• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    永久性心房顫動(dòng)患者左心房差異基因表達(dá)譜的建立與分析

    2017-12-01 10:21:50高杰周建蘇丕雄劉巖顧松張希濤安向光
    中國(guó)循環(huán)雜志 2017年11期
    關(guān)鍵詞:竇性心心房心肌細(xì)胞

    高杰,周建,蘇丕雄,劉巖,顧松,張希濤,安向光

    臨床研究

    永久性心房顫動(dòng)患者左心房差異基因表達(dá)譜的建立與分析

    高杰,周建,蘇丕雄,劉巖,顧松,張希濤,安向光

    目的:探討與永久性心房顫動(dòng)(pAF)發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的基因和信號(hào)通路,為研究pAF發(fā)生的分子機(jī)制提供基礎(chǔ)。

    方法:用Agilent 4x44K 基因芯片分析pAF患者(n=7例)與竇性心律健康者(n=4例)的左心房組織mRNA,尋找差異表達(dá)的基因。以Gene Ontology(GO)和KEGG、Biocarta數(shù)據(jù)庫(kù)為基礎(chǔ),分析差異表達(dá)基因參與的功能和信號(hào)通路。選取差異顯著的部分基因應(yīng)用實(shí)時(shí)定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)在5例pAF患者與5例竇性心律健康者標(biāo)本進(jìn)行驗(yàn)證。

    結(jié)果:表達(dá)譜結(jié)果顯示,共有987個(gè)差異表達(dá)基因,其中567個(gè)基因表達(dá)下調(diào),420個(gè)基因表達(dá)上調(diào)。選取9個(gè)差異顯著的基因在新一組的病例標(biāo)本上應(yīng)用qRT-PCR驗(yàn)證,結(jié)果顯示均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,且改變與芯片結(jié)果一致。這些基因通過參與左心房組織纖維化、電重構(gòu)、炎癥、細(xì)胞應(yīng)激、代謝調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等與pAF的發(fā)生密切相關(guān)。GO和Pathway分析表明下調(diào)的基因主要參與調(diào)節(jié)代謝,表達(dá)上調(diào)的基因影響細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)、免疫應(yīng)答、血小板活化等過程。

    結(jié)論:通過基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)與pAF發(fā)生相關(guān)的重要基因,通過影響細(xì)胞代謝、炎癥、免疫應(yīng)答、血栓形成等參與左心房的結(jié)構(gòu)、功能重構(gòu)。

    心房顫動(dòng);基因表達(dá)譜

    我國(guó)成人心房顫動(dòng)(AF)患病率為0.64%,其中70歲以上人群高達(dá)0.89%[1]。AF增加腦卒中及其他血栓栓塞事件的發(fā)生率,約15%的腦卒中由AF引發(fā)[2],還可導(dǎo)致室性心律失常和心功能不全。目前治療AF的手段也不理想[1]。AF的發(fā)病機(jī)制是研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn),尤其永久性心房顫動(dòng)(pAF),具有高異質(zhì)性和自我延續(xù)性的特點(diǎn),其發(fā)病機(jī)制與心房的電重構(gòu)和結(jié)構(gòu)重構(gòu)、神經(jīng)體液及分子表達(dá)異常等有關(guān)[3,4]?;蛐酒治隹梢酝ㄟ^高通量途徑研究差異性表達(dá)的基因,為pAF的發(fā)生、維持提供分子依據(jù)。本研究旨在應(yīng)用基因芯片技術(shù)分析pAF患者與竇性心律健康者的左心房組織全基因表達(dá)譜,尋找與pAF發(fā)生和維持相關(guān)的基因,通過Gene Ontology(GO)和Pathway分析方法,分析與pAF發(fā)生相關(guān)的生物學(xué)過程和信號(hào)通路。

    1 資料與方法

    標(biāo)本采集及臨床資料:所有組織標(biāo)本均來(lái)自首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院心臟外科確診的7例pAF患者,4例竇性心律(SR)健康者為對(duì)照,pAF患者患病時(shí)間(47.7±25.0)個(gè)月,左心房組織取自AF射頻消融+左心耳切除術(shù)中,樣本大小約5 mm×10 mm×2 mm,為盡量減小樣本間差異,選取的心房組織均取自右肺靜脈入左心房口處。 4例竇性心律健康者的樣本組織取自心臟移植術(shù)的竇性心律的心臟供體。受試者的臨床資料見表1。獲取的樣本組織立即置于液氮罐中,由北京朝陽(yáng)醫(yī)院倫理中心批準(zhǔn),并與患者簽署知情協(xié)議書。

    表1 7例永久性心房顫動(dòng)患者和4例竇性心律健康者臨床資料

    cRNA制備、標(biāo)記、芯片雜交:每例樣本取100 mg組織,BioPulverizerTM冰凍粉碎組織,加1 ml的RNA抽提試劑Trizol(Invitrogen公司),Mini-Bead-Beater-16勻漿后抽提RNA。瓊脂糖變性凝膠電泳對(duì)樣品總RNA進(jìn)行完整性檢測(cè),NanoDrop ND-1000分光光度法定量總RNA并評(píng)估純度。RNA標(biāo)記和芯片雜交按照Agilent單色芯片基因表達(dá)分析方法進(jìn)行。cRNA合成并標(biāo)記:取1 μg總RNA轉(zhuǎn)錄合成cRNA,同時(shí)用Cy3-CTP 熒光染料標(biāo)記。使用QIAGEN RNeasy?Mini kit純化cRNA,用NanoDrop測(cè)得cRNA濃度。cRNA樣品片段化和芯片雜交:按以下配液 Cy3 cRNA 1.65g、10×Blocking Agent 11 μl、25×Fragmentation Buffer 2.2 μl、無(wú)核酸酶水補(bǔ)至總體積55 μl,在60℃溫浴30 min進(jìn)行片段化。加入55 μl 2×GEx 雜交緩沖液稀釋cRNA。取100 μl上芯片,與Agilent人全基因組(4x44K)v2 芯片 (>27 000探針)雜交,65℃,17 h,10 rpm滾動(dòng)雜交,芯片洗滌后,Agilent掃描儀中掃描,掃描儀自動(dòng)以100%和10%的光電耦合裝置各掃描一次,兩次結(jié)果Agilent軟件可自動(dòng)合并。由上??党缮锕咎峁┘夹g(shù)幫助。

    數(shù)據(jù)收集、分析:基因篩選:應(yīng)用10.7.3.1版Agilent萃取軟件,分析得到的陣列圖像,GeneSpring GX v11.5.1(Agilent)。完成篩選及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,應(yīng)用聚類分析和火山圖法分析,找到差異表達(dá)的mRNA(倍數(shù)變化>2)。

    GO和Pathway分析:按照GO將差異表達(dá)的基因分類,并依據(jù)KEGG和Biocarta數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Pathway分析,應(yīng)用Agilent GeneSpring GX 軟件的聚類分析法找出有意義的GO和Pathway。

    實(shí)時(shí)定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)驗(yàn)證:收集新一組的左心房組織標(biāo)本,其中pAF患者5例,SR健康者5例,臨床資料見表2。qRT- PCR驗(yàn)證篩選的9個(gè)差異表達(dá)的基因,樣本用RNeasy mini kit試劑盒提取總RNA,取2μg RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。SYBR Green(Thermo Fisher Scientific)法進(jìn)行qRTPCR驗(yàn)證。引物設(shè)計(jì)如表3,采用18S作為內(nèi)參,結(jié)果是3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值。

    表2 5例永久性心房顫動(dòng)患者和5例竇性心律健康者臨床資料

    表3 引物設(shè)計(jì)

    2 結(jié)果

    2.1 pAF患者和SR健康者的左心房組織的差異表達(dá)基因

    全基因組表達(dá)譜芯片結(jié)果顯示,共有987個(gè)差異表達(dá)基因,其中420個(gè)基因表達(dá)上調(diào),567個(gè)基因表達(dá)下調(diào)(圖1),與pAF相關(guān)的表達(dá)發(fā)生顯著改變前10個(gè)上調(diào)和下調(diào)基因見表4。其中,表達(dá)升高最明顯的是B型腦利鈉肽前體蛋白(NPPB),比竇性心律健康者升高30倍。

    2.2 差異表達(dá)基因的功能和代謝通路分析

    為系統(tǒng)認(rèn)識(shí)pAF差異表達(dá)基因的生物學(xué)功能,以GO、KEGG和Biocarta數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行分析。GO分析顯示下調(diào)基因的功能中有明確參與物質(zhì)代謝(圖2A),通過升高長(zhǎng)鏈脂酰CoA合成酶3(ACSL3)、長(zhǎng)鏈脂酰CoA脫氫酶(ACADL)下調(diào)脂肪酸、丙酸鹽代謝(圖2C)[5],通過下調(diào)乙酰輔酶A羧化酶β(ACCβ)、脂肪酸合成酶(FASN)使脂肪酸的合成減少。Pathway分析也顯示下調(diào)的信號(hào)通路有脂肪酸代謝、半胱氨酸和蛋氨酸代謝、酪氨酸代謝,甘油酯類代謝、丙酸鹽代謝(圖2B)。

    GO分析顯示上調(diào)基因的生物過程是細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)、免疫應(yīng)答、炎性反應(yīng)、血小板活化等,參與房顫的發(fā)生和維持機(jī)制(圖3A),例如白細(xì)胞介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF)、血小板4因子(PF4)等。其中,最重要的生物過程是免疫反應(yīng)和血小板激活(圖3C)。Pathway分析顯示上調(diào)的信號(hào)通路有細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、趨化因子信號(hào)通路、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)信號(hào)通路、細(xì)胞外基質(zhì)受體作用通路、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)(圖3B),顯示出炎癥因子、免疫反應(yīng)、心房纖維化在pAF發(fā)生和維持中的作用。同時(shí),病毒性心肌炎和肥厚性心肌病也是參與AF病理生理的因素之一。

    圖1 永久性心房顫動(dòng)患者和竇性心律健康者的左心房組織差異表達(dá)基因的熱圖(1A)和聚類分析圖(1B)

    表4 表達(dá)譜芯片顯示永久性心房顫動(dòng)患者表達(dá)顯著改變的前10個(gè)基因

    圖2 差異表達(dá)下調(diào)基因的功能和通路分析

    2.3 qRT- PCR驗(yàn)證結(jié)果

    為驗(yàn)證芯片結(jié)果,收集新一組病例:pAF患者5例和SR健康者5例心房組織病例標(biāo)本進(jìn)行qRT-PCR分析。選擇9個(gè)差異較大的感興趣目標(biāo)基因檢測(cè),分別是碳酸酐 酶 14(CA14), 細(xì)胞質(zhì)監(jiān)控基因;雷諾定受體 2(RyR2),肌漿網(wǎng)Ca2+通道受體;Delta like1同源物(DLK1),一種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子;肌球蛋白(MYH7);結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF),左心房纖維化調(diào)節(jié)因子;IL-6,炎性因子;PF4,與凝血相關(guān)的細(xì)胞因子;熱休克蛋白70 kD蛋白-2 (HSPA2),細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)蛋白;NPPB。結(jié)果顯示均有顯著性變化,且改變與芯片結(jié)果一致(表5)。

    圖3 差異表達(dá)上調(diào)基因的功能和通路分析

    表5 差異表達(dá)基因的實(shí)時(shí)定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)驗(yàn)證(結(jié)果是3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的均值)

    3 討論

    本研究通過生物芯片技術(shù)對(duì)pAF的差異表達(dá)基因進(jìn)行初步篩選,發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因987個(gè),其中420個(gè)基因表達(dá)上調(diào),567個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。GO和Pathway分析顯示下調(diào)的基因主要參與細(xì)胞代謝如脂肪酸代謝,表達(dá)上調(diào)的基因影響細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)、免疫應(yīng)答等過程。以下是本研究發(fā)現(xiàn)的AF相關(guān)基因和可能參與的AF發(fā)病機(jī)制。

    左心房結(jié)構(gòu)重構(gòu):在致病因素刺激下,左心房為維持穩(wěn)態(tài)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整,形成新的表型,稱為結(jié)構(gòu)重構(gòu)。表現(xiàn)在心房肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變、心肌間質(zhì)膠原纖維重分布及纖維化等,結(jié)構(gòu)重構(gòu)可導(dǎo)致局部心肌電活動(dòng)傳導(dǎo)異常,如使激動(dòng)傳導(dǎo)速度減慢及傳導(dǎo)曲折復(fù)雜,從而易形成較多的微折返環(huán),進(jìn)而促進(jìn)AF的發(fā)生發(fā)展[6,7]。 本研究發(fā)現(xiàn)左心房結(jié)構(gòu)蛋白發(fā)生改變,MYH7基因上調(diào)導(dǎo)致肌球蛋白由房性α-型向有收縮性質(zhì)的室性β-型轉(zhuǎn)變。心房纖維化也是結(jié)構(gòu)重構(gòu)的基礎(chǔ),本研究發(fā)現(xiàn)pAF患者CTGF顯著上調(diào),說明心肌間質(zhì)纖維化增生。Pathway分析也顯示TGF-β信號(hào)通路、ECM-受體作用通路上調(diào),提示心房纖維化結(jié)構(gòu)重構(gòu)在AF發(fā)生、進(jìn)展中的重要作用[8]。

    左心房的電重構(gòu):Ca2+離子平衡失調(diào)在AF的產(chǎn)生和維持中發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn),心肌RyR2在pAF患者表達(dá)顯著下調(diào)。正常心臟的Ca2+通過L型通道進(jìn)入細(xì)胞并通過肌漿網(wǎng)上RyR2誘導(dǎo)Ca2+釋放,作為心肌細(xì)胞內(nèi)的鈣釋放通道,RyR2對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度有重要影響。本研究顯示pAF中RyR2表達(dá)顯著下降,RyR2降低使正常心肌細(xì)胞Ca2+泄漏促進(jìn)心律失常發(fā)生。也有研究顯示在AF心肌細(xì)胞,RyR2有高磷酸化修飾,其靈敏度增加,誘發(fā)更多的Ca2+泄漏,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高,Na+-Ca2+交換增加,提高舒張期Ca2+電壓,延遲心房去極化活動(dòng),誘導(dǎo)心律失常[9]。

    左心房的脂肪酸代謝、氨基酸代謝下降:離子運(yùn)輸、心肌細(xì)胞收縮和左心房壁的高張力都可增加能源需求,pAF患者的左心房能量代謝處于高水平。雖然早期心肌細(xì)胞增殖的能量來(lái)源于糖酵解,成熟心肌細(xì)胞獲得能量的主要方式是脂肪酸β氧化。然而,在AF發(fā)生過程中,一些脂肪酸合成、分解代謝的關(guān)鍵酶發(fā)生明顯改變,如ACSL3、ACADL表達(dá)升高,而ACCβ、FASN表達(dá)減少,脂肪酸的合成、氧化分解都被下調(diào)[10]。另外,半胱氨酸和甲硫氨酸代謝、酪氨酸代謝,甘油酯類代謝、丙酸鹽代謝也下調(diào)。Mayr等[11]發(fā)現(xiàn)心臟術(shù)后超過80%的患者如心肌代謝不正常都會(huì)導(dǎo)致AF,因此,在pAF發(fā)生中代謝功能障礙可能起重要作用。作為補(bǔ)償,在AF早期,通過糖酵解增加能源,在冠狀動(dòng)靜脈的乳酸增加和一些糖酵解轉(zhuǎn)錄因子上調(diào)也證明了這一點(diǎn)。Mayr等[11]用核磁共振波譜法發(fā)現(xiàn)在pAF患者心房組織β-羥基丁酸、生酮氨基酸的水平上升。從脂肪酸到葡萄糖的代謝轉(zhuǎn)換和酮體負(fù)反饋調(diào)節(jié)中,反映出AF患者左心房的高代謝狀態(tài)。β受體阻滯劑可以改善心肌代謝、減少心肌葡萄糖吸收、減輕心肌收縮和冠狀動(dòng)脈血流從而減少心肌氧耗和代謝,從而減輕AF的臨床癥狀。

    炎癥:目前研究提示炎癥在AF的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)IL-6在AF的左心房組織中表達(dá)超過正常2倍,作為多效性細(xì)胞因子,IL-6可能來(lái)源于免疫相關(guān)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞,可以刺激纖維蛋白原和C反應(yīng)蛋白的合成,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的活化和損傷[12,13]。另有報(bào)道提示腫瘤壞死因子(TNF)的過表達(dá)可以下調(diào)Cx40,從而縮短有效不應(yīng)期并易產(chǎn)生房性心律失常[14]。另外,C反應(yīng)蛋白可能和AF有密切聯(lián)系,如Avikes等[15]在大規(guī)模前瞻性的隊(duì)列研究中發(fā)現(xiàn)C反應(yīng)蛋白 升高可以作為預(yù)測(cè)AF發(fā)生的獨(dú)立因素。同時(shí),GO分析顯示細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、趨化因子信號(hào)通路也上調(diào),提示炎癥因子活化與AF發(fā)生密切相關(guān)。

    本研究篩選出了一些與心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)、電重構(gòu)密切相關(guān)的基因,為進(jìn)一步探索pAF發(fā)病的分子機(jī)制及相關(guān)信號(hào)通路提供了線索。

    [1] Magnani JW, Rienstra M, Lin H, et al. Atrial fibrillation: current knowledge and future directions in epidemiology and genomics.Circulation, 2011, 124:1982-1993.

    [2] Wijffels MC, Kirchhof CJ, Dorland R, et al. Atrial fibrillation begets atrial fibrillation: A study in awake chronically instrumented goats.Circulation, 1995, 92: 1954-1968.

    [3] Thijssen VL, Ausma J, Borgers M. Structural remodeling during chronic atrial fibrillation: act of programmed cell survival. Cardiovasc Res, 2001, 52: 14-24.

    [4] Hoit BD, Shao Y, Gabel M, et al. Left arterial mechanical and biochemical adaptation to pacing induced heart failure. Cardiovasc Res, 1995, 29: 469-474.

    [5] Poppelreuther M, Rudolph B, Du C, et al. The N-terminal region of acyl-CoA synthetase 3 is essential for both the localization on lipid droplets and the function in fatty acid uptake. J Lipid Res, 2012, 53:888-900.

    [6] Ohki R, Yamamoto K, Ueno S, et al. Gene expression profiling of human atrial myocardium with atrial fibrillation by DNA microarray analysis. Int J Cardiol, 2005, 102: 233-238.

    [7] Kim NH, Ahn Y, Oh SK, et al. Altered pattems of gene expression in response to chronic artial fibrillation. Int Heart J, 2005, 46: 383-395.

    [8] Gu J, Liu X, Wang QX, et al. Angiotensin II increase CTGF expression via MAPKs/TGF-beta1/TRAF6 pathway in atrial fibroblasts. Exp Cell Res, 2012, 318: 2105-2115.

    [9] Voigt N, Li N, Wang Q, et al. Enhanced sarcoplasmic reticulum Ca2+leak and invreased Na+-Ca2+exchanger function underlie delayed afterdepolarizations in patients with chronic atrial fibrillation.Circulation, 2012, 125: 2059-2070.

    [10] Poppelreuther M, Rudolph B, Du C, et al. The N-terminal region of acyl-CoA synthetase 3 is essential for both the localization on lipid droplets and the function in fatty acid uptake. J Lipid Res, 2012, 53:888-900.

    [11] Mayr M, Yusuf S, Weir G, et al. Combined metabolomic and proteomic analysis of human atrial fibrillation. J Am Coll Cardiol, 2008, 51: 585-594.

    [12] Kaski JC, Arrebola-Moreno AL. Inflammation and thrombosis in atrial fibrillation. Rev Esp Cardiol, 2011, 65: 551-553.

    [13] Marcus GM, Whooley MA, Glidden DV, et al. Interleukin-6 and atrial fibrillation in patients with coronary artery disease: data from the Heart and Soul Study. Am Heart J, 2008, 155: 303-309.

    [14] Guo Y, Lip GY, Apostolakis S. Inflammation in atrial fibrillation. J Am Coll Cardiol, 2012, 60: 2263-2270.

    [15] Avikes RJ, Martin DO, Apperson-Hansen C, et al. Inflammation as a risk factor for atrial fibrillation. Circulation, 2003, 108: 3006-3010.

    2017-03-21)

    (編輯:許菁)

    Establishment and Analysis for Differential Gene Expression Profile of Left Atrium in Permanent Atrial Fibrillation Patients

    GAO Jie, ZHOU Jian, SU Pi-xiong, LIU Yan, GU Song, ZHANG Xi-tao, AN Xiang-guang.

    Department of Cardiac Surgery, Beijing Chaoyang Hospital, Capital Medical University, Beijing (100020), China

    AN Xiang-guang, Email: anxiangguang@sina.com

    Objective: To explore the relevant gene, signaling pathway for permanent atrial fi brillation (pAF) occurrence in order to provide the molecular basis of the pathogenesis of pAF.

    Methods: Our research included in 2 groups: pAF group, n=7 patients and Control group, n=4 healthy subjects with sinus rhythm. Agilent 4x44K microarray was used to analyze the mRNA in left atrium for differential gene expression prof i le.Based on Gene Ontology, KEGG and Biocarta databases, differentially expressed genes were studied for their relevant function and signaling pathway. Furthermore, the genes with signif i cant differences were verif i ed by quantitative real time PCR (qRT-PCR) in pathological specimen from 5 pAF patients and 5 normal heart donors.

    Results: The expression prof i le identif i ed 987 abnormally expressed genes, 567 of them were down-regulated and 420 were up-regulated. 9 genes with signif i cant differences were verif i ed by qRT-PCR in pathological specimen and the changes were similar to microarray; those genes were closely related to pAF by involving left atrium fi brosis, electrical remodeling,inflammation, cellular stress response, metabolism and transcription regulation. GO and Pathway analysis indicated that down-regulated genes were mainly involved in metabolic processes; up-regulated genes had the effects on cellular stress response, immune response and platelet activation.

    Conclusion: Microarray technology identif i ed some important genes related to pAF occurrence; such genes involved in left atrial structural and functional remodeling via affecting cellular metabolism, inflammation, immune response and thrombogenesis in relevant patients.

    Atrial fi brillation; Gene expression prof i le

    北京市教委科技面上項(xiàng)目(SQKM201410025018)

    100020 北京市,首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院 心外科

    高杰 副主任醫(yī)師 博士 主要從事心律失常學(xué)研究 Email:gaojie19750824@163.com 通訊作者:安向光 Email:anxiangguang@sina.com

    R54

    A

    1000-3614(2017)11-1085-06

    10.3969/j.issn.1000-3614.2017.11.010

    (Chinese Circulation Journal, 2017,32:1085.)

    猜你喜歡
    竇性心心房心肌細(xì)胞
    神與人
    左歸降糖舒心方對(duì)糖尿病心肌病MKR鼠心肌細(xì)胞損傷和凋亡的影響
    活血解毒方對(duì)缺氧/復(fù)氧所致心肌細(xì)胞凋亡的影響
    心房破冰師
    竇性心動(dòng)過緩是怎么回事?
    左心房
    戲劇之家(2018年35期)2018-02-22 12:32:40
    花開在心房
    心肌細(xì)胞慢性缺氧適應(yīng)性反應(yīng)的研究進(jìn)展
    槲皮素通過抑制蛋白酶體活性減輕心肌細(xì)胞肥大
    竇性心率震蕩在不同罪犯血管急性心肌梗死后惡性心律失常中的作用
    日本黄色日本黄色录像| 中文字幕高清在线视频| 欧美日韩精品网址| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产一区二区激情短视频 | 交换朋友夫妻互换小说| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| netflix在线观看网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲av欧美aⅴ国产| 女人精品久久久久毛片| 国产av国产精品国产| 性色av一级| 另类亚洲欧美激情| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲免费av在线视频| 中文字幕av电影在线播放| 黄网站色视频无遮挡免费观看| avwww免费| 99国产综合亚洲精品| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 搡老岳熟女国产| 叶爱在线成人免费视频播放| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 妹子高潮喷水视频| 亚洲国产日韩一区二区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲国产最新在线播放| 精品亚洲成a人片在线观看| videosex国产| 一级毛片我不卡| 老司机影院成人| 免费黄频网站在线观看国产| 黄频高清免费视频| 精品久久蜜臀av无| 丝袜脚勾引网站| av在线老鸭窝| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 国产日韩欧美在线精品| 久久99一区二区三区| 777米奇影视久久| 我要看黄色一级片免费的| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 天堂中文最新版在线下载| 国产97色在线日韩免费| 曰老女人黄片| 人妻 亚洲 视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| av网站在线播放免费| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产成人欧美在线观看 | 一级片免费观看大全| 国产激情久久老熟女| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲第一av免费看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 午夜久久久在线观看| 手机成人av网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 亚洲三区欧美一区| 国产免费又黄又爽又色| 满18在线观看网站| 中文字幕最新亚洲高清| 少妇粗大呻吟视频| 女人久久www免费人成看片| 精品熟女少妇八av免费久了| 美国免费a级毛片| 精品亚洲成国产av| 亚洲七黄色美女视频| 99热网站在线观看| 热re99久久国产66热| 十八禁高潮呻吟视频| 久久国产精品大桥未久av| 久久这里只有精品19| 亚洲国产最新在线播放| 日本欧美视频一区| 国产成人影院久久av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 涩涩av久久男人的天堂| 精品福利永久在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 午夜免费鲁丝| 亚洲伊人色综图| 丝袜美腿诱惑在线| 国产男人的电影天堂91| 国产视频一区二区在线看| 国产一卡二卡三卡精品| 嫁个100分男人电影在线观看 | 久久久国产欧美日韩av| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 日本vs欧美在线观看视频| 国产成人免费观看mmmm| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产精品一区二区免费欧美 | 在线看a的网站| 香蕉国产在线看| 极品人妻少妇av视频| 欧美大码av| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲 国产 在线| 一个人免费看片子| 在线精品无人区一区二区三| 视频区欧美日本亚洲| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 大香蕉久久网| e午夜精品久久久久久久| 老司机影院成人| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美日韩av久久| 亚洲视频免费观看视频| 中文欧美无线码| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久久久久久国产电影| 天天操日日干夜夜撸| 中文字幕最新亚洲高清| 久久精品国产a三级三级三级| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲国产精品一区三区| 日本五十路高清| 欧美xxⅹ黑人| 午夜免费鲁丝| 涩涩av久久男人的天堂| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 男女之事视频高清在线观看 | 久久久国产欧美日韩av| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久 成人 亚洲| 精品亚洲成国产av| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲av片天天在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 桃花免费在线播放| 久久精品久久久久久久性| 90打野战视频偷拍视频| 久久久国产一区二区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 叶爱在线成人免费视频播放| 一级毛片电影观看| 乱人伦中国视频| 久久99一区二区三区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲伊人色综图| 男的添女的下面高潮视频| 国产一区二区 视频在线| 亚洲图色成人| 51午夜福利影视在线观看| 最黄视频免费看| 9191精品国产免费久久| 1024香蕉在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 超碰97精品在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 国产精品人妻久久久影院| 一级黄色大片毛片| 国产熟女欧美一区二区| 日本av手机在线免费观看| 午夜免费成人在线视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产免费视频播放在线视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品国产乱码久久久久久小说| 大片免费播放器 马上看| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | av天堂在线播放| 欧美精品一区二区大全| 精品卡一卡二卡四卡免费| 男人添女人高潮全过程视频| 国产一区二区三区av在线| netflix在线观看网站| 赤兔流量卡办理| 最黄视频免费看| 五月天丁香电影| 欧美黄色片欧美黄色片| 成人三级做爰电影| 自线自在国产av| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 丁香六月欧美| 热99久久久久精品小说推荐| 精品欧美一区二区三区在线| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲七黄色美女视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| av在线app专区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 99国产综合亚洲精品| 成人影院久久| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产精品成人在线| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 黄片小视频在线播放| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 黄色视频不卡| 欧美大码av| 午夜福利视频在线观看免费| 麻豆国产av国片精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲一码二码三码区别大吗| 99久久综合免费| 国产av一区二区精品久久| 精品国产乱码久久久久久小说| 老司机在亚洲福利影院| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 啦啦啦在线免费观看视频4| 青春草视频在线免费观看| 一区在线观看完整版| 欧美国产精品va在线观看不卡| 十八禁网站网址无遮挡| 伦理电影免费视频| h视频一区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产成人欧美| 欧美精品一区二区大全| 老司机深夜福利视频在线观看 | 国产熟女午夜一区二区三区| 丝袜脚勾引网站| 老司机影院毛片| 国产高清国产精品国产三级| 美女午夜性视频免费| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 国产主播在线观看一区二区 | 国产午夜精品一二区理论片| 色综合欧美亚洲国产小说| 999久久久国产精品视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产在线视频一区二区| 国产高清国产精品国产三级| 国产主播在线观看一区二区 | 另类亚洲欧美激情| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产极品粉嫩免费观看在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日韩电影二区| 亚洲国产欧美在线一区| 久久久国产欧美日韩av| 少妇人妻久久综合中文| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产成人影院久久av| 老司机深夜福利视频在线观看 | 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美成人精品欧美一级黄| 美女大奶头黄色视频| 亚洲av片天天在线观看| 99国产精品免费福利视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 无遮挡黄片免费观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 一二三四在线观看免费中文在| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 一区二区三区乱码不卡18| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 精品一区二区三卡| 国产精品亚洲av一区麻豆| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 女性被躁到高潮视频| videosex国产| 在线观看免费高清a一片| 高清视频免费观看一区二区| 久久热在线av| 热99久久久久精品小说推荐| 免费av中文字幕在线| 无遮挡黄片免费观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 午夜两性在线视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日韩一本色道免费dvd| 99国产精品一区二区三区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲第一青青草原| 欧美精品av麻豆av| 一区二区日韩欧美中文字幕| 91麻豆av在线| 国产真人三级小视频在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 十八禁人妻一区二区| 曰老女人黄片| 亚洲av欧美aⅴ国产| 我要看黄色一级片免费的| 90打野战视频偷拍视频| 色播在线永久视频| 看十八女毛片水多多多| 国产成人a∨麻豆精品| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 男女国产视频网站| 久热这里只有精品99| 大码成人一级视频| 国产免费又黄又爽又色| 午夜激情久久久久久久| 国产又爽黄色视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 乱人伦中国视频| 亚洲人成电影免费在线| 成年av动漫网址| 制服诱惑二区| 老司机靠b影院| 超色免费av| 好男人电影高清在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产成人精品久久久久久| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产在线免费精品| 国精品久久久久久国模美| 一二三四社区在线视频社区8| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 少妇被粗大的猛进出69影院| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 精品人妻1区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 婷婷成人精品国产| 后天国语完整版免费观看| 亚洲成人免费电影在线观看 | 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲伊人久久精品综合| 男女午夜视频在线观看| 女人精品久久久久毛片| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲综合色网址| 久久精品国产a三级三级三级| 国产极品粉嫩免费观看在线| 妹子高潮喷水视频| 欧美在线一区亚洲| 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | av线在线观看网站| 精品久久久久久电影网| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 免费在线观看黄色视频的| 久久久久久人人人人人| 视频区图区小说| 91字幕亚洲| bbb黄色大片| 久久久久久人人人人人| 国产一区二区在线观看av| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产麻豆69| 亚洲精品一区蜜桃| 各种免费的搞黄视频| 精品亚洲成国产av| 一级片'在线观看视频| 日韩电影二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 日韩欧美一区视频在线观看| av一本久久久久| 赤兔流量卡办理| 伦理电影免费视频| 在线精品无人区一区二区三| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产欧美亚洲国产| 丝袜美足系列| 免费观看av网站的网址| 女性被躁到高潮视频| 大型av网站在线播放| 一本久久精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美精品一区二区免费开放| 18禁观看日本| 两人在一起打扑克的视频| 日本五十路高清| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 涩涩av久久男人的天堂| av网站在线播放免费| 欧美黑人精品巨大| 亚洲精品国产色婷婷电影| 午夜免费男女啪啪视频观看| 欧美久久黑人一区二区| 五月开心婷婷网| 国产成人a∨麻豆精品| 国产男女超爽视频在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产亚洲av高清不卡| 中文欧美无线码| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲色图综合在线观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 操出白浆在线播放| 97在线人人人人妻| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 赤兔流量卡办理| 欧美久久黑人一区二区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 午夜日韩欧美国产| 国产亚洲精品久久久久5区| 男人爽女人下面视频在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 久久久精品区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 91成人精品电影| 一级片'在线观看视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品第一国产精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 啦啦啦 在线观看视频| 大片免费播放器 马上看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 丰满饥渴人妻一区二区三| 91国产中文字幕| 18禁观看日本| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲精品一二三| 亚洲色图综合在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 丝袜脚勾引网站| 大香蕉久久成人网| 亚洲专区中文字幕在线| 国产一区亚洲一区在线观看| 蜜桃在线观看..| av在线播放精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 日本欧美国产在线视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产成人精品无人区| 一二三四在线观看免费中文在| 久久九九热精品免费| 91字幕亚洲| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看 | 精品免费久久久久久久清纯 | 日本一区二区免费在线视频| 精品亚洲成国产av| 久久ye,这里只有精品| 久久鲁丝午夜福利片| 美国免费a级毛片| 老鸭窝网址在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产免费又黄又爽又色| 久久久久久久久免费视频了| 欧美日韩综合久久久久久| 9热在线视频观看99| 日本av免费视频播放| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 大码成人一级视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久精品国产综合久久久| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 天天操日日干夜夜撸| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 丰满迷人的少妇在线观看| h视频一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 老汉色∧v一级毛片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 夫妻性生交免费视频一级片| 高清不卡的av网站| 国产一区二区三区综合在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 精品人妻在线不人妻| 高清av免费在线| 国产精品久久久av美女十八| 99久久精品国产亚洲精品| 精品人妻1区二区| 亚洲伊人久久精品综合| 久久精品国产a三级三级三级| 少妇人妻 视频| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品一区二区在线观看99| 国产成人免费无遮挡视频| 九草在线视频观看| 久久99热这里只频精品6学生| 久久av网站| 丰满迷人的少妇在线观看| 18禁国产床啪视频网站| av国产精品久久久久影院| 国产免费现黄频在线看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 最黄视频免费看| 国产日韩欧美在线精品| 精品少妇久久久久久888优播| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 性色av一级| 成人国语在线视频| 18禁国产床啪视频网站| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 好男人电影高清在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 成年人免费黄色播放视频| 欧美性长视频在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 国产一区有黄有色的免费视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久国产精品影院| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 欧美在线一区亚洲| 亚洲三区欧美一区| 99精品久久久久人妻精品| 久久精品国产a三级三级三级| 99热国产这里只有精品6| 热re99久久精品国产66热6| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 最近手机中文字幕大全| 成在线人永久免费视频| 亚洲av片天天在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品熟女久久久久浪| 男女下面插进去视频免费观看| 手机成人av网站| 这个男人来自地球电影免费观看| 性色av一级| 亚洲人成电影免费在线| 韩国精品一区二区三区| 桃花免费在线播放| 亚洲第一av免费看| 男女边吃奶边做爰视频| 国产一卡二卡三卡精品| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产在线免费精品| 91九色精品人成在线观看| 精品免费久久久久久久清纯 | 人妻一区二区av| 超碰成人久久| 欧美日韩一级在线毛片| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 国产伦理片在线播放av一区| 9色porny在线观看| 深夜精品福利| xxxhd国产人妻xxx| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 中文字幕av电影在线播放| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 丰满少妇做爰视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产黄色视频一区二区在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产高清视频在线播放一区 | 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲第一青青草原| 亚洲色图综合在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 成人亚洲精品一区在线观看| 无限看片的www在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 丝袜人妻中文字幕| 又紧又爽又黄一区二区| 只有这里有精品99| 黄色 视频免费看| 人人妻人人澡人人看| 免费在线观看影片大全网站 | 激情五月婷婷亚洲| 亚洲,欧美精品.| 高清不卡的av网站| 香蕉丝袜av| 手机成人av网站| 欧美成狂野欧美在线观看| 好男人电影高清在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久久精品免费免费高清| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 日韩大码丰满熟妇| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 成年女人毛片免费观看观看9 | 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日韩一本色道免费dvd| 丝袜喷水一区| 在线观看免费高清a一片| 91国产中文字幕| h视频一区二区三区| 亚洲精品国产av成人精品| 免费在线观看黄色视频的| 熟女av电影| 亚洲精品日本国产第一区| 精品国产一区二区久久| 亚洲av美国av|