實驗準(zhǔn)備及技術(shù)人員在提高醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教學(xué)質(zhì)量中的作用

李雪萍，潘婷婷，錢利生，袁正宏，瞿滌

復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系，醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)教育部/衛(wèi)生部重點(diǎn)實驗室，上海 200032

實驗準(zhǔn)備及技術(shù)人員在提高醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教學(xué)質(zhì)量中的作用

李雪萍，潘婷婷，錢利生，袁正宏，瞿滌

復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系，醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)教育部/衛(wèi)生部重點(diǎn)實驗室，上海 200032

實驗課是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)微生物學(xué)課程中不可或缺的部分。然而，在考慮醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)改革時，我們往往忽略了實驗課教學(xué)準(zhǔn)備工作及實驗技術(shù)人員在高質(zhì)量完成教學(xué)任務(wù)中的重要性。本文結(jié)合復(fù)旦大學(xué)2000年前、2000—2010年及現(xiàn)階段醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)改革情況，分析并討論實驗課教學(xué)準(zhǔn)備工作必須考慮的問題及所需實驗條件，提出實驗技術(shù)人員素質(zhì)及實驗課教學(xué)準(zhǔn)備在保證醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)質(zhì)量中的重要性，為醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)改革提供借鑒。

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)；醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗課；實驗準(zhǔn)備；實驗室生物安全；實驗技術(shù)人員

現(xiàn)代社會發(fā)展迅猛，新的微生物和突變微生物不斷出現(xiàn)，并引發(fā)各種新型傳染病及疾病，對人類健康和社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成重大影響。因此，給醫(yī)學(xué)生傳授醫(yī)學(xué)微生物學(xué)相關(guān)知識，對培養(yǎng)醫(yī)學(xué)專門人才、預(yù)防和控制傳染病、提高人類健康水平有積極作用。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)理論課主要講授人體健康和疾病相關(guān)病原微生物的生物學(xué)特性、致病特征、診治等理論知識，實驗操作則有助于加強(qiáng)學(xué)生的理解及理論與實踐的融會貫通，已成為現(xiàn)代《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》課程中不可或缺的部分。然而，在考慮醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)改革時，我們往往忽略了實驗課教學(xué)準(zhǔn)備工作及實驗技術(shù)人員在高質(zhì)量完成教學(xué)任務(wù)中的重要性。本文結(jié)合復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)內(nèi)容，總結(jié)和探討了實驗課教學(xué)準(zhǔn)備及實驗技術(shù)人員在保證醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)質(zhì)量中的重要性。

1 實驗教學(xué)準(zhǔn)備是醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)改革中必要考慮的因素

為培養(yǎng)學(xué)生的動手能力及發(fā)現(xiàn)問題、分析問題、解決問題能力，結(jié)合臨床實際發(fā)展需求，應(yīng)不斷改進(jìn)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)內(nèi)容。在醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗課教學(xué)改革設(shè)計和實施過程中，必須從實驗準(zhǔn)備所需條件、工作量及實驗人員綜合素質(zhì)等出發(fā)，考慮所開設(shè)實驗內(nèi)容的可行性。根據(jù)醫(yī)學(xué)科學(xué)和技術(shù)發(fā)展及臨床實踐的需要，我們在保留醫(yī)學(xué)微生物學(xué)核心實驗內(nèi)容的基礎(chǔ)上，適當(dāng)增加或調(diào)整了部分內(nèi)容(表1)。

隨著我國對實驗室生物安全管理的加強(qiáng)，我們在醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗課中也突出了生物安全教育和無菌操作培養(yǎng)，增加了相關(guān)生物安全教育和實踐內(nèi)容。因此，在準(zhǔn)備實驗材料時，應(yīng)提前購置足量的生物安全相關(guān)個人防護(hù)裝備(手套、防護(hù)服、帽子、口罩等)，保證所需用量。在實驗課前后，督促帶教教師要求學(xué)生按規(guī)范操作，進(jìn)行個人防護(hù)裝備的穿戴和脫卸以及正確的方法洗手。此外，通過參觀生物安全三級/二級(biosafety level 3/biosafety level 2，BSL-3/BSL-2)實驗室或醫(yī)院臨床檢驗科，加強(qiáng)學(xué)生的生物安全意識；通過消毒滅菌實驗，驗證不同消毒方法或消毒劑的抗菌效果，增強(qiáng)學(xué)生的生物安全實戰(zhàn)能力。

從醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教學(xué)實驗室的生物安全考慮，實驗中我們采用“腸道標(biāo)本的分離鑒定”替代涉及致病性金黃色葡萄球菌的“血標(biāo)本分離鑒定”；采用臨床常用的法國梅里埃公司生化反應(yīng)條替代原傳統(tǒng)腸道菌生化反應(yīng)(試管法)。這樣一方面減少教學(xué)準(zhǔn)備工作量，另一方面使學(xué)生實際操作經(jīng)歷從標(biāo)本采集、分離、革蘭染色、純化轉(zhuǎn)種、生化反應(yīng)、藥敏試驗到結(jié)果讀取這一臨床常規(guī)細(xì)菌檢測的全過程，提高綜合素質(zhì)。此外，因目前性病的發(fā)病率顯著升高，我們在實驗內(nèi)容中增加了臨床梅毒初篩試驗，即梅毒抗體檢測試驗——快速血漿反應(yīng)素試驗(rapid plasma reagin test，RPR)。為減少實驗準(zhǔn)備工作量，在不影響教學(xué)質(zhì)量的情況下，用“細(xì)菌耐藥質(zhì)粒接合試驗”替代 “細(xì)菌耐藥質(zhì)粒轉(zhuǎn)化試驗”；病毒學(xué)實驗中的“細(xì)胞傳代培養(yǎng)、病毒接種和病變觀察實驗”改為“正常細(xì)胞和病變細(xì)胞的顯微鏡觀察”示教。

表1醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗課程內(nèi)容的改進(jìn)及對實驗課準(zhǔn)備的要求

Tab.1Improvedmedicalmicrobiologicalexperimentalcourseandpreparationofexperiments

開設(shè)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗課內(nèi)容2000年前2000—2010年2010年后增加的理由/意義實驗?zāi)康膶嶒炚n準(zhǔn)備的要求及工作原則細(xì)菌學(xué)實驗室生物安全教育和實踐2003年SARS暴發(fā)后，我國頒布了實驗室生物安全相關(guān)法律法規(guī)，加強(qiáng)培養(yǎng)學(xué)生的生物安全意識，并進(jìn)行相應(yīng)防范參觀BSL?3/BSL?2實驗室或醫(yī)院臨床檢驗科，增加學(xué)生對實驗室生物安全的了解；病原微生物實驗操作過程中加強(qiáng)個人防護(hù)；按照法律法規(guī)要求，進(jìn)行實驗廢物的處置，定點(diǎn)回收和焚燒 細(xì)菌形態(tài)及特殊結(jié)構(gòu)觀察示教同左同左通過細(xì)菌形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)的示教，幫助學(xué)生加深理解和掌握不同病原體的致病性、免疫性、診斷及預(yù)防由于示教片易褪色和損壞，需及時更新補(bǔ)充；因購買的示教片質(zhì)量不佳，有時需實驗準(zhǔn)備人員自己制作；督促并檢查帶教老師于示教后必須及時清理示教片，同時須將示教顯微鏡鏡頭的鏡油擦干凈，歸位

續(xù)表1

續(xù)表1

續(xù)表1

表2目前不再開設(shè)的實驗內(nèi)容

Tab.2Canceledexperimentcontents

實驗名稱實驗內(nèi)容開設(shè)時間不繼續(xù)開設(shè)的原因改進(jìn)細(xì)菌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌氨芐西林耐藥質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(含抗生素平板、普通平板)1997—2005年實驗準(zhǔn)備工作量大，實驗步驟多，影響實驗結(jié)果的因素多，實驗成功率低改為耐藥質(zhì)粒接合試驗。實驗準(zhǔn)備工作量減少，學(xué)生操作成功率提高，有助于加深理解細(xì)菌種間或種內(nèi)基因水平傳遞病毒感染所致細(xì)胞病變學(xué)生操作：細(xì)胞傳代，病毒接種，觀察細(xì)胞病變1997—2011年實驗條件要求高，實驗準(zhǔn)備工作量大，對帶教教師要求高，實驗室生物安全風(fēng)險高改為示教血標(biāo)本分離鑒定(金黃色葡萄球菌)標(biāo)本分離，單菌落革蘭染色和轉(zhuǎn)種，生化反應(yīng)，藥敏試驗1990—2004年金黃色葡萄球菌致病性較強(qiáng)，實驗室生物安全風(fēng)險高改為腸道標(biāo)本分離鑒定(2000年后)細(xì)菌的生化反應(yīng)試管法，IMViC試驗1990年前實驗準(zhǔn)備工作量大，生化反應(yīng)實驗內(nèi)容有限在“腸道標(biāo)本的分離鑒定”綜合實驗中，生化反應(yīng)采用生化反應(yīng)條(API，法國梅里埃公司)藥敏試驗紙片法和試管稀釋法1997年前僅針對藥學(xué)院本科生在“腸道標(biāo)本的分離鑒定”綜合實驗中，采用紙片法藥敏試驗。面對所有醫(yī)學(xué)本科生抗“O”試驗玻片凝集試驗2005年前臨床上已很少開展抗“O”檢測改為RPR凝集試驗肥達(dá)試驗試管凝集試驗2015年前臨床上已很少開展肥達(dá)試驗流感病毒血凝與抑制試驗流感病毒血凝試驗與血凝抑制試驗2000—2013年高致病性禽流感出現(xiàn)后，活禽市場關(guān)閉，新鮮雞血采集困難，且實驗室生物安全風(fēng)險高改為示教

從實驗室生物安全、實驗準(zhǔn)備工作量及臨床實際開展的檢測項目等方面考慮，有些傳統(tǒng)的醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗已不再列入醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗課的教學(xué)內(nèi)容(表2)。如傳統(tǒng)的抗“O”試驗、肥達(dá)試驗等在臨床上已不采用，且試劑準(zhǔn)備工作量較大；因人高致病性禽流感的流行，相關(guān)管理部門關(guān)閉活禽市場，致使抗凝雞血難以獲取，同時考慮到生物安全問題，取消了原“流感病毒血凝與血凝抑制試驗”的示教。

2 實驗技術(shù)人員是保證醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教學(xué)質(zhì)量的重要組成部分

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)存在實驗內(nèi)容多、學(xué)生多等情況，每個學(xué)生要完成十多個實驗。在擁有完善醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教學(xué)條件(硬件)及充分實驗教學(xué)準(zhǔn)備工作的情況下，準(zhǔn)備實驗教學(xué)的技術(shù)人員及帶教青年教師是完成實驗教學(xué)的主體，其專業(yè)素養(yǎng)和敬業(yè)精神決定了教學(xué)質(zhì)量。

2.1 實驗教學(xué)中實驗技術(shù)人員的素質(zhì)要求

準(zhǔn)備醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)的技術(shù)人員不僅需具備較高的個人思想素養(yǎng)、扎實的專業(yè)基礎(chǔ)知識、嫻熟的操作技能，還需有嚴(yán)謹(jǐn)求實、認(rèn)真仔細(xì)的工作作風(fēng)，耐心、不計較個人得失、不講情面的工作態(tài)度及良好的溝通能力[1-2]。為了能夠做好充分的實驗教學(xué)準(zhǔn)備工作，實驗技術(shù)人員必須做到：熟悉醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗室生物安全的相關(guān)法律法規(guī)，根據(jù)國家要求與課程負(fù)責(zé)人共同制訂教學(xué)實驗室生物安全管理制度；具有良好的醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)知識；熟練掌握醫(yī)學(xué)微生物學(xué)規(guī)范操作技能；熟悉實驗內(nèi)容，做好預(yù)實驗，且必須對每個實驗步驟所用到的器材和試劑及其特性和規(guī)格了然于胸；根據(jù)實驗教學(xué)內(nèi)容的安排，整體考慮開設(shè)實驗所必須準(zhǔn)備的器材和試劑數(shù)量，并充分估計準(zhǔn)備實驗教學(xué)所需工作量，必要時及時向課程負(fù)責(zé)人尋求幫助；具有較強(qiáng)的實驗室管理能力[3-5]。

2.2 實驗技術(shù)人員在實驗帶教教師培養(yǎng)中的作用

目前，各高等院校均要求教師具有相應(yīng)的學(xué)位，并有開展科學(xué)研究的能力，但教師來源和專業(yè)背景不一(多學(xué)科)，對所任教專業(yè)缺乏系統(tǒng)培訓(xùn)。因此，對青年教師開展醫(yī)學(xué)微生物學(xué)規(guī)范操作培訓(xùn)，使其熟悉和掌握規(guī)范操作技能，已成為整個教學(xué)實驗中不可或缺的一部分。只有合格的老師才能教出合格的學(xué)生。

由于醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)的特殊性，為了保證教學(xué)質(zhì)量，實驗技術(shù)人員必須參與對帶教教師進(jìn)行系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)微生物學(xué)規(guī)范操作培訓(xùn)。培訓(xùn)內(nèi)容包括：實驗室安全(水、電、火、化學(xué))及生物安全(個人防護(hù)、污染廢物處置等)；實驗課中突發(fā)事件的應(yīng)急處置；實驗準(zhǔn)備過程及實驗課所需相關(guān)材料；規(guī)范的醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗操作技能。此外，實驗技術(shù)人員還需與課程負(fù)責(zé)人共同指導(dǎo)青年教師完成實驗課的總管任務(wù)，督促實驗課總管協(xié)助并完成相關(guān)實驗準(zhǔn)備工作，這也對進(jìn)行教學(xué)準(zhǔn)備的實驗技術(shù)人員提出了更高的要求。

2.3 實驗技術(shù)人員在實驗室安全管理中的重要作用

近年來，各地高等院校發(fā)生多次實驗室安全事故，在社會上造成不良影響。因此，實驗室的安全是確保實驗教學(xué)有序進(jìn)行的前提。目前，各單位將實驗室安全作為頭等大事來抓，由法人負(fù)責(zé)，建立層層負(fù)責(zé)的安全管理制度，各院系按照自身特點(diǎn)制訂相關(guān)實驗室安全制度。實驗技術(shù)人員在整個實驗教學(xué)過程中，除進(jìn)行大量教學(xué)準(zhǔn)備工作外，還應(yīng)對醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教學(xué)實驗室的生物安全及其他安全起執(zhí)行、監(jiān)督及管理的重要作用。

2.3.1實驗技術(shù)人員在實驗室安全管理中的職責(zé)每次實驗后，技術(shù)人員要督促帶教教師與學(xué)生做好消毒和清理工作；在學(xué)生離開實驗室后，帶教老師要再檢查一遍水、電、煤及門窗，確保做到斷水、斷電、斷煤氣、關(guān)閉門窗，并登記簽名；凡遇節(jié)假日及寒暑假，都要進(jìn)行一次安全檢查；所有配制化學(xué)藥品的容器都要貼上清晰標(biāo)簽，以標(biāo)明化學(xué)藥品的特性和潛在危險；不同化學(xué)藥品應(yīng)儲存于相應(yīng)藥品柜；裝有腐蝕性液體的容器，儲存位置應(yīng)盡可能低，并加墊收集盤，以防傾灑引起安全事故；將有可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的藥品試劑分開儲存，以防相互作用產(chǎn)生有毒煙霧、火災(zāi)，甚至爆炸；揮發(fā)性物品需特殊儲存條件，嚴(yán)禁在實驗室儲存劇毒藥品[6-7]。

2.3.2實驗技術(shù)人員在實驗室生物安全中的職責(zé)由于醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教學(xué)實驗內(nèi)容可能涉及第三類、第四類病原微生物，教學(xué)準(zhǔn)備室一般定位為生物安全二級實驗室，應(yīng)在當(dāng)?shù)匦l(wèi)生監(jiān)督所備案，并按生物安全二級實驗室要求進(jìn)行管理。實驗技術(shù)人員應(yīng)要求教師和學(xué)生不得將與實驗無關(guān)的物品帶進(jìn)實驗室；進(jìn)實驗室穿戴個人防護(hù)用品(工作服、手套、帽子，必要時戴口罩)，不可穿露腳趾鞋、背心或短褲/短裙；每個實驗室必須配備基本醫(yī)藥箱及多種消毒劑，便于實驗過程中突發(fā)狀況的應(yīng)急處理；裸露在外的傷口，必須包扎好，方可進(jìn)入實驗室；實驗過程中必須嚴(yán)格遵守實驗操作規(guī)范，碰到疑問及時請教，不得盲目操作；實驗中產(chǎn)生的各種污染廢棄物需按規(guī)定放置于不同容器，以便高壓蒸汽滅菌后送醫(yī)療廢棄物回收站；學(xué)生實驗結(jié)束后，離開實驗室前須先用消毒液浸泡手，再洗手，方可離開，嚴(yán)禁穿著防護(hù)服或戴手套進(jìn)入清潔的公共場所[8-9]。

總之，醫(yī)學(xué)微生物學(xué)是臨床醫(yī)學(xué)及相關(guān)學(xué)科的根基和橋梁，實驗教學(xué)是其重要組成部分。實驗準(zhǔn)備工作是實驗教學(xué)的基石，實驗技術(shù)人員是教學(xué)團(tuán)隊的重要成員，關(guān)系到醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)質(zhì)量及整體教學(xué)任務(wù)的完成和改革。只有充分做好醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗教學(xué)準(zhǔn)備工作，并要求實驗技術(shù)人員不斷提高專業(yè)知識水平和操作技能，才能在教學(xué)改革中發(fā)揮特長，提高教學(xué)水平，保證教學(xué)質(zhì)量。

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s. QU Di, E-mail: dqu@shmu.edu.cn；YUAN Zhenghong, E-mail: zhyuan@shmu.edu.cn

Criticalimpactsofexperimentpreparationandactivecontributionsbytechniciansinmedicalmicrobiologicalexperimentalcourse

LI Xueping, PAN Tingting, QIAN Lisheng, YUAN Zhenghong, QU Di

DepartmentofMedicalMicrobiologyandParasitology,KeyLaboratoryofMedicalMolecularVirologyofMinistriesofEducationandHealth,SchoolofBasicMedicalSciences,FudanUniversity,Shanghai200032,China

Experimental course is an essential and indispensable part of modern medical microbiology teaching. Unfortunately, in the reform of experiment teaching of medical microbiology, we often overlook the importance of the preparation of experimental course in fulfilling high-quality teaching. In this paper, we reviewed the status of medical microbiological experimental course in three stages: before 2000, 2000-2010 and 2011-present. Then we analyzed and discussed on the considerations in the preparation of experimental courses as well as the requirements of experimental conditions, and suggested that highly competent technicians play an important role in experiment teaching of medical microbiology.

Medical microbiology; Medical microbiological experimental course; Preparation of experiment; Laboratory biosafety; Laboratory technician

國家自然科學(xué)基金(81571955)，上海市精品課程項目和上海市重點(diǎn)課程建設(shè)項目(SHFDEN020131001006)

瞿滌，袁正宏

2017-08-10)

評選優(yōu)秀論文通知

為更快、更好地傳播微生物學(xué)與感染病學(xué)領(lǐng)域的研究發(fā)展和成果，提高本刊刊登的論文質(zhì)量，提升作者論文的撰寫水平，《微生物與感染》編委會決定每年舉行優(yōu)秀論文年度評選活動。從本刊當(dāng)年刊登的文章中選取優(yōu)秀論文予以表彰，設(shè)一等獎(獎金3 000元)、二等獎(獎金1 000元)，所有獎金由復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院“一健康基金”提供。獲獎?wù)叱@得獎金之外，還將獲取相應(yīng)的榮譽(yù)證書和本刊次年全年雜志。望廣大作者積極投稿。

《微生物與感染》編委會