鋅對于原發(fā)性肝細胞癌BEL-7404細胞生物學行為的影響*

鄭佳瑩， 李亞東， 鄭慶祝， 邱福南， 伍嚴安， 黃 毅△

(1福建醫(yī)科大學省立臨床醫(yī)學院， 福建省立醫(yī)院 2檢驗科， 3肝膽外科， 福建 福州350001)

鋅對于原發(fā)性肝細胞癌BEL-7404細胞生物學行為的影響*

鄭佳瑩1, 2， 李亞東1, 2， 鄭慶祝1, 2， 邱福南1, 3， 伍嚴安1, 2， 黃 毅1, 2△

(1福建醫(yī)科大學省立臨床醫(yī)學院， 福建省立醫(yī)院2檢驗科，3肝膽外科， 福建 福州350001)

目的觀察外源鋅對原發(fā)性肝細胞癌(HCC)BEL-7404細胞生物學行為的影響。方法應用TSQ鋅離子熒光探針、MTT法、DNA倍體法、吖啶橙/溴乙啶雙熒光染色法和Transwell小室法分別檢測不同濃度硫酸鋅刺激下BEL-7404細胞內鋅離子含量、細胞活力、細胞周期、細胞凋亡及細胞遷移和侵襲能力的變化。應用real-time PCR和Western blot法分別檢測不同濃度鋅離子對BEL-7404細胞白蛋白的mRNA和蛋白表達的影響。結果隨著培養(yǎng)環(huán)境中鋅離子濃度的升高，BEL-7404細胞內的鋅離子含量增加，細胞的存活率和細胞遷移與侵襲能力降低，凋亡率升高(P<0.05)；G0/G1期細胞比例降低，G2/M期細胞比例升高(P<0.05)；細胞白蛋白的mRNA和蛋白表達量增加(P<0.05)。結論外源性給予鋅離子可抑制HCC細胞的活力、遷移與侵襲能力，誘導細胞凋亡，阻滯細胞周期在G2/M期，并可能降低細胞的惡性表型。

肝細胞癌； BEL-7404細胞； 鋅

原發(fā)性肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，具有早期診斷難、治療難、易轉移、易復發(fā)和死亡率高的特點。手術切除雖然是根治HCC的首選治療方法，但由于HCC的病因和病理性質具有不同的特點，結合多種方法的綜合治療方案將更具有成效，這一點對于無法行根治術和(或)肝功能差的HCC患者來說顯得尤為重要。鋅(zinc，Zn)是體內重要的微量元素之一，人體內多種含有鋅指結構酶的關鍵組成成分與其有關[1]，涉及DNA的合成、細胞分化和基因的表達等過程。正常的肝臟是一個鋅含量豐富的器官[2]。研究表明，HCC患者癌組織的鋅濃度明顯低于癌旁組織與正常對照組肝臟組織的鋅濃度[3-6]；此外，HCC患者的血清鋅濃度亦低于其它消化道疾病或者非肝病患者[4-6]，提示HCC患者體內存在著低鋅的環(huán)境，其肝臟癌組織鋅含量的減少可能參與了疾病的發(fā)生發(fā)展進程。本研究旨在通過不同濃度鋅離子作用于人HCC細胞株BEL-7404，觀察其對于腫瘤細胞活力、細胞凋亡、細胞周期、遷移與侵襲能力和分化等生物學行為的影響，探討鋅作為一種輔助治療手段在HCC的可能應用前景。

材 料 和 方 法

1 研究對象

人HCC細胞株 BEL-7404購自中科院細胞所，以含10%胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)的RPMI-1640培養(yǎng)于37 ℃、5% CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱內。2～3 d換液傳代1次，實驗用細胞為狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞。

2 主要試劑

七水硫酸鋅(ZnSO4·7H2O，細胞培養(yǎng)級)購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；RPMI-1640、PBS和青-鏈霉素混合液(100×)均購自HyClone；FBS和胰蛋白酶(含EDTA)購自Gibco；MTT和DMSO購自Amresco；Matrigel和Transwell小室購自Corning；細胞周期檢測試劑盒購自杭州聯(lián)科生物科技有限公司；TSQ鋅離子探針和活細胞/壞死細胞/凋亡細胞鑒別試劑盒[吖啶橙(acridine orange，AO)/溴乙啶(ethidium bromide，EB)法]購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司；氯仿(分析純)、異丙醇(分析純)和無水乙醇(分析純)購自上海振興化工一廠；RevertAid First Strand cDNA Synthesis試劑盒購自Thermo Fisher Scientific；DEPC水、TRIzol和UltraSYBR Mixture (Low ROX)購自北京康為世紀生物科技有限公司；蛋白裂解液和BCA蛋白濃度測定試劑盒購自上海碧云天生物科技有限公司。所用引物由南京金斯瑞生物科技有限公司根據(jù)設計合成。

3 主要方法

3.1MTT法檢測鋅離子對BEL-7404細胞活力的影響 收集對數(shù)期細胞，調整細胞懸液濃度為2.0×107/L，每孔加入100 μL于96孔板中，邊緣用無菌PBS液填充。設計6個藥物實驗組(ZnSO4濃度分別為12.5、25、50、75、100和125 μmol/L)、1個正常對照組和1個空白組，每組設置5個復孔。37 ℃、5% CO2培養(yǎng)18～20 h。細胞貼壁培養(yǎng)18 h后，小心移去上層細胞完全培養(yǎng)基，依據(jù)實驗設計，分別加入200 μL的含有相應濃度硫酸鋅的細胞完全培養(yǎng)基，空白組保持總體積為200 μL的細胞培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)24、48和72 h。達到相應培養(yǎng)時間后，每孔加入20 μL MTT溶液，混勻， 繼續(xù)孵育4 h。小心吸棄孔內溶液，每孔加入150 μL DMSO溶解甲臜，置搖床上低速振蕩10 min，使結晶物充分溶解。用酶標儀(Thermo Multiskan MK3)測量各孔的吸光度(A)值(檢測波長為490 nm，校正波長為630 nm)，以空白對照孔調零，取3次實驗均值，繪制細胞生長曲線，計算細胞存活率。細胞存活率(%)=(A實驗組-A空白組)/(A正常對照組-A空白組)×100%。

3.2七水硫酸鋅預處理BEL-7404細胞 鋅離子提供者ZnSO4·7H2O的水溶性良好，在水溶液中可以充分地解離出二價鋅離子。配制含有七水硫酸鋅的細胞完全培養(yǎng)基，使得鋅離子的終濃度分別為50 μmol/L和100 μmol/L，作為實驗組，以不含有硫酸鋅(0 μmol/L)的完全培養(yǎng)基作為正常對照組。收集對數(shù)期細胞，調整細胞懸液濃度為5.0×107/L， 以每孔1 mL接種細胞于6孔板中，37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)20 h后，棄去原培養(yǎng)液，根據(jù)實驗設計加入含有相應濃度鋅離子的完全培養(yǎng)基，每孔2 mL。37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)48 h，以此預處理的細胞可以用于后續(xù)細胞功能學實驗。

3.3TSQ鋅離子探針檢測BEL-7404細胞內的鋅離子 細胞經(jīng)過硫酸鋅刺激48 h后，移去培養(yǎng)基，PBS洗3遍；4%多聚甲醛固定30 min，再用PBS洗3遍；加入已稀釋好的工作濃度的TSQ染液，避光染色15 min；移去染料，PBS洗3遍，加入抗熒光淬滅劑，以360 nm為激發(fā)波長，熒光倒置顯微鏡(Olympus IX53)下觀察、拍照。

3.4Transwell小室細胞遷移實驗 消化并收集鋅離子干預濃度相同的BEL-7404細胞于同一只離心管中，離心去培養(yǎng)基，PBS洗2次后，用無血清培養(yǎng)基重懸細胞，并調整細胞懸液濃度到5.0×108/L；取出Transwell小室，置于24孔板內，下室加入含有10% FBS的完全培養(yǎng)基600 μL，上室加入無血清細胞懸液100 μL。37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h；將小室的上室取出，用棉簽擦去上室內未遷移的細胞， PBS液漂洗小室2遍；用4%多聚甲醛固定上室20 min；取固定后的上室細胞，PBS漂洗2遍，適當風干后用0.5%結晶紫染色20 min，PBS漂洗2遍，風干。倒置顯微鏡(ZEISS AxioCam ERc 5s)高倍鏡下任意選取5個不相同的視野，拍照并計數(shù)細胞。

3.5Transwell小室細胞侵襲實驗 鋪膠前1 d將事先分裝好的Matrigel martrix基質膠取出， 4 ℃冰盒過夜；實驗器具-20 ℃過夜預冷；第2天用預冷過的RPMI-1640以基質膠∶RPMI-1640=1∶29的比例稀釋，迅速往每個小室的上室加入75 μL稀釋后的基質膠，37 ℃靜置3 h。消化并收集藥物干預濃度相同的BEL-7404細胞于同一只離心管中，離心去培養(yǎng)基，PBS清洗2次，用無血清培養(yǎng)基重懸細胞，并調整細胞懸液濃度到1.0×109/L；向已鋪好基質膠的Transwell小室加入無血清細胞懸液100 μL，下室加入含有10% FBS的完全培養(yǎng)基600 μL，37 ℃、5%CO2條件下培養(yǎng)48 h；將小室的上室取出，用棉簽擦去上室內未遷移的細胞， PBS液漂洗小室2遍；用4%多聚甲醛固定上室20 min；取固定后的上室細胞，PBS漂洗2遍，適當風干后用0.5%結晶紫染色20 min，PBS漂洗2遍，風干。倒置顯微鏡(ZEISS AxioCam ERc 5s)高倍鏡下任意選取5個不相同的視野，拍照并計數(shù)細胞。

3.6DNA倍體法檢測細胞周期分布 消化并收集鋅離子干預濃度相同的BEL-7404細胞于同一只離心管中，1 000 r/min離心5 min，用完全培養(yǎng)基重懸細胞，并調整細胞懸液濃度到1.0×109/L；取1 mL單細胞懸液離心，去除培養(yǎng)基，再用PBS洗2次；離心去PBS液后，加入1 mL DNA染色液(已含有PI和RNase)和10 μL破膜劑，漩渦振蕩器上振蕩5～10 s，避光30 min。在FACSCalibur流式細胞儀上對樣本進行檢測。運用Modfit軟件分析計算實驗結果。

3.7AO/EB熒光染色實驗 消化并收集鋅離子干預濃度相同的BEL-7404細胞， 1 000 r/min離心5 min，并調整細胞懸液濃度到6.0×109/L； PBS液洗滌細胞2次，將AO和EB染料等體積混合；吸取25 μL的細胞懸液同1 μL的混合染料輕輕混勻，吸取上述10 μL的混合液置于一潔凈的載玻片，并用蓋玻片蓋上細胞，熒光顯微鏡510 nm激發(fā)波長觀察，拍照記錄，并計算細胞凋亡率，一次計數(shù)的細胞總數(shù)應大于200個。細胞凋亡率(%)=(凋亡早期細胞+凋亡晚期細胞)/細胞總數(shù)×100%。

3.8Real-time PCR檢測BEL-7404細胞白蛋白(albumin，ALB)的mRNA表達 以TRIzol法提取相同濃度硫酸鋅干預后的BEL-7404細胞的總RNA，用紫外分光光度儀對RNA純度與濃度進行測定，分別取1 μg RNA按照RNA逆轉錄試劑盒的要求逆轉錄為cDNA，以SYBR GreenⅠ為熒光染料，在real-time PCR儀(ABI ViiATM7)上進行擴增。反應體系為25 μL。反應條件為：預變性95 ℃ 10 min；變性95 ℃ 15 s， 退火/延伸60 ℃ 1 min，共40個循環(huán)。熔解曲線分析條件為： 95 ℃ 15 s， 60 ℃ 1 min， 95 ℃ 15 s， 60 ℃ 15 s。以GAPDH為內參照基因，采用相對定量的方法，根據(jù)2-ΔΔCt計算公式對結果進行數(shù)據(jù)分析。擴增引物序列見表1。

表1 引物序列

3.9Western blot法檢測BEL-7404細胞白蛋白的表達 按1×105∶1的比例加入細胞裂解液提取處于對數(shù)生長期HCC細胞株BEL-7404的總蛋白，經(jīng)紫外分光光度計(Beckman DU640)測定含量后，分別取等量總蛋白99 ℃變性5 min，進行12% SDS-PAGE，電轉移至NC膜上；封閉NC膜1 h，加入相應抗體4 ℃孵育過夜，其中GAPDH和白蛋白兔抗購自CST；TBS洗滌后，加辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG(KPL)，室溫孵育1 h；TBS洗滌后加LumiGLO Chemiluminescent Substrate(KPL)室溫下孵育1 min，曝光，洗片，然后在GelDoc凝膠圖像分析儀(Bio-Rad)上掃描條帶的灰度，并以GAPDH為內參照，計算白蛋白的相對表達量。

4 統(tǒng)計學處理

采用GraphPad Prism 5.0作圖；采用IBM SPSS Statistics 23.0進行統(tǒng)計學分析。各組實驗均重復3次，所有計量資料用均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，采用Kolmogorov-Smirnov法作正態(tài)性檢驗，對符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，2組樣本均值的差異比較采用t檢驗，多組樣本行Levene方差齊性檢驗，方差齊即采用單因素方差分析(one-way ANOVA)進行組間差異的顯著性檢驗，并用LSD法或Dunnett-t檢驗進行兩兩比較；若方差不齊，采用Dunnetts’s T3和Games-Howell法進行多重比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 MTT法檢測鋅離子對BEL-7404細胞的抑制作用

以0 μmol/L的硫酸鋅作為對照組，MTT法檢測結果顯示，在加入鋅離子的第3天開始， 12.5 μmol/L組的細胞存活率開始降低(P<0.05)； 25 μmol/L組的細胞存活率則是在加入鋅離子的第2天開始降低(P<0.05)；在加入鋅離子的第1天開始，50、75、100和125 μmol/L組的細胞存活率均明顯降低(P<0.01)。此外，隨著鋅離子作用時間的延長，各實驗組細胞的存活率呈遞減趨勢,見圖1。

在發(fā)電狀態(tài)下，主電機運行在3 kV額定電壓下，超過1.5倍額定電壓下作用于跳閘。因為f=np/60（f為頻率，n為轉速，p為極對數(shù)），因為電機的極對數(shù)一定，即轉速與頻率成正比，頻率高，這就顯示轉速高，設定當f大于1.2額定頻率時，保護作用于跳閘。

Figure 1. The effect of Zn2+on the viability of BEL-7404 cells. Mean±SD.n=5.

圖1鋅離子刺激對BEL-7404細胞活力的影響

2 TSQ鋅離子探針檢測BEL-7404細胞內鋅離子

TSQ鋅離子探針與Zn2+結合后，吸收波長和發(fā)射波長分別位于360 nm和495 nm。以TSQ對經(jīng)過硫酸鋅預處理48 h的BEL-7404細胞株進行染色，在495 nm激發(fā)波長下以相同的曝光時間觀察實驗組與對照組，藍色熒光即為鋅離子所處位置，熒光強度越強，表明鋅離子含量越高。結果可見，細胞內鋅離子并非分布均勻，而是大量分布于細胞質內，僅少數(shù)位于細胞核內；隨著硫酸鋅濃度提高，藍色熒光越來越強，可見部分形成顆粒狀聚集。經(jīng)過ImageJ軟件分析所得不同硫酸鋅刺激下細胞的平均光密度進行相對定量比較，結果顯示利用50 μmol/L和100 μmol/L的硫酸鋅刺激細胞48 h后，細胞內平均光密度皆明顯高于對照組(P<0.05)，見圖2。

3 Transwell小室法檢測鋅離子對BEL-7404細胞遷移能力的影響

通過計數(shù)相同面積內穿過小室的細胞數(shù)，與預處理時不加入硫酸鋅(即0 μmol/L)的細胞比較，結果顯示50 μmol/L和100 μmol/L的硫酸鋅實驗組細胞的遷移能力隨鋅離子濃度升高而明顯降低(P<0.05)，見圖3。

4 Transwell小室法檢測鋅離子對BEL-7404細胞侵襲能力的影響

通過計數(shù)相同面積內穿過小室的細胞數(shù)，與預處理時不加入硫酸鋅(即0 μmol/L)的細胞比較，結果顯示50 μmol/L和100 μmol/L的硫酸鋅實驗組細胞的侵襲能力隨鋅離子濃度升高而明顯降低(P<0.05)，見圖3。

5 不同濃度鋅離子對BEL-7404細胞周期的影響

DNA倍體法檢測經(jīng)過硫酸鋅預處理48 h的細胞，結果顯示隨著鋅離子濃度升高，細胞處于G2/M期的比例增加，處于G0/G1期的比例減少；其中50 μmol/L組與100 μmol/L組G2/M期的細胞比例明顯高于0 μmol/L組(P<0.01)，100 μmol/L組G0/G1期的細胞比例明顯低于0 μmol/L組(P<0.05)，見圖4。

Figure 2. TSQ fluorescence staining of the BEL-7404 cells stimulated by Zn2+at different concentrations (×400). Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 μmol/L group.

圖2不同濃度硫酸鋅刺激下BEL-7404細胞TSQ熒光染色實驗

6 不同濃度鋅離子對BEL-7404細胞凋亡的影響

利用AO/EB染色法分別對經(jīng)過硫酸鋅預處理48 h的BEL-7404細胞株進行染色，熒光顯微鏡下觀察可見， 0 μmol/L組細胞絕大部分呈圓形，細胞漿與核質體被均勻染成綠色，核染色質結構正常，大小形狀較單一，為正常細胞；而在50 μmol/L硫酸鋅刺激BEL-7404細胞48 h后，鏡下可以見到一定量的核質體呈橙色，染色質固縮甚至破裂的晚期凋亡細胞；在100 μmol/L硫酸鋅處理組，鏡下可見晚期凋亡細胞明顯增多，凋亡率明顯高于0 μmol/L組(P<0.01)，見圖5。

Figure 3. The effect of Zn2+on the migration and invasion abilities of BEL-7404 cells (×200). Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 μmol/L group.

圖3鋅離子刺激對BEL-7404細胞遷移和侵襲能力的影響

Figure 4. The effect of Zn2+on the cell cycle distribution of BEL-7404 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vs0 μmol/L group.

圖4鋅離子刺激對BEL-7404細胞周期分布的影響

Figure 5. The effect of Zn2+on the cell apoptosis of BEL-7404 cells (×200). A: the images of AO/EB fluorescence staining of the cells stimulated with Zn2+at different concentrations; B: the apoptotic rate of the cells stimulated with Zn2+at different concentrations. Mean±SD.n=3.**P<0.01vs0 μmol/L group.

圖5鋅離子刺激對BEL-7404細胞凋亡的影響

7 Real-time PCR檢測鋅離子對BEL-7404細胞白蛋白 mRNA表達的影響

Real-time PCR檢測經(jīng)過硫酸鋅預處理48 h的細胞，結果顯示隨著鋅離子濃度升高，細胞白蛋白的mRNA表達水平呈現(xiàn)升高的趨勢，100 μmol/L組細胞白蛋白的mRNA表達水平與0 μmol/L組相比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖6。

Figure 6. The effect of Zn2+on the mRNA expression of albumin in BEL-7404 cells. GAPDH served as internal control. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 μmol/L group.

圖6鋅離子刺激對BEL-7404細胞白蛋白mRNA表達的影響

8 Western blot檢測鋅離子對BEL-7404細胞白蛋白表達的影響

Western blot檢測經(jīng)過硫酸鋅預處理48 h的BEL-7404細胞，結果顯示，隨著鋅離子濃度升高，細胞白蛋白的蛋白表達水平呈現(xiàn)升高的趨勢，100 μmol/L組細胞白蛋白的蛋白表達水平與0 μmol/L組相比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖7。

Figure 7. The effect of Zn2+on the protein expression of albumin in BEL-7404 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 μmol/L group.

圖7鋅離子刺激對BEL-7404細胞白蛋白表達的影響

討 論

人體正常的血清鋅濃度大約為12～16 μmol/L[2](參考值范圍隨測定方法的不同而略有起伏)。Poo 等[4]發(fā)現(xiàn)，HCC患者的血清鋅濃度低于其他消化道疾病或者非肝病患者，提示HCC患者體內存在著低鋅的環(huán)境；同時，也有研究發(fā)現(xiàn)HCC患者癌組織的鋅濃度，明顯低于癌旁組織與正常對照組肝臟組織的鋅濃度[3-7]。血清鋅水平的降低可導致HCC患者體內處于缺鋅的環(huán)境，從而影響肝臟組織鋅的含量，而這些生理變化都可能與HCC的發(fā)生發(fā)展有關。此外，哺乳動物細胞對鋅的攝取必須依靠細胞膜上的鋅轉運蛋白家族——SLC39基因家族。SLC39基因家族編碼ZIP蛋白(Zrt-and Irt-like proteins)[8]，ZIP蛋白可促進細胞外的鋅內流入細胞漿內[9]。zip14基因是SLC39基因家族成員之一，在人類肝臟組織表達豐富，對肝細胞的鋅內流起重要作用。研究表明ZIP14在HCC癌組織的表達亦呈現(xiàn)明顯下調[7]；有學者認為HCC細胞通過下調ZIP14蛋白的表達以減少細胞鋅的內流，以營造出一個更適合其增殖和轉移的低鋅環(huán)境[10]，提示HCC癌組織鋅含量的減少可能參與了疾病的發(fā)生發(fā)展進程。因此本課題組研究了不同濃度硫酸鋅刺激在體外培養(yǎng)環(huán)境下對HCC細胞BEL-7404生物學行為的影響，探討是否可以將鋅作為一種補充的治療手段，用于HCC的治療中。

TSQ鋅離子熒光探針檢測結果顯示，隨著培養(yǎng)液中添加的硫酸鋅濃度的增大，細胞被激發(fā)出的熒光強度增強，表明進入細胞內的鋅離子含量隨之增高。通過MTT檢測，我們發(fā)現(xiàn)BEL-7404細胞存活率隨著硫酸鋅濃度的升高/或培養(yǎng)時間的延長而降低，且當刺激細胞的硫酸鋅濃度達到125 μmol/L時，細胞的存活率最低，提示一定劑量的鋅對HCC細胞的活力具有抑制作用。細胞周期分析結果顯示硫酸鋅刺激細胞處于G2/M期的比例明顯增加, G0/G1期的比例減少；同時，AO/EB熒光染色實驗提示隨著刺激的鋅離子濃度升高，BEL-7404的凋亡率也隨之升高，提示BEL-7404細胞被阻滯在G2/M期后走向凋亡，這與Wang 等[11]利用硫酸鋅刺激人乳腺癌細胞株MDAMB231的研究結果有異曲同工之處。而進一步證明鋅離子刺激造成BEL-7404的凋亡及相關機制，還有待我們后續(xù)進一步展開研究。同時我們的實驗結果發(fā)現(xiàn)，隨著刺激細胞的鋅離子濃度增加，BEL-7404的遷移和侵襲能力明顯下降，預處理細胞時分別加入50 μmol/L和100 μmol/L的硫酸鋅實驗組細胞的遷移和侵襲能力皆隨鋅離子濃度升高而明顯降低。

肝細胞合成白蛋白的能力與細胞分化程度密切相關[12]，而HCC患者由于細胞的癌變，肝臟合成白蛋白的能力明顯下降。我們的研究發(fā)現(xiàn)，BEL-7404細胞白蛋白的mRNA和蛋白的表達量會隨著培養(yǎng)環(huán)境中硫酸鋅濃度的升高而升高，在高濃度鋅刺激下表現(xiàn)的尤為突出，提示鋅的刺激可能提高HCC細胞的分化程度，有助于降低其惡性表型。

綜上所述，本研發(fā)現(xiàn)鋅離子刺激可抑制HCC細胞的生長、遷移與侵襲能力，誘導細胞凋亡，阻滯細胞周期在G2/M期，并可能降低細胞的惡性表型，以上研究成果的取得為HCC輔助治療手段的發(fā)展提供了新的思路。

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Effects of zinc on biological behavior of hepatocellular carcinoma cell line BEL-7404

ZHENG Jia-ying1, 2, LI Ya-dong1, 2, ZHENG Qing-zhu1, 2, QIU Fu-nan1, 3, WU Yan-an1, 2, HUANG Yi1, 2

(1ProvincialClinicalCollege,FujianMedicalUniversity,2DepartmentofClinicalLaboratory,3DepartmentofHepatobiliarySurgery,FujianProvincialHospital,Fuzhou350001,China.E-mail:hyi8070@126.com)

AIM: To observe the effects of exogenous zinc on the biological behavior of hepatocellular carcinoma (HCC) cell line BEL-7404.METHODSBEL-7404 cells were cultured with zinc sulfate at various concentrations. The intracellular concentration of zinc, cell viability, cell cycle, cell apoptosis and migration and invasion abilities were measured by TSQ fluorescent probe, MTT assay, DNA ploid analysis, acridine orange/ethidium bromide fluorescence staining and Transwell assay, respectively. The mRNA and protein expression levels of albumin in the BEL-7404 cells were determined by real-time PCR and Western blot, respectively.RESULTSWith the elevated concentration of zinc in culture condition, the concentration of zinc in the BEL-7404 cells was increased (P<0.05). The cell viability and migration and invasion abilities were decreased, while the apoptotic rate was increased (P<0.05). The cells in G0/G1phase were decreased, while the cells in G2/M phase were increased. Additionally, the mRNA and protein expression of albumin also increased (P<0.05).CONCLUSIONThe zinc ion inhibits the cell viability as well as migration and invasion abilities, blocks the cells in G2/M phase, and may reduce cell malignant phenotype.

Hepatocellular carcinoma; BEL-7404 cells; Zinc

1000- 4718(2017)12- 2165- 07

2017- 05- 23

2017- 07- 27

福建省科技計劃重點項目(No. 2014Y0009)；福建省衛(wèi)生系統(tǒng)中青年骨干人才培養(yǎng)項目(No. 2013-ZQN-JC-2)

△通訊作者 Tel: 0591-88217895; E-mail: hyi8070@126.com

R730.23； R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.12.009

(責任編輯： 盧 萍， 羅 森)