTC TTG GCC TGG-3＇；GAPDH，G1:5＇-ACC ACC ATG GAG AAG GCT GG-3＇，G2:5＇-CTC AGT GTA GCC CAG GAT GC-3＇，擴(kuò)增特異片段長(zhǎng)度為528 bp，由北京六合華大基因合成。

1.4 動(dòng)物分組及模型建立 144只SPF級(jí)BALB/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組、全方組、分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組、阿奇霉素組，每組24只。對(duì)各組小鼠進(jìn)行標(biāo)記稱(chēng)重。

1.5 MP感染模型制備 用乙醚將小鼠輕度麻醉后，用1 mL注射器緩慢向鼻腔中滴入1×107CCU/mL的MP菌液，每只0.1mL，接種后持小鼠呈45°靜置30 s，以利于MP菌液的充分吸入并防止窒息，連續(xù)滴鼻3 d，正常組以等量生理鹽水處理。

1.6 給藥方法 正常組和模型組灌服生理鹽水，全方組灌服清燥救肺湯全方，分解劑Ⅰ組灌服清燥救肺湯分解劑Ⅰ，分解劑Ⅱ組灌服清燥救肺湯分解劑Ⅱ，阿奇霉素組灌服阿奇霉素溶液。每日1次，每次0.3 mL，各組均灌服14 d。阿奇霉素組灌藥3 d，停藥4 d，2個(gè)循環(huán)，停藥期間蒸餾水灌胃。最后一次給藥后禁水、禁食4 h。

1.7 標(biāo)本采集與檢測(cè) 于造模后第3、7、10、14天采集標(biāo)本，稱(chēng)量體質(zhì)量后摘除眼球取血，儲(chǔ)存于促凝管中，后放入離心機(jī)中以4 000 r/min離心5 min，離心后取上層血清存于EP管中，放入-80 ℃冰箱中冷藏以備ELISA檢測(cè)。予小鼠進(jìn)行頸椎脫臼處死，取左肺放入4%多聚甲醛固定液中固定，待做病理切片，病理切片采用蘇木精-伊紅染色，于光鏡下觀(guān)察；取右肺于EP管中，-80 ℃冷凍以備qPCR、Western blot檢測(cè)。將各組小鼠肺組織取出，制造細(xì)胞懸液，用Trizol提取細(xì)胞總RNA。分析RNA的純度及完整性，檢測(cè)RNA質(zhì)量合格后，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，加入TLR-2的引物，進(jìn)行qPCR檢測(cè)。小鼠MyD88、TNF-α的ELISA試劑盒，檢測(cè)程序按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用總蛋白提取試劑提取總蛋白，離心取上清液，-20 ℃冰箱中保存。BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，用蒸餾水調(diào)整到統(tǒng)一濃度，提取液中加入5×SDS上樣緩沖液，100 ℃變性10 min，蛋白上樣每孔含10 μL，10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)膜30 min，2%牛血清白蛋白室溫封閉2 h。一抗室溫孵育2 h，4 ℃過(guò)夜，TBST緩沖液洗膜3次，每次10 min，二抗室溫孵育1 h，TBST緩沖液洗膜3次，每次10 min。ECL發(fā)光，F(xiàn)luor Chem Q蛋白質(zhì)印跡，成像系統(tǒng)顯色。

2 結(jié)果

2.1 光鏡下MP感染小鼠肺組織的病理變化 光鏡下觀(guān)察正常組：氣管管壁無(wú)充血、水腫，肺泡間隔無(wú)增寬，血管無(wú)擴(kuò)張、充血，未見(jiàn)明顯的炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)。模型組：病變區(qū)內(nèi)肺泡間隔明顯增寬，血管擴(kuò)張、充血，間質(zhì)水腫伴大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；氣管管壁及其周?chē)g質(zhì)充血，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；符合肺炎病理表現(xiàn)。全方組、阿奇霉素組：造模后第7天肺組織炎癥明顯吸收；分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組出現(xiàn)類(lèi)似模型組樣炎癥改變，但個(gè)別小鼠出現(xiàn)不同程度改善，第14天后炎癥有一定程度的減輕。見(jiàn)圖1(封三)。2.2 MP感染小鼠肺組織TLR-2基因表達(dá) MP感染后小鼠肺組織中TLR-2基因表達(dá)明顯升高，于第7天出現(xiàn)峰值，然后逐漸降低，各時(shí)間點(diǎn)均高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；阿奇霉素組肺組織中TLR-2基因表達(dá)顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第3天全方組、分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組作用不明顯(P>0.05)；第7天全方組始起效，TLR-2基因表達(dá)有所降低(P<0.05)，而分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組作用不明顯(P>0.05)，第10天分解劑Ⅰ組TLR-2基因表達(dá)亦有所降低(P<0.05)，但不如全方組顯著，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；分解劑Ⅱ組第14天TLR-2基因表達(dá)略升高。見(jiàn)表1。

2.3 MP感染小鼠血清中MyD88含量的比較 見(jiàn)表2。

表1 MP感染小鼠肺組織TLR-2 mRNA表達(dá)比較

注：與全方組比較，aP<0.05。

表2 MP感染小鼠血清MyD88的含量比較

注：與全方組比較，aP<0.05。

表2結(jié)果表明，MP感染小鼠后小鼠血清中MyD88含量明顯升高，于第10天出現(xiàn)峰值，然后逐漸降低，各時(shí)間點(diǎn)均高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；阿奇霉素組血清中MyD88含量顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第3天全方組、分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組作用不明顯(P>0.05)；第7天全方組始起效，MyD88有所降低(P<0.05)，而分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組作用不明顯(P>0.05)，第10、14天分解劑Ⅰ組MyD88含量亦有所降低(P<0.05)，但不如全方組顯著，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.4 MP感染小鼠肺組織NF-κB表達(dá)結(jié)果 見(jiàn)表3和圖2。

表3 MP感染小鼠肺組織NF-κB表達(dá)比較

注：與全方組比較，aP<0.05。

表3結(jié)果表明，MP感染后小鼠肺組織中NF-κB明顯升高，于第3天出現(xiàn)峰值，然后逐漸降低，各時(shí)間點(diǎn)均高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；阿奇霉素組肺組織中NF-κB表達(dá)顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第3天全方組、分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組作用不明顯(P>0.05)；第7天全方組始起效，NF-κB有所降低(P<0.05)，而分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組作用不明顯(P>0.05)，第10、14天分解劑Ⅰ組亦能降低NF-κB表達(dá)(P<0.05)，分解劑Ⅰ組降低NF-κB表達(dá)不如全方組顯著，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

圖2 MP感染小鼠肺組織NF-κB表達(dá)

2.5 MP感染小鼠血清中TNF-α含量比較 MP感染后小鼠血清中TNF-α含量明顯升高，于第7天出現(xiàn)峰值，然后逐漸降低，各時(shí)間點(diǎn)均高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；阿奇霉素組血清中TNF-α含量顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第3天全方組、分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組作用不明顯(P>0.05)；第7天全方組始起效，TNF-α有所降低(P<0.05)，而分解劑Ⅰ組、分解劑Ⅱ組作用不明顯(P>0.05)，第10、14天分解劑Ⅰ組TNF-α含量亦有所降低(P<0.05)，但其降低不如全方組顯著，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 MP感染小鼠血清TNF-α含量比較

注：與全方組比較，aP<0.05。

3 討論

MP作為臨床上常見(jiàn)的病原體，主要經(jīng)呼吸道感染，其發(fā)病由于MP尖端的P1蛋白黏附于纖毛上皮細(xì)胞受體上，分泌毒性物質(zhì)，破壞上皮細(xì)胞，導(dǎo)致黏膜清除功能障礙，且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，氣道上皮細(xì)胞的黏附作用、細(xì)胞的毒性作用、免疫炎癥等是目前公認(rèn)的致病機(jī)制[7-8]。在細(xì)胞免疫研究中人們發(fā)現(xiàn)MP與人類(lèi)的CD4+和Ⅱ類(lèi)主要組織相容性抗原的氨基酸序列具有同源性，可以產(chǎn)生相應(yīng)的自身抗體，與組織細(xì)胞表面TLR-2和TLR-6結(jié)合，激活NF-κB，引起炎癥反應(yīng)，促使淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞凋亡，同時(shí)大量免疫因子的消耗也加重了機(jī)體免疫功能的損傷[9]。隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)TLRS是一種廣泛存在于機(jī)體的跨膜蛋白，在機(jī)體免疫，尤其是感染免疫中具有重要意義，在其信號(hào)通路中NF-κB及TNF-α也起了重要的作用。在MP肺炎的免疫炎癥反應(yīng)中，TLRs信號(hào)通路發(fā)揮了重要的作用[10]，它屬于模式識(shí)別受體，通過(guò)識(shí)別病原體相關(guān)分子模式參與機(jī)體的免疫應(yīng)答，并觸發(fā)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而導(dǎo)致炎性介質(zhì)的釋放，在天然免疫防御中起著重要作用，并最終激活獲得性免疫系統(tǒng)。其中TLR-2表達(dá)范圍最廣，識(shí)別病原微生物及其產(chǎn)物種類(lèi)最多。TLR-2識(shí)別外源性配體或內(nèi)源性分子后，將識(shí)別信號(hào)傳遞給MyD88接頭蛋白。MyD88是該信號(hào)通路重要的轉(zhuǎn)接分子，其通路有兩條[11]：一是髓樣分化蛋白MyD88依賴(lài)途徑，另一條是非MyD88依賴(lài)途徑。在MyD88依賴(lài)的途徑中活化的TLR-2識(shí)別相應(yīng)配體，其胞內(nèi)TIR結(jié)構(gòu)域與MyD88羧基端相互作用激活MyD88，經(jīng)由信號(hào)分子TRAF6及其他相關(guān)蛋白激酶進(jìn)入下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，后經(jīng)激酶磷酸化激活NF-κB通路，誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素6、TNF-α等釋放，其中TNF-α是早期炎癥反應(yīng)最具代表性的兩個(gè)促炎細(xì)胞因子之一，在肺內(nèi)炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用[12]。本研究結(jié)果表明MP感染后小鼠肺組織中TLR-2、NF-κB表達(dá)升高，血清中MyD88、TNF-α含量也升高，各項(xiàng)指標(biāo)出現(xiàn)峰值的時(shí)間不一致，其中NF-κB出現(xiàn)最早(第3天)，TLR-2、TNF-α于第7天達(dá)峰值，而MyD88則相對(duì)較晚，于第10天達(dá)峰值。提示MP感染后TLR-2/NF-κB信號(hào)通路被激活，其峰值時(shí)間不一致可能由于激活了非MyD88依賴(lài)的途徑有關(guān)。

清燥救肺湯出自清·喻嘉言的《醫(yī)門(mén)法律》，是治“燥”的代表方劑。主治燥熱傷肺重證，所主病證的病機(jī)為外燥深入肺臟，傷陰耗氣，肺失清肅，其療效無(wú)論在實(shí)驗(yàn)還是臨床中都得到了證實(shí)。該方具有宣、清、降、潤(rùn)、補(bǔ)的特性，為明確清燥救肺湯抗MP的機(jī)制，根據(jù)配伍及功效將其拆分為分解劑Ⅰ(宣、清、降)和分解劑Ⅱ(潤(rùn)、補(bǔ))。分解劑Ⅰ由桑葉、石膏、杏仁、枇杷葉組成；分解劑Ⅱ由人參、阿膠、甘草、胡麻仁、麥冬組成。本實(shí)驗(yàn)中MP感染后小鼠肺組織中TLR-2、NF-κB表達(dá)水平升高，血清中MyD88、TNF-α含量亦升高。第7天，全方組即起效；第10天分解劑Ⅰ組亦發(fā)揮類(lèi)似清燥救肺湯全方組的作用，但較清燥救肺湯全方組偏弱；第14天分解劑Ⅱ組TLR-2基因表達(dá)水平略升高。這可能與MP感染后激活TLR-2/NF-κB信號(hào)通路，活化的TLR-2與MP表面相關(guān)蛋白結(jié)合，激活抗原提呈細(xì)胞，進(jìn)而調(diào)節(jié)固有免疫有關(guān)。清燥救肺湯全方及其分解劑Ⅰ能夠阻斷TLR-2/NF-κB信號(hào)通路傳導(dǎo)，降低細(xì)胞因子的水平，而分解劑Ⅱ則效果不顯著，可能與藥物組成有關(guān)?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)分解劑Ⅰ中的石膏具有解熱、抗炎等的作用[13]；桑葉中主要發(fā)揮抗炎的作用[14]；枇杷葉中的揮發(fā)油、黃酮類(lèi)等活性成分，具有抗炎、止咳等作用[15]；杏仁中的苦杏仁苷以及各種游離氨基酸等，具有鎮(zhèn)咳平喘、抗炎止痛等作用[16]。分解劑Ⅱ中的麥冬能提高免疫功能[17]；人參中含有的人參皂甙、生物堿、甾醇等物質(zhì)也能夠能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[18]。

清燥救肺湯抗MP感染的機(jī)制可能與調(diào)控TLR-2/NF-κB信號(hào)通路傳導(dǎo)，減少促炎因子的釋放有關(guān)，下調(diào)該通路上TLR-2、MyD88、NF-κB的表達(dá)，降低細(xì)胞因子TNF-α含量，其中清燥救肺湯分解劑Ⅰ起主要作用，而清燥救肺湯分解劑Ⅱ效果不明顯，具體機(jī)制尚待進(jìn)一步深入研究。

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InfluenceofQingzaoJiufeidecoctionanditsdecomposableagentonTLR-2/NF-κBsignalpathwayinMPinfectedmice

WUZhenqi，JIAXiaoru，MINNa，YUEZhijun，WANGXuefeng，ZHANGCongcong.

AffiliatedHospitalofLiaoningUniversityofTCM,Shenyang110032，China

ObjectiveTo observe the effect of Qingzao Jiufei decoction (QJD) and its decomposable agent on the toll-like receptors(TLR) 2/myeloid differentiation primary response gene 88 (MyD88) / (NF-κB) signal pathway in MP infected mice，and to explore its mechanism of action of resistance to MP.MethodsTotally 144 BALB/c mice, about 20 g in weight, were randomly divided into normal group(A),model group(B),QJD group(C),QJD decomposable agentⅠgroup(D),QJD decomposable agent Ⅱ group(E) and azithromycin group(F),with 24 mice in each group. Each treatment group was made into MP infection model and the corresponding group was given corresponding drugs by intragastric administration after modeling. The serum and the lung tissues were detected after 3,7,10 and 14 days of MP infection. HE staining was used to observe the pathological change of lung tissues, qPCR was used to detect the changes of TLR-2 mRNA in lung tissues, ELISA was used to detect the expressions of MyD88 and TNF-α in serum, and Western blot was used to detect the expression levels of NF-κB in lung tissues.ResultsThe interstitial inflammatory changes of lung occurred 3d after MP infection，which were most significant on the 7d，and then gradually became less and less significant. Pulmonary inflammation in each treatment group was improved, especially in Group C and Group F on the 10d and 14d. The expression level of TLR-2 and NF-κB in the lung tissue of mice after MP infection increased, and the content of MyD88 and TNF-α in serum was also increased(P<0.05).The peak time of each indicator was different with NF-κB appearing earliest (3rdday),TLR-2 and TNF-α peaking on the 7thday, while MyD88 was relatively late，peaking on the 10thday. On the 7thday in Group C(P<0.05),the expression level of TLR-2 and NF-κB in lung tissue decreased, and the content of MyD88 and TNF-α in serum was also decreased. Group D also played a similar role to Group C on the 10thday and 14thdays, but weaker than Group C (P>0.05); in Group E on the 14thday TLR-2 mRNA expression slightly increased.ConclusionThe mechanism of QJD against MP infection is associated with reducing the release of proinflammatory factors and regulating the conduction of TLR-2/NF-κB signaling pathway，in which the decomposition agent Ⅰ plays a major role.

Mycoplasma pneumoniae; Qingzao Jiufei decoction; TLR-2/NF-κB signal pathway; Mice

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81373687)；遼寧省科技廳項(xiàng)目(2014020044)

110032沈陽(yáng)，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院兒科(吳振起，岳志軍，王雪峰)；110032沈陽(yáng)，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)兒科學(xué)專(zhuān)業(yè)研究生(賈曉儒，敏娜，張聰聰)

吳振起(1974-)，男，醫(yī)學(xué)博士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：中醫(yī)藥防治感染性疾病

吳振起，E-mail：zhenqiwu@163.com

10.3969/j.issn.1674-3865.2017.06.002

R-332

A

1674-3865(2017)06-0466-06

2017-11-09)

劉穎)

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