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      輕度胃腸炎伴良性嬰幼兒驚厥患兒的腸道微生物檢測(cè)及部分腸黏膜屏障指標(biāo)觀察

      2017-12-12 01:29:42杜自強(qiáng)周進(jìn)蘇向秋蓮
      山東醫(yī)藥 2017年43期
      關(guān)鍵詞:輪狀病毒胃腸炎屏障

      杜自強(qiáng),周進(jìn)蘇,向秋蓮

      (南京醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院,南京 210008)

      輕度胃腸炎伴良性嬰幼兒驚厥患兒的腸道微生物檢測(cè)及部分腸黏膜屏障指標(biāo)觀察

      杜自強(qiáng),周進(jìn)蘇,向秋蓮

      (南京醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院,南京 210008)

      目的探討患兒腸道內(nèi)微生物的變化與輕度胃腸炎伴良性嬰幼兒驚厥(BICE)之間的關(guān)系。方法選擇同期收治的BICE患兒50例(A組)、急性輕度胃腸炎患兒50例(B組)以及同期進(jìn)行體檢的健康兒童50例(C組),對(duì)三組的腸道內(nèi)微生物進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)其部分腸黏膜屏障指標(biāo)進(jìn)行觀察。結(jié)果A組有24例糞便中檢出輪狀病毒(陽(yáng)性率為48.00%),B組有10例糞便中檢出輪狀病毒(陽(yáng)性率為20.00%),C組有1例糞便中檢出輪狀病毒(陽(yáng)性率為2.00%);組間兩兩相比,P均lt;0.05。 A組糞便中大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌的數(shù)量分別為(7.65±2.24)×105、(6.13±2.32)×105、(4.83±1.62)×105、(5.02±1.46)×105CFU/g,B組分別為(8.79±2.31)×105、(7.45±2.28)×105、(6.12±2.47)×105、(5.81±1.86)×105CFU/g,C組分別為(9.87±1.68)×105、(9.12±2.20)×105、(8.35±2.12×105)、(6.82±1.20)×105CFU/g;組間兩兩相比,P均lt;0.05。A組血清二胺氧化酶(DAO)、一氧化氮(NO)、D-乳酸水平分別為(9.84±4.17)U/L、(0.92±0.39)mmol/L、(156.78±48.25)μmol/L,B組分別為(7.49±2.73)U/L、(0.73±0.25)mmol/L、(102.45±40.45)μmol/L,C組分別為(6.35±1.61)U/L、(0.62±0.21)mmol/L、(86.36±30.12)μmol/L,血清DAO、NO、D-乳酸水平組間兩兩相比,P均lt;0.05。結(jié)論BICE患兒腸道內(nèi)輪狀病毒陽(yáng)性率增高、各類益生菌群數(shù)量降低及腸黏膜屏障能力降低,以上原因可能與BICE的發(fā)病有關(guān),但致病機(jī)制尚不明確。

      腸道微生物;腸道益生菌群;輪狀病毒;腸黏膜屏障;微生態(tài);輕度胃腸炎伴良性嬰幼兒驚厥;腸炎

      輕度胃腸炎伴良性嬰幼兒驚厥(BICE)是以癥狀進(jìn)行命名的一種兒科疾病,盡管已經(jīng)進(jìn)行了多年的研究,但該病的病因尚沒(méi)有統(tǒng)一的結(jié)論[1~3]。BICE在兒童罹患胃腸炎的特殊情況下才會(huì)出現(xiàn),其驚厥發(fā)作次數(shù)可以為單次,也可以為多次,一般患兒既往體健,也不會(huì)出現(xiàn)中度以上的脫水、電解質(zhì)和酸堿平衡的紊亂以及發(fā)熱的癥狀(體溫≥38 ℃)[4]。目前國(guó)際上認(rèn)為BICE的發(fā)生與腸道內(nèi)微生物的感染有著密切的聯(lián)系,包括病毒與細(xì)菌兩個(gè)方面。幾乎所有罹患BICE的患兒具有胃腸炎的臨床表現(xiàn),兒童腸道內(nèi)的微生物可以通過(guò)體內(nèi)的腦-腸軸和中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生作用,所以一般認(rèn)為兒童腸道內(nèi)的微生物失調(diào)可能對(duì)BICE的發(fā)病和進(jìn)展有著促進(jìn)作用[5,6]。目前對(duì)于罹患BICE的患兒進(jìn)行腸道內(nèi)微生物檢測(cè)的報(bào)告很少。本研究對(duì)確診的BICE患兒的腸道內(nèi)微生物進(jìn)行了檢測(cè)并對(duì)其部分腸黏膜屏障指標(biāo)進(jìn)行觀察,探討B(tài)ICE是否與腸道微生物分布變化等因素有關(guān),希望對(duì)BICE的病因研究和治療方法的開(kāi)發(fā)提供一定的理論基礎(chǔ)。

      1 資料與方法

      1.1 臨床資料 2012年12月1日~2017年2月1日南京醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院收治的BICE患兒50例(A組:男28例、女22例,年齡8個(gè)月~6歲),同期收治的急性輕度胃腸炎患兒50例(B組:男24例、女26例,年齡9個(gè)月~7歲)及進(jìn)行體檢的健康兒童50例(C組:男25例、女25例,年齡8個(gè)月~8歲)。A組納入標(biāo)準(zhǔn):①既往體健,年齡6個(gè)月~3歲;②被確診為輕度胃腸炎伴無(wú)熱驚厥,未見(jiàn)電解質(zhì)紊亂;③驚厥發(fā)作單次或多次;④驚厥發(fā)作期腦電圖異常;⑤電解質(zhì)、腦脊液檢查正常。A組排除標(biāo)準(zhǔn):①合并有中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的患兒;②合并有先天性心臟病的患兒;③已使用微生物制劑進(jìn)行治療的患兒。

      1.2 糞便輪狀病毒檢測(cè)方法 取受檢者稀便約5 mL,置具塞滅菌試管中,若糞便較稠可加入適量生理鹽水混勻。輪狀病毒檢測(cè)試條卡以雙抗體夾心法為基礎(chǔ),利用免疫層析金標(biāo)記技術(shù),快速檢測(cè)糞便中的輪狀病毒抗原,在檢測(cè)時(shí)一個(gè)抗體吸附在硝酸纖維素膜上,另一個(gè)抗體結(jié)合在膠體金顆粒表面,當(dāng)糞便樣本中含有輪狀病毒抗原時(shí),抗原先與硝酸纖維素膜上抗體結(jié)合,然后與金標(biāo)記抗體反應(yīng),形成抗體-抗原-金標(biāo)記抗體夾心式復(fù)合物,呈現(xiàn)出紫紅色沉淀線。將制備好的糞便稀釋液垂直滴加到測(cè)試卡上4~5滴,20 min之內(nèi)查看結(jié)果,測(cè)試卡出現(xiàn)兩條紫紅色沉淀線則結(jié)果為輪狀病毒陽(yáng)性,只出現(xiàn)質(zhì)控線(紫紅色)為陰性,如果不出現(xiàn)紅線則無(wú)效,重新測(cè)試。

      1.3 糞便細(xì)菌培養(yǎng)及檢測(cè)方法 稱取受檢者新鮮糞便0.3 g,10倍稀釋法稀釋,滴注法接種于非選擇性培養(yǎng)基及選擇性培養(yǎng)基上。選擇腸道菌群具有代表性的兩種需氧菌[包括大腸桿菌(EMB培養(yǎng)基)和腸球菌(TTC疊氮鈉培養(yǎng)基)],以及兩種厭氧菌[包括乳酸桿菌(LBS培養(yǎng)基)和雙歧桿菌(BS培養(yǎng)基)]。需氧菌置37 ℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h,厭氧菌置厭氧工作站37 ℃培養(yǎng)48 h,然后觀察計(jì)數(shù),記錄每克糞便所含菌群的數(shù)量。

      1.4 腸黏膜屏障指標(biāo)檢測(cè) 所有受檢者抽空腹靜脈血,用分光光度計(jì)法測(cè)定血清中二胺氧化酶(DAO),硝酸還原酶法測(cè)定血清中一氧化氮(NO),分光光度計(jì)法測(cè)定血清中D-乳酸。

      2 結(jié)果

      2.1 三組輪狀病毒陽(yáng)性率比較 A組有24例糞便中檢出輪狀病毒(陽(yáng)性率為48.00%),B組有10例糞便中檢出輪狀病毒(陽(yáng)性率為20.00%),C組有1例糞便中檢出輪狀病毒(陽(yáng)性率為2.00%);三組輪狀病毒陽(yáng)性檢出率相比,χ2=30.037,Plt;0.05;組間兩兩相比,P均lt;0.05。

      2.2 三組細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果比較 三組糞便大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌的數(shù)量相比,F(xiàn)分別為12.358、13.689、11.442、12.268,P均lt;0.05;組間兩兩相比,P均lt;0.05;詳見(jiàn)表1。

      表1 三組糞便大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌的數(shù)量比較

      注:與B組相比,*Plt;0.05;與C組相比,ΔPlt;0.05。

      2.3 三組腸黏膜屏障指標(biāo)比較 三組的DAO、NO、D-乳酸水平相比,F(xiàn)分別為15.158、27.492、25.656,Plt;0.05;組間兩兩相比,P均lt;0.05;詳見(jiàn)表2。

      表2 三組DAO、NO、D-乳酸水平比較

      注:與B組相比,*Plt;0.05;與C組相比,ΔPlt;0.05。

      3 討論

      在上個(gè)世紀(jì)末BICE才被正式命名,經(jīng)過(guò)多年的研究,目前對(duì)于BICE的認(rèn)知在世界范圍內(nèi)僅能從患兒的臨床表現(xiàn)和診斷方面達(dá)成一定的共識(shí),對(duì)于BICE的病因與發(fā)病機(jī)制尚缺乏令人信服的結(jié)論,因此對(duì)于該疾病治療方法的選擇也大多根據(jù)醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)決定,沒(méi)有可參考的標(biāo)準(zhǔn)[7,8]。本研究對(duì)罹患BICE的患兒進(jìn)行了輪狀病毒感染情況的調(diào)查,結(jié)果表明,BICE患兒糞便輪狀病毒陽(yáng)性率為48.00%。在已經(jīng)公開(kāi)的報(bào)道[9]中,BICE患兒糞便中輪狀病毒陽(yáng)性率為43%~57%,與本研究的結(jié)果大致相符。而對(duì)于單純性急性腹瀉的患兒,其糞便中輪狀病毒陽(yáng)性率一般在9%~28%,而健康兒童的輪狀病毒陽(yáng)性率不超過(guò)5%,這與本研究的結(jié)果也一致。上述結(jié)果提示BICE的發(fā)生可能與輪狀病毒的感染有著密切的關(guān)系。在國(guó)內(nèi)進(jìn)行的一項(xiàng)研究[10]表明,糞便中輪狀病毒陽(yáng)性的急性輕度胃腸炎患兒發(fā)生驚厥的概率高于10%,而輪狀病毒陰性的患兒發(fā)生驚厥的概率不超過(guò)4%。輪狀病毒引起B(yǎng)ICE的具體機(jī)制尚不清楚,需要將來(lái)進(jìn)行深入的研究探討。

      本研究結(jié)果顯示,三組患兒的糞便大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌的數(shù)量差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而且BICE患兒的菌群數(shù)量最低,正常兒童的菌群數(shù)量最高。此結(jié)果與國(guó)內(nèi)已經(jīng)報(bào)道[11]的結(jié)果相似。但是以往的研究所選擇的對(duì)照僅為健康兒童,本次研究中將健康兒童和單純急性輕度胃腸炎的患兒一起進(jìn)行比較,所得出的結(jié)果更加明顯。雖然對(duì)于導(dǎo)致這種結(jié)果的原因尚不明確,但是大量菌群數(shù)量的降低,確實(shí)對(duì)于兒童的腸道發(fā)育與健康非常不利。作為導(dǎo)致兒童出現(xiàn)急性胃腸炎的常見(jiàn)微生物,大腸桿菌與其他的主要致病菌保持著相對(duì)的平衡,此消彼長(zhǎng),比如在B組和C組中,輪狀病毒的感染率較低,大腸桿菌的數(shù)量就相對(duì)上升了。輪狀病毒可以對(duì)小腸黏膜和腸上皮細(xì)胞造成直接的破壞,使乳糖酶的活性降低,腸道內(nèi)水和電解質(zhì)平衡紊亂,葡萄糖吸收減弱,導(dǎo)致腹瀉。正是因?yàn)檩啝畈《緦?duì)于腸道的破壞作用,使小腸絨毛出現(xiàn)病理性變化,內(nèi)環(huán)境的紊亂導(dǎo)致腸道內(nèi)菌群失調(diào)[12]。但是這種變化是否在其他腸道病毒出現(xiàn)感染的情況下也會(huì)發(fā)生,則尚沒(méi)有明確答案。而腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌也是腸道內(nèi)重要的益生菌,其數(shù)量在A組患兒中也顯著降低[13],提示BICE與腸道內(nèi)環(huán)境的紊亂有著密切的聯(lián)系。

      人體腸道內(nèi)的菌群構(gòu)成復(fù)雜,相互依賴,共生共存,構(gòu)成一個(gè)完成的微生態(tài)系統(tǒng),這個(gè)完整的系統(tǒng)形成了生物屏障,并且在屏障的每層有著不同的優(yōu)勢(shì)菌[14],在屏障表層以大腸桿菌和腸球菌為主,在深層以專性厭氧菌為主,厭氧菌帖服在腸道的表面,形成一個(gè)固定的菌群。本研究結(jié)果顯示,作為生物屏障最深層的乳酸桿菌和雙歧桿菌,與正常兒童相比,BICE患兒和急性輕度胃腸炎患兒出現(xiàn)了數(shù)量的降低,提示罹患BICE的患兒,其腸道黏膜屏障功能受到了嚴(yán)重?fù)p害。在這些指標(biāo)中應(yīng)該引起關(guān)注的主要是NO,正常濃度的NO對(duì)于人體的腸道具有一定的保護(hù)作用,但是NO的濃度過(guò)高,其自身及其代謝產(chǎn)物就會(huì)介導(dǎo)腸道黏膜的損傷而導(dǎo)致腸道屏障功能出現(xiàn)障礙,所以臨床上將NO作為腸道屏障功能出現(xiàn)損壞的標(biāo)志物。NO在體內(nèi)有著很多功能,大劑量的NO有可能導(dǎo)致癲癇發(fā)作。在國(guó)外學(xué)者[15]的研究中,發(fā)現(xiàn)輪狀病毒陽(yáng)性的BICE患兒體內(nèi)NO濃度要高于其他可能引發(fā)驚厥的疾病,比如腦膜炎、腦炎等。

      BICE屬于一種自限性疾病,患兒驚厥持續(xù)時(shí)間比較短,多數(shù)患兒有多次發(fā)作的病史。一般認(rèn)為針對(duì)BICE的治療重點(diǎn)為縮短發(fā)作時(shí)間和減少發(fā)作次數(shù)。從本研究的結(jié)果進(jìn)行推論,適當(dāng)補(bǔ)充腸道菌群,對(duì)于改善BICE患兒的病情或許有著積極的意義,可能對(duì)降低NO的水平有一定幫助,但這還需要進(jìn)行深入的研究探討。

      總之,本研究結(jié)果表明, BICE患兒腸道內(nèi)輪狀病毒陽(yáng)性率增高、各類益生菌群數(shù)量降低及腸黏膜屏障能力降低,這可能與BICE的發(fā)病有關(guān),但致病機(jī)制尚不明確,需要進(jìn)行深入研究。

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      10.3969/j.issn.1002-266X.2017.43.023

      R725.7

      B

      1002-266X(2017)43-0074-03

      2017-07-11)

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