巴西橡膠樹HbMYB62轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆和表達(dá)分析

陸燕茜 張 冬 王立豐 王紀(jì)坤

(1.海南省熱帶生物資源可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院，?？?570228； 2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所，農(nóng)業(yè)部儋州熱帶作物科學(xué)觀測試驗(yàn)站，儋州 571737)

巴西橡膠樹HbMYB62轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆和表達(dá)分析

陸燕茜1張 冬1王立豐2*王紀(jì)坤2

(1.海南省熱帶生物資源可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院，?？?570228；2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所，農(nóng)業(yè)部儋州熱帶作物科學(xué)觀測試驗(yàn)站，儋州 571737)

R2R3-MYB類轉(zhuǎn)錄因子參與包括逆境脅迫反應(yīng)等多種生物反應(yīng)。為鑒定橡膠樹中MYB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能，從橡膠樹葉片中克隆HbMYB62全長的cDNA序列。該基因片段大小為1 013 bp，包含945 bp的ORF，編碼314個(gè)氨基酸殘基。其推導(dǎo)的氨基酸序列具有植物HTH_MYB的特異性結(jié)構(gòu)域，并與擬南芥AtMYB62具有高度相似性。qRT-PCR發(fā)現(xiàn)HbMYB62主要在橡膠樹花中表達(dá)，而在樹皮、葉和乳膠中表達(dá)量較少。其葉片表達(dá)量在過氧化氫(H2O2)、脫落酸(ABA)、水楊酸(SA)等處理下顯著上調(diào)。表明HbMYB62與橡膠樹的抗逆反應(yīng)和激素信號傳導(dǎo)過程有關(guān)，為進(jìn)一步研究其結(jié)構(gòu)和功能打下基礎(chǔ)。

巴西橡膠樹；HbMYB62；機(jī)械傷害；激素；基因表達(dá)

MYB轉(zhuǎn)錄因子是植物最大的轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，參與植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和各種應(yīng)激反應(yīng)[1]。MYB類轉(zhuǎn)錄因子由3個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域組成，即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域和一個(gè)不完全界定的負(fù)調(diào)節(jié)區(qū)[2]。根據(jù)MYB結(jié)構(gòu)域重復(fù)個(gè)數(shù)，把MYB類轉(zhuǎn)錄因子分為4種類型，即單一的MYB結(jié)構(gòu)域蛋白(R1/R2)、包含2個(gè)重復(fù)的2R蛋白(R2R3)、包3個(gè)重復(fù)的3R蛋白(R1R2R3)和含4個(gè)MYB重復(fù)的4R-MYB序列[3]。R2R3-MYB蛋白構(gòu)成植物中MYB蛋白的最大的亞家族并調(diào)節(jié)植物特有的細(xì)胞功能。它們在初級和次級代謝，細(xì)胞形態(tài)和形態(tài)發(fā)生，發(fā)育過程和對植物中生物和非生物脅迫的反應(yīng)中起作用[4]。例如，AtLHY和AtCCA1參與晝夜節(jié)律控制[5]。AtCPC是根毛形成所需要的[6]。水稻OsMYBS2和OsMYBS3調(diào)節(jié)α-淀粉酶基因在糖和赤霉素信號反應(yīng)中的表達(dá)[7]，GmMYB176調(diào)節(jié)大豆中的CHS8表達(dá)和異黃酮合成[8]，AtMYBL2參與擬南芥中類黃酮生物合成和油菜素類固醇信號通路[9～10]。AtMYB62為R2R3-MYB類轉(zhuǎn)錄因子，定位在細(xì)胞核上，是磷饑餓誘導(dǎo)基因(Pi starvation-induced,PSI)的負(fù)調(diào)控因子，過表達(dá)AtMYB62能改變植株對磷饑餓的響應(yīng)，如改變根系結(jié)構(gòu)并促進(jìn)植株對Pi的吸收[11]。雖然在不同的植物物種中已經(jīng)鑒定出大量的MYB基因家族[12～16]，但大多數(shù)MYBs在植物細(xì)胞中的功能仍不清楚。

橡膠樹是橡膠制品和木材制造中最重要的天然橡膠來源[17]，天然橡膠的生產(chǎn)受到各種植物生理?xiàng)l件、環(huán)境變異和病原性疾病的影響。例如機(jī)械傷害、過氧化氫(H2O2)、植物激素和干旱等對橡膠樹的生長發(fā)育均有一定影響。橡膠樹中MYB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能研究較少，已證明HbMYB1基因在橡膠樹死皮病(tapping panel dryness,TPD)樹的樹皮中的表達(dá)顯著降低[18]，在煙草中過表達(dá)HbMYB1能抑制脅迫反應(yīng)從而引起細(xì)胞死亡[19]。為探究MYB基因在橡膠樹中的生物學(xué)功能，本研究克隆并鑒定HbMYB62的cDNA全長序列，并利用熒光定量PCR技術(shù)分析該基因表達(dá)模式，為闡明其在橡膠樹逆境抗性的功能打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

用中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所培育的巴西橡膠樹品種‘CATAS7-33-97’正常割膠的10年生成齡樹為材料，進(jìn)行MYB62基因克隆和不同組織的表達(dá)分析。用‘CATAS7-33-97’品種1～1.1m高，2年生頂棚穩(wěn)定芽接苗為材料，進(jìn)行脫落酸(abscisic acid,ABA)、水楊酸(salicylic acid,SA)、茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)、乙烯利(ethephon,ETH)、過氧化氫(hydrogen peroxide,H2O2)、干旱和機(jī)械傷害處理。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1總RNA的提取和cDNA的合成

提取巴西橡膠樹不同組織和處理樣品中的總RNA，方法參照莊海燕等的方法[20]，使用Thermo Fisher NanoDrop2000超微量核酸蛋白分析儀(Gene Company Limited,上海)檢測所提RNA的濃度、純度，并用1%甲醛變性膠電泳檢測RNA的完整性[21]。最后利用RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Revert AidTMFirst Strand c DNA Synthesis Kit,Fermentas)進(jìn)行cDNA的合成。

1.2.2克隆HbMYB62cDNA的全長

為了獲得HbMYB62的全長，設(shè)計(jì)了用于RACE的引物(表1)，通過使用由3′提供的寡聚dT-3位點(diǎn)連接引物(5′-CCAGTGAGCAGAGTGACGAGGACTCGAGCTCAAGCTTTTTTTTTTTTTTT-3′)反轉(zhuǎn)錄1μg總RNA。將3′-RACE試劑盒(Takara,Dalian,China)中的特異性引物來合成分別設(shè)計(jì)為基于MYB保守片段的引物3HbMYB62F和嵌套引物3HbMYB62R。使用通用引物(5′-CCAGTGAGCAGAGTGACG-3′)和總體積為50μL的含有2.5μL3′-ready cDNA的特異性引物3HbMYB62進(jìn)行第一輪3′-RACE，之后進(jìn)行31個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增(94℃1min，55℃1min，72℃1min)。使用通用引物(5′-GAGGACTCGAGCTCAAGC-3′)和特異性引物3HbMYB62R，在與第一輪擴(kuò)增的相同條件下將PCR產(chǎn)物稀釋10倍作為第二輪3′-RACE的模板。純化產(chǎn)物并克隆到pGEM-T easy載體中，隨后測序。

表1HbMYB62全長擴(kuò)增和熒光定量引物序列

Table1PrimerSequencesoffulllengthcloningandqRT-PCRofHbMYB62

引物名稱Primername引物序列PrimerSequence(5'-3')3HbMYB62FTCCTTGTGCTGTCTGCTA3HbMYB62RAGTAGTCCTGGCTCTTGGHbMYB62FACAAGAGACACAAGAACACTHbMYB62RTCAGACAGAATGGTGATAGCY18SFGCTCGAAGACGATCAGATACCY18SRTTCAGCCTTGCGACCATAC

1.2.3 HbMYB62生物信息學(xué)分析

利用在線工具PROSITE,ProtParam,SignalP,Tmpred,TMHMM,PSORT,Mitoprot和TargetP對HbMYB62保守結(jié)構(gòu)域和其他生物信息學(xué)進(jìn)行分析。使用NCBI保守結(jié)構(gòu)域分析網(wǎng)站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi?)和SMART(http://smart.embl-heidelberg.de/)鑒定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)[22]。ExPASy服務(wù)器上的ProtParam工具(http://web.expasy.org/compute_pi/)用于計(jì)算HbMYB62蛋白的理論等電點(diǎn)和分子量。TMHMM 2.0工具(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)用于預(yù)測HbMYB62蛋白中的跨膜螺旋[23]。使用DNAMAN軟件和ClustalX軟件進(jìn)行多個(gè)序列比對[24]。使用版本6.0的MEGA進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析[25]。

1.2.4 HbMYB62的表達(dá)分析

干旱處理采用Wang的方法[26]，在處理前采集芽接苗葉片作為處理0 d的樣品，當(dāng)天上午10:00開始干旱處理，第2天上午10:00采樣作為處理1 d之后的樣品，第3天上午10:00采樣作為處理2 d后的樣品，以此類推，采集處理3、4、5、6、7、8、9和10 d后的樣品。機(jī)械傷害處理采用Piffanelli等方法[27]，采集處理前的葉片和處理了0.5、1、2、6、10、24 h后的葉片。在芽接苗上分別噴施200 μmol·L-1(w/v)ABA,1.0%(V/V)ET,5 mmol·L-1(w/v) SA,200 mmol·L-1MeJA和2%(V/V) H2O2，所有藥劑用0.05%(V/V)乙醇進(jìn)行溶解，對照植株噴施0.05%乙醇水溶液，收集處理前和處理完成后0.5、2、6、10、24、48和72 h的葉片做進(jìn)一步表達(dá)分析。熒光定量引物為HbMYB62F、HbMYB62R、Y18SF和Y18SR(表1)，采用伯樂CFX96 TouchTMReal-Time PCR Detection System(Bio-Rad Laboratories,Inc,Hercules,California,USA)，程序?yàn)?5℃ 13 min退火，隨后40個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增(94℃ 10 s，60℃ 20 s，72℃ 30 s)。相對表達(dá)量采用伯樂熒光定量PCR儀軟件進(jìn)行分析。每批處理3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，數(shù)據(jù)為3個(gè)生物學(xué)重復(fù)和3次技術(shù)重復(fù)的均值和標(biāo)準(zhǔn)誤。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用SAS檢驗(yàn)的單因素方差分析，ANVOA和Duncan檢驗(yàn)分析差異顯著性，使用Origin數(shù)據(jù)分析和繪圖軟件OriginPro2017(Origin Lab Corporation,Massachusetts,USA)作圖。

圖1 HbMYB62基因編碼區(qū)的核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸序列Fig.1 Nucleotide and deduced amino acid sequences of HbMYB62 coding region

2 結(jié)果與分析

2.1 HbMYB62的克隆

從橡膠樹‘CATAS7-33-97’葉片中克隆得到HbMYB62 cDNA全長序列，通過PCR擴(kuò)增ORF，并測序確認(rèn)，將該cDNA命名為HbMYB62(Genbank:JQ178240.1)。其長度為1 013 bp，包含945 bp的ORF，其編碼314個(gè)氨基酸殘基，兩端為31 bp的5′-UTR(非翻譯區(qū))上游起始密碼子和55 bp的3′-UTR下游終止密碼子(圖1)。蛋白質(zhì)的分子量約為35.2 kDa，理論等電點(diǎn)(pI)為6.50。HbMYB62推導(dǎo)的氨基酸序列具有植物MYB轉(zhuǎn)錄因子家族的特異性結(jié)構(gòu)域SANT-mybDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。(圖2)，分別位于51-74氨基酸WNLLAKCAG-LRRTGKSCRLRWLNY和103-126氨基酸WSKIAQHLP-GRTDNEIKNYWRTRV處(圖3)。Ser、Leu、Asn在氨基酸序列組成中出現(xiàn)頻率較高，分別占15.6%、9.2%和6.1%，而一些氨基酸如Pyl、Sec在氨基酸序列中則沒有出現(xiàn)。通過TMHMM Server V.2.分析發(fā)現(xiàn)HbMYB62無跨膜蛋白，通過TargetP 1.1分析發(fā)現(xiàn)，HbMYB62蛋白無信號肽。采用MitoProtII、亞細(xì)胞定位分析表明其位于線粒體或者細(xì)胞核中。

該基因與其他植物桉樹EgMYB1(Eucalyptusgunnii,CAE09058)、白云杉PgMYB1(Piceaglauca,ABQ51217)、火炬松PtMYB1(Pinustaeda,AAQ62541)、豌豆PsMYB26(Pisumsativum,CAA71992)和黑云杉PmMYBF1(Piceamariana,AAA82943)的蛋白進(jìn)行同源性分析發(fā)現(xiàn)，它們的相似性分別為25.70%，23.01%，25.11%，37.50%和23.86%。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示橡膠樹HbMYB62與擬南芥的AtMYB62聚在一起，表明它們之間親緣關(guān)系最近(圖4)。

2.2 HbMYB62的表達(dá)分析

通過qRT-PCR數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，HbMYB62基因在橡膠樹花、樹皮、葉、膠乳中均有所表達(dá)，但在樹皮、葉、膠乳中表達(dá)量相對極低，花中表達(dá)量是樹皮的700倍左右(圖5)。

圖2 HbMYB62推導(dǎo)氨基酸保守結(jié)構(gòu)域Fig.2 The conserved domain of HbMYB62 deduced amino acid sequence

圖3 橡膠樹HbMYB62與其他植物MYB蛋白序列多重比對Fig.3 Multiple protein sequence alignment of HbMYB62 with other plant MYB proteins

圖4 橡膠樹HbMYB62蛋白與擬南芥中MYB家族成員的系統(tǒng)樹聚類分析Fig.4 Phylogenetic tree of HbMYB62 from rubber tree and MYB gene members from Arabidopsis with indicated GenBank accession numbers

圖5 HbMYB62基因的組織表達(dá)分析 各柱形圖上用不同大寫字母標(biāo)識表示數(shù)據(jù)間差異極顯著(P<0.01) 下同。Fig.5 Tissue expression analysis of HbMYB62 Different uppercase letters above each column means significant at P<0.01 level The same as below.

如圖6所示，HbMYB62基因的表達(dá)量在ABA作用下，0～24 h無顯著性差異，48 h時(shí)表達(dá)量顯著升高，且達(dá)到最高值，72 h時(shí)下降到處理前水平。在干旱處理下HbMYB62基因表達(dá)量在1 d無顯著性差異，2 d時(shí)表達(dá)量顯著性升高，達(dá)到最高值，為0 d的70倍左右。之后表達(dá)量下降，但相對于處理前都為上調(diào)表達(dá)。從圖中可看出，在ABA、干旱處理下，HbMYB62基因的表達(dá)量都是在處理48 h時(shí)顯著升高且達(dá)到最高值。

如圖7所示，葉片在經(jīng)機(jī)械傷害處理后，HbMYB62基因的表達(dá)量在0.5～2 h首先上調(diào)，在2 h期間表現(xiàn)出最高的表達(dá)水平，隨后下調(diào)，在10 h時(shí)又有所上調(diào)，隨著處理時(shí)間的延長，表達(dá)量逐漸下降。在H2O2處理下HbMYB62的表達(dá)量初期無顯著性變化，在6 h時(shí)表達(dá)量顯著上升，10 h時(shí)基因表達(dá)量達(dá)到最高值。HbMYB62基因的表達(dá)量在H2O2、機(jī)械傷害處理下都上調(diào)，這表明H2O2、機(jī)械傷害均正調(diào)控HbMYB62的表達(dá)。

圖6 橡膠樹葉片中HbMYB62基因在ABA(A)和干旱(B)條件下的表達(dá)分析Fig.6 Expression analysis of HbMYB62 in H.brasiliensis leaves after ABA(A) and drought(B) treatment

圖7 過氧化氫(A)和機(jī)械傷害(B)處理下HbMYB62基因的表達(dá)分析Fig.7 HbMYB62 expression analysis under H2O2(A) and mechanical wounding(B) treatment

圖8 HbMYB62基因在不同激素處理下的表達(dá)分析Fig.8 HbMYB62 expression analysis under different hormones treatment

如圖8所示，在MeJA，ETH，SA處理6 h后，橡膠樹HbMYB62表達(dá)量相對于處理前均有所上調(diào)。處理0～2 h，HbMYB62因的表達(dá)量無顯著性變化，但都在處理6 h時(shí)表達(dá)量顯著性上升，且在MeJA和SA處理6 h時(shí)基因表達(dá)量升到最高，ETH處理10 h時(shí)達(dá)到表達(dá)水平最高點(diǎn)。

3 討論

MYB類轉(zhuǎn)錄因子家族是植物中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一，廣泛參與植物細(xì)胞分化、環(huán)境因子和激素應(yīng)答等生物過程[18]，對次生代謝以及葉片等器官形態(tài)建成具有重要的調(diào)節(jié)作用[28～29]。大多數(shù)植物MYB蛋白是R2R3型。R2R3-MYB蛋白構(gòu)成植物中MYB蛋白的最大的亞家族，它們在初級和次級代謝、細(xì)胞形態(tài)和形態(tài)發(fā)生、發(fā)育過程和對植物中生物和非生物脅迫的反應(yīng)中都起到一定作用[4,30]。

橡膠樹中關(guān)于MYB結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)報(bào)道還較少，本研究克隆得到橡膠樹HbMYB62其推導(dǎo)的氨基酸序列具有植物HTH_MYB家族的特異性結(jié)構(gòu)域。與其他植物EgMYB1,PgMYB1,PtMYB1,PsMYB26和PmMYBF1的蛋白相似性分別為25.70%,23.01%,25.11%,37.50%和23.86%。通過HbMYB62蛋白與擬南芥MYB家族成員的聚類分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該蛋白與AtMYB62屬于同一分支并具有高度相似性。研究證明，AtMYB62定位在細(xì)胞核上，是一個(gè)參與低磷脅迫轉(zhuǎn)錄調(diào)控的MYB超家族轉(zhuǎn)錄因子，可能通過調(diào)控赤霉素生物合成途徑中的基因來影響植物體內(nèi)赤霉素濃度，進(jìn)而調(diào)節(jié)植物對低磷的響應(yīng)[11]。因此，預(yù)測HbMYB62蛋白和AtMYB62蛋白的功能相近,即與調(diào)節(jié)植物對低磷的響應(yīng)有關(guān)。

本研究利用qRT-PCR技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，HbMYB62在橡膠樹花、樹皮、膠乳、葉中均有表達(dá)，在花中表達(dá)量較高，但樹皮、葉、膠乳中表達(dá)量相對極低。根據(jù)HbMYB62在各組織中表達(dá)程度，表明它在花中比在樹皮、葉和膠乳中發(fā)揮著更重要的作用。在ET處理下，橡膠樹HbMYB62基因的表達(dá)量顯著上調(diào)最高能達(dá)到處理前65倍左右。乙烯對植物生長和發(fā)育等多方面都有影響，其中包括花的發(fā)育，器官的脫落和衰老等。由此推測HbMYB62基因可能參與乙烯信號途徑來調(diào)控花的發(fā)育。

與植物干旱脅迫相關(guān)的主要有MYB、NAC和MYC類等轉(zhuǎn)錄因子，基因表達(dá)分析表明，這些轉(zhuǎn)錄因子通過與順式作用元件特異結(jié)合來調(diào)控其下游基因表達(dá)的過程中存在兩種途徑：依賴ABA轉(zhuǎn)錄調(diào)控途徑以及不依賴ABA的轉(zhuǎn)錄調(diào)控途徑[31]。例如AtMYB44、AtMYB60與AtMYB2均被證實(shí)參與了植物的干旱脅迫應(yīng)答反應(yīng)。其中，AtMYB2的合成依賴于內(nèi)源ABA的積累，并通過ABA途徑參與調(diào)控干旱脅迫基因RD22的表達(dá)調(diào)控[32～34]。如圖6所示，HbMYB62基因的表達(dá)量在ABA、干旱處理的初期無顯著性差異，處理48 h時(shí)都表現(xiàn)為顯著性升高。推測HbMYB62可能在依賴ABA的轉(zhuǎn)錄調(diào)控途徑中發(fā)揮重要作用，與相應(yīng)順式作用元件結(jié)合來參與調(diào)控下游抗旱相關(guān)基因的表達(dá)。

植物在正常的生理代謝過程中都可能會(huì)有活性氧(reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生，如光合成、光呼吸、脂肪酸氧化和衰老等過程中都能自然產(chǎn)生ROS。尤其在干旱、高溫、低溫、機(jī)械損傷、強(qiáng)光照、氣體污染、真菌浸染等外界環(huán)境脅迫下會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧。越來越多的證據(jù)表明，H2O2在植物面臨環(huán)境脅迫反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用，比如應(yīng)對逆境產(chǎn)生抗病防御反應(yīng)、調(diào)控植物的生長發(fā)育、參與保衛(wèi)細(xì)胞氣孔運(yùn)動(dòng)等諸多生理過程。同時(shí)，為了減輕和防止H2O2的毒害，植物體內(nèi)已形成了復(fù)雜和有效的氧化應(yīng)激機(jī)制[35]。HbMYB62基因的表達(dá)量在H2O2、機(jī)械傷害處理下顯著上調(diào)，表明HbMYB62基因可能參與植物氧化應(yīng)激機(jī)制，并且在植物受到機(jī)械損傷時(shí)，通過此機(jī)制對植物進(jìn)行調(diào)節(jié)以應(yīng)對機(jī)械傷害。JA作為與損傷相關(guān)的植物激素和信號分子，廣泛地存在于植物體中，外源應(yīng)用能夠激發(fā)防御植物基因的表達(dá)，誘導(dǎo)植物的化學(xué)防御，產(chǎn)生與機(jī)械損傷和昆蟲取食相似的效果[36]。SA可作為植物抗病反應(yīng)所需的信號分子來激活植物防御保護(hù)機(jī)制，在植物信號傳導(dǎo)和抗逆反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。SA還可與其他植物激素如ABA、JA、ET等協(xié)同作用，保護(hù)植物[37]。在MeJA,ETH和SA作用下，橡膠樹HbMYB62基因的表達(dá)量均有所上調(diào)，推測HbMYB62基因與植物的MeJA,ET和SA的信號傳導(dǎo)過程有關(guān)，與Duan等結(jié)果一致[38]。本研究為進(jìn)一步闡明HbMYB62在橡膠樹的抗逆反應(yīng)和激素信號傳導(dǎo)過程中的功能打下基礎(chǔ)。

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National Natural Science Foundation of China(31570591,31270643)

introduction：LU Yan-Xi(1992—),female,master,mainly engaged in the study of molecular plant pathology.

date:2017-05-03

CloningandExpressionalAnalysisofHbMYB62underMulti-stimulationinHeveabrasiliensisMuell.Arg.

LU Yan-Xi1ZHANG Dong1WANG Li-Feng2*WANG Ji-Kun2

(1.Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresource,Institute of Tropical Agriculture and Forestry,Hainan University,Haikou570228；2.Danzhou Investigation and Experiment Station of Tropical Crops,Ministry of Agriculture,Rubber Research Institute,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,Danzhou571737)

R2R3-type MYB transcription factor participates in versatile biological process including stress response process. To identify the structure and function of the MYB gene in rubber tree, the full length cDNA ofHbMYB62was cloned in leaves of rubber tree. It was1013bp in length, containing a945bp ORF which encodes314amino acid residues. The deduced amino acid sequence had the specific domains of plant HTH_MYB DNA binding domain. It showed the highest identity with AtMYB62in all AtMYB family. This gene is mainly expressed in flower, whilst less expressed in bark, latex and leaf. The gene expression ofHbMYB62were differentially upregulated by H2O2, ABA, and SA. TheHbMYB62gene may play an important role in stress resistance and plant hormones signal transduction pathway in rubber tree. This study provides a fundamental knowledge for further study the structure and functions ofHbMYB62.

Heveabrasiliensis;HbMYB62;wounding;hormone;gene expression

國家自然科學(xué)基金(31570591,31270643)

陸燕茜(1992—)，女，碩士研究生，主要從事分子植物病理學(xué)研究。

* 通信作者：E-mail：lfwang@catas.cn

2017-05-03

* Corresponding author：E-mail：lfwang@catas.cn

S794.1

A

10.7525/j.issn.1673-5102.2017.06.020